ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUA

Se puede definir el anlisis microbiolgico como el conjunto de

operaciones encaminadas a determinar los microorganismos
presentes en una muestra problema de agua.

FACTORES QUE INCIDEN EN LA FLORA BACTERIANA

DISMINUCION DEL CONTENIDO MICROBIANO
La acidez
oxgeno disuelto
Las sales
La filtracin
Los protozoos fagocitan bacterias
La turbidez ya que los rayos UV no manifiestan su accin y as
disminuyen el nmero de estas.
INCREMENTO
La materia orgnica
Si existe poca cantidad de sales se estimula el desarrollo
bacteriano.
La temperatura puede aumentar o disminuir el contenido bacteriano.

 El inters se centra en los

microorganismos
patgenos,
que son los diferentes tipos de
bacterias, virus, protozoos y
otros
organismos,
que
transmiten enfermedades

ENFERMEDAD

AGENTE

ORIGEN BACATERIANO
Fiebres tifoideas y
paratifoideas

Salmonella typhi,
Salmonella
Paratyphi A y B

Disentera bacilar

Shigella

clera

Vibrio cholerae

Gastroenteritis
agudas y diarreas

Escherichia coli.
Campylobacter
Yersiniae
nterocolitica
Salmonella sp
Shigellas

ANLISIS MICROBIOLGICO:
BACTERIAS COLIFORMES
Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la
familia Enterobacteriaceae, de morfologa bacilar, Gram negativas,
aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y
que fermentan la lactosa con produccin de cido de 30 a 37C en 24-48
horas.
Del grupo coliformes forman parte varios
gneros:
Escherichia, Enterobacter, Klebsiella,

Citrobacter.
Escherichia coli produce dolor abdominal,
diarrea, nauseas, vmitos y fiebre.
Klebsiella produce enfermedades
respiratorias.
Citrobacter produce alteraciones a nivel del
colon y a nivel intestinal

Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero tambin

en otros ambientes: suelo, plantas, cscara de huevo, etc.
Aunque su especificidad como indicadores no es buena, se suelen usar
como ndice de contaminacin fecal por:
Su frecuencia en heces.
Su fcil deteccin en el laboratorio.
Sus caractersticas semejantes, en algn aspecto, a las de algunos
miembros patgenos de la familia Enterobacteriaceae.
Dentr, de este grupo, son los coliformes fecales los que tienen significado
sanitario y, por consiguiente, los que ms interesan en el anlisis
microbiolgico de alimentos.

Se considera a los coliformes fecales como presuntos Escherichia

coli. Sus principales caractersticas son:
- Capacidad para desarrollarse entre 43,5-45,5 C.
- Capacidad para crecer en presencia de sales biliares.
- Facultad para producir indol en agua de peptona.
En general, niveles altos de Enterobacteriaceae lactosa-positivas
(coliformes) indican manipulacin y elaboracin deficientes de los
alimentos.

MTODOS DE DETERMINACIN DEL NMERO

DE MICROORGANISMOS

Mtodos del nmero ms probable

(NMP).
Mtodo de filtro de membrana
Mtodo de la placa vertida
Mtodo de ttulo

Mara Cecilia Arango

Jaramillo

MTODOS PARA DETECTAR COLIFORMES

Mtodo del nmero ms probable (NMP).

Basado en probabilidad estadistica
No es contaje directo
Tcnica lquida

Slido
Contaje directo en medio

MTODO DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)

Puede tambin utilizarse 5 tubos para NMP Aumenta la exactitud
EXACTITUD Cuan cercano a los valores reales
PRECISION Cuan cercano son los nmeros uno al otro
Asegrarse de usar la tabla apropiada

Se asume en el NMP:
Distribucin al azar de la bacteria
Los organismos no se aglutinan
Si hay un microorganismo presente, crecera
Existen las condiciones apropiadas para crecer

MTODO DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)

El objetivo es diluir el organismo
Paralelamente varias series

decimales de dilucin (mnimo

tres) en medio de cultivo
lquido.
Determine el Nmero de tubos
con crecimiento NMP, tablas de
McRady, 100 ml de muestra

MUESTRA
1 ml

1 ml

10-1

1 ml

10-2

10-3

B.G.B.L

Incubacin a 35C durante 24-48h.

MTODO:
El mtodo consiste en desarrollar solo una prueba presuntiva en el que
una reaccin negativa excluye la presencia del grupo coliforme.

PROCEDIMIENTO:
Preparar 3 tubos con 9 ml de agua peptonada cada uno.
Realizar diluciones decimales expresados en 10 -1, 10-2, 10-3.

PRUEBA PRESUNTIVA

Inoculacin en caldo lactosado

No produccin de gas
Fin de la prueba

Produccin de gas +

Prueba Confirmativa

Resiembra a partir de los tubos positivos caldo lactosado

Siembra de muestras + en EMB
Colonias pequeas, con centro oscuro y
brillo metlico +

O Siembra en tubos con CLVBB

Produccin de gas +

Terminacin de la prueba

Colonias ms tpicas de siembra por estra EMB

Coloracin de Gram: Bacilos Gram - no
esporulados

PROCEDIMIENTO (Prueba presuntiva)

Inocular 3 o 5 tubos con 10 mL de caldo lactosado (a los que se les

aade un tubo de Durham invertido) con 1 ml de cada dilucin.

Incubar a 35C (+/-1C) durante 24 48h.

LECTURA E INTERPRETACIN.
Si se observa crecimiento bacteriano, se registra como reaccin positiva
aquellos que muestren turbidez y formacin de gas en el interior del tubo
invertido (tubo de Durham).

PROCEDIMIENTO (Prueba confirmativa)

La formacin de gas y turbidez son resultados presuntivos de coliformes y es
necesario realizar pruebas confirmativas, resembrar cada uno de los tubos
con reaccin positiva a tubos con caldos para prueba confirmativas segn
sea la determinacin para coliformes totales, coliformes fecales
termotolerantes y/o E. coli.
Para confirmar la presencia de organismos coliformes, incubar los tubos con
caldo lactosa bilis verde brillante resembrados a 35 C 1C y examinar la
produccin de gas en un periodo de 24 h a 48 h 3 h.

LECTURA E INTERPRETACIN.
Si se observa crecimiento bacteriano, se registra como reaccin positiva
aquellos que muestren turbidez y formacin de gas en el interior del tubo
invertido (tubo de Durham).
Lectura: En las tablas del N.M.P. (tres series de tres tubos). Son
positivos los tubos que presentan gas en la campana Durham

EXPRESIN DE RESULTADOS.
Con el nmero de tubos de las
pruebas confirmativas que hayan
dado reacciones positivas, calcule el
nmero ms probable de organismos
coliformes, organismos coliformes
termotolerantes y E. coli en 100 mL de
muestra, refirindose a las tablas
estadsticas del NMP

NMP
por100 mL