Transaminasas

La reaccin de aminotransferasa ocurre en dos pasos:

1.- el grupo amino de un aminocido es transferido a la enzima,
produciendo el correspondiente a-ceto cido y la enzima aminada.
2.- el grupo amino es transferido al a-ceto cido aceptor (ej. Alfacetoglutarato) formando el producto aminocido (ej. Glutamato) y
regenerando la enzima
Para transportar al grupo amino, las aminotransferasas requieren de
la participacin de una coenzima que contiene un aldehdo, el
fosfato de piridoxal (PLP) que es un derivado de
la piridoxina (vitamina B6)

Transaminasas

 La reaccin es idntica para alanina y aspartato

Alanina transaminasa

 Fundamento
La alanina aminotransferasa (ALT o GPT) cataliza la
transferencia del grupo amino de la alanina al 2oxoglutarato, formando piruvato y glutamato.
La
concentracin
cataltica
se
determina,
empleando la reaccin acoplada de la lactato
deshidrogenasa (LDH), a partir de la velocidad de
desaparicin del NADH, medido a 340 nm.

1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de

reaccin.
. 2. Pipetear en una cubeta:
Temperatura de reaccin

37C

30C

Reactivo de Trabajo

1,0 mL

1,0 mL

Muestra

50 L

100 L

. 3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronmetro en

marcha.
. 4. Pasado 1 minuto (Nota 1), anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas
lecturas cada minuto durante 3 minutos.
. 5. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio (A/min).

Tcnica

Valores de referencia

 Elevadas cantidades
Hepatitis
Otra enfermedades hepticas asociadas con
necrosis:
Mononucleosis infecciosa, cirrosis, carcinoma
metastsico del hgado

Utilidad clnica

Aspartato transaminasa

 La aspartato aminotransferasa (AST o GOT) cataliza la

transferencia del grupo amino del aspartato al 2oxoglutarato, formando oxalacetato y glutamato. La
concentracin cataltica se determina, empleando la
reaccin acoplada de la malato deshidrogenasa (MDH), a
partir de la velocidad de desaparicin del NADH, medido
a 340 nm

FUNDAMENTO DEL MTODO

 COMPOSICIN A.
A Reactivo: Tris, L-aspartato, malato deshidrogenasa,
lactato deshidrogenasa, hidrxido sdico , pH 7,8.
B. Reactivo
NADH 1,3, 2-oxoglutarato, hidrxido sdico, sodio
azida

 MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar.
La aspartato aminotransferasa en suero es estable 7 das a
2-8C

 1. Precalentar el Reactivo de Trabajo (B sobre A) y el

instrumento a la temperatura de reaccin.
2. Pipetear en una cubeta:

Mtodo

3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro.

4. Poner el cronmetro en marcha.
5. Pasado 1 minuto , anotar la absorbancia inicial y
efectuar nuevas lecturas cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el incremento de absorbancia por minuto
promedio (A/min).

La concentracin de AST/GOT en la muestra se calcula a partir de la

siguiente frmula general:

El coeficiente de absorcin molar () del NADH a 340 nm es 6.300

El paso de luz (l) es 1 cm
El volumen total de reaccin (Vt) es 1,05 a 37C y 1,1 a 30C,
El volumen de muestra (Vs) es 0,05 a 37C y 0,1 a 30C
1 U/L equivale a 0,0166 kat/L

Clculos

Se deducen los siguientes factores para calcular la

concentracin cataltica:

 La lipemia (triglicridos 2 g/L) y la hemlisis pueden

afectar los resultados.

 DX de hepatitis y otras enfermedades hepticas asociadas con necrosis:

Mononucleosis infecciosa( enfermedad infecciosa causada por el virus de
Epstein Barr)
Cirrosis
Colestasis ( ictericia o coloracin amarilla de piel y mucosas.)
Carcinoma metastsico del hgado
Delirium tremens
Administracin de algunos medicamentos:
Antibiticos como las tetraciclinas, sulfonamidas, isoniazid (INH), sulfametoxazole,
trimetoprim, nitrofurantoin, etc.
Frmacos para el colesterol como el "statins" y la niacina.
Frmacos cardiovasculares como amiodarone, hidralazine, quinidine, etc.

Utilidad clnica

 Se encuentran concentraciones sricas elevadas de AST

despus de un infarto de miocardio, en enfermedades del
msculo esqueltico (como la distrofia muscular
progresiva), en pancreatitis aguda, enfermedades
hemolticas y otras