Diagnstico

PCR-RFLP (Polimorfismo de longitud de

fragmentos de restriccin)
El gen en el que los investigadores estn interesados est localizado tan cerca del
RFLP que su presencia puede servir como indicador de la alteracin en el gen.
A veces, un RFLP en particular puede estar asociado con el alelo sano. Por esto es
esencial examinar no slo al paciente, sino a todos los miembros de la familia que
sea posible.
La muestra del sujeto sometido al diagnstico hibridar con distintas longitudes de
DNA digerido de diferentes personas dependiendo de los sitios de corte de la
enzima que haya heredado.
Algunas personas sern homocigotos y presentarn una nica banda, otros sern
heterocigotos y presentarn una banda distinta por cada alelo

PCR Cuantitativa de Ciclo Rpido

Este mtodo, que combina hibridacin de una sonda con la

transferencia de energa resonante nos permite monitorizar
la amplificacin del producto y genotipar el Factor V de
Leiden durante una PCR de ciclo rpido en menos de treinta
minutos, sin que sea necesario por ejemplo, un posterior
anlisis de restriccin o electroforesis.
Por tanto, la principal ventaja de esta tcnica, adems de
su rapidez, es que no necesita una manipulacin posterior
del fragmento amplificado.

Multiplex PCR-RFLP
Esta prueba se utiliza para detectar al mismo tiempo el factor
Leiden y el factor de laprotombina.
Se aaden dos parejas de cebadores dirigidos a amplificar ambos
genes. Adems, estos oligos se disean de manera que el oligo
del extremo 3' si se tiene el alelo mutado sustituye una base,
formando un sitio de corte para la enzima de restriccin HindIII:
mutagnesis dirigida.
En cambio, si no aparece la mutacin no se introduce ningn sitio
de corte. As, tras la digestin, las bandas obtenidas sern de
distinto tamao, si hay mutacin o no, y podremos identificar
sujetos que presenten homocigocidad o heterocigocidad para
una o las dos mutaciones.

SSP-PCR
Se realiza una PCR especifica de secuencia lo cual se utiliza un cebador
en uno de los extremos, mientras que para el otro extremo se aaden dos
cebadores que difieren en el extremo 3' porque van a tener una base
diferente para poder unirse a la cadena mutada o a la normal.
Al realizar la PCR podremos encontrar fragmentos ms grandes cuando se
une el oligo especfico para la mutacin que es el de mayor tamao y
otros ms pequeos, que corresponden al alelo silvestre porque el oligo
que se una al extremo 3' de la cadena normal era de menor tamao.
Esta tcnica presenta una gran limitacin que la hace una mala prueba
diagnstica, y es que si se produce una deleccin de este gen en un alelo,
no se podra distinguir de un individuo homocigtico para la mutacin o
de un individuo homocigtico normal, ya que solo se detecta la presencia
o ausencia de bandas.
A pesar de este error de diseo de la prueba, sigue siendo una de las
ms usadas para la deteccin de la mutacin del factor V por ser muy
econmica.

TRATAMIENTO
Se recomienda utilizar heparina de bajo peso molecular como
la enoxaparina en las embarazadas con FVL con historia de
abortos de repeticin.
La deltaparina en combinacin con dosis bajas de aspirina
disminuye la pre eclampsia en un 20% y el riesgo de retraso del
crecimiento fetal en 30%.