ANTICUERPOS

POLICLONALES - MONOCLONALE
S

Reactivo Anti-D
Tipificacin sangunea en bancos de sangre
Basado en la aglutinacin de glbulos rojos
IgM/IgG

Anti-A
Anti-B

Lneas celulares de hibridoma mrido

Un hibridoma es una lnea celular hbrida obtenida mediante la fusin de un llinfocito
B productor del anticuerpo especfico de inters, con una lnea celular de mieloma
que no produce iinmunoglobulina propia. Se obtiene as una lnea celular inmortal
capaz de expresar el anticuerpo de inters, que se asla del sobrenadante.

Anti-D

Heterohibridoma (humano y ratn)

Fusin de clulas B inmortalizadas con VEB a clulas de mieloma de ratn para dar
lugar a un heterohibridoma humano-ratn.

La hibridizacin de linfocitos humanos ha sido necesaria para producir determinados anticuerpos contra
antgenos eritrocitarios que no son reconocidos por el sistema inmune del ratn (antgenos del sistema Rh).

Obtencin de heterohibridoma productor de anticuerpos monoclonales de tipo IgM

contra el antgeno D del sistema Rh.
Len G. y Cruz C. Invest Clin 48(1): 57 - 67, 2007
Beneficios tecnolgicos y econmicos que representa poder contar con reactivos nacionales de alta calidad para
la tipificacin de la sangre humana

CMSP

+
Mujer Rh Neg
5to da postparto RN Rh+

LB sensibilizados

Separacin diferencial por

gradiente de Ficoll-Hypaque

Sobrenadante de cultivo
de Clulas B95.8

Lnea celular linfoblastoide que

proviene de los monos marmoset,
las cuales estn infectadas con el
VEB por lo que producen y
secretan viriones

15 das despus

Heteromieloma de la lnea K6H6/B5

Esta lnea fue lograda mediante la fusin de clulas de mieloma de ratn
balb/c denominada N5-1-Ag4 y clulas de linfoma nodular humano

LB inmortalizados

Se mantiene en cultivo con Medio de crecimiento: Hipoxantina,

Aminopterina
Timidina
Ouabana

PEG

A los 14 das EVALUACION DE LOS POZOS

Las clulas contenidas en los pozos con seal positiva

se expandieron y se clonaron cuatro veces por
procedimiento de dilucin lmite (a razn de 1, 0,5 y
0,25 clulas por pozo), para asegurar la
monoclonalidad.

Caracterizacin y cuantificacin
del anticuerpos

El tipo de cadena liviana se determin

mediante el mtodo de doble difusin en gel
de agarosa (Ouchterlony)

Inmunoensayo enzimtico
(ELISA)

+ EBV

CMSP

Cel B linfoblastoides
Ig+, inmortal

PEG

Clulas B no fusionadas

Heterohibridoma
Ig+, inmortal

Mueren en Ouabaina

Cel Mieloma
Ig-, inmortal

Cel mieloma no fusionadas

Mueren en HAT

Heterocariones

HAT/ Seleccin Ouabaina

(Solo crecen Hibridos Cel B/ mieloma)

Determinacin de anticuerpos en
sobrenadante del cultivo
Clon hibridomas Ac+

Expansin de clones
Positivos

Sobrenadante Cultivo

HETEROHIBRIDOMAS OBTENIDOS
1) Anti-D (IgM) (BMS-9) Potencia 1:32 centrifugacin
inmediata, 1:8912 15 min. a TA. Avidez 10 seg.
2) Anti-D (IgG) en estudio
3) Anti-D (IgG) muy baja potencia (electrofusin)

El inters por la produccin de AcMo humanos tiene al menos

tres motivaciones principales:
La conveniencia de emplear inmunoglobulinas humanas en mtodos
diagnsticos o teraputicos.
a)

b) Las limitaciones en la produccin de AcMo en ratn o rata para algunos

antgenos contra los cuales estas especies no producen una respuesta inmune
humoral.
c) El conocimiento en mayor detalle de los mecanismos de la respuesta
inmune Humana y especficamente, su relevancia en el cncer, las
enfermedades Autoinmunes, los procesos alrgicos y las enfermedades
infecciosas