Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
BIOLOGA CELULAR
ORGANIZACIN ESTRUCTURAL Y
MOLECULAR DE LA CLULA
MICROSCOPIA Y METODOS DE
ESTUDIO DE LA CLULA
Xenopus laevis
Agaricus campestris
Homo sapiens
Argiope lobata
Trypanosoma cruzi
Teora celular
(Schleiden y Schwann, 1839)
Niveles
SUB-ATMICO
de organizacin de la materia
ATMICO
Las propiedades de los seres vivos
resultan
C
de una serie de niveles
de
organizacin
En
cada
nivel aparecen nuevas
O
MOLECULAR
integrados
propiedades (propiedades
M
emergentes), que constituyen un
P MACROMOLECULAR
salto cualitativo respecto del nivel
L MACROMOLECULAR
anterior
E
COMPLEJO
J
CELULAR
I
En ese sentido, entendemos a la
D
TISULAR
vida biolgica como un conjunto de
A
propiedades emergentes a partir
D
RGANOS
del nivel de organizacin celular.
SISTEMAS DE
RGANOS
...
Las
...por
estructuras
eso se utilizan
de loslas
niveles
siguientes
ms bajos
tienen
unidades
dimensiones
mtricas...muy pequeas....
SUB-ATMICO
ATMICO
C
O
MOLECULAR
M
P MACROMOLECULAR
L MACROMOLECULAR
E
COMPLEJO
J
CELULAR
I
D
TISULAR
A
D
RGANOS
SISTEMAS DE
RGANOS
...
10-10 m
1 nm
10-9 m
1 m
10-6 m
1 mm
10-3 m
nucleolo
ncleo
REG
mitocondria
Aparato de Golgi
REL
Procarionte
Eucarionte
Ncleo
Ausente
Presente
Citoesqueleto
Ausente
Presente
Sistema de
Endomembranas
Ausente
Presente
Dimetro
< 1m
Circular-Desnudo
10-100 m
Con histonas
Cromosomas
Varias copias de un
cromosoma
Distinto nmero de
cromosomas/especie
Endocits- Exocitocis
Ausente
Presente
Presente
Slo en plantas
(Celulosa) y Hongos
(Quitina)
70S (30S+50S)
ADN
Pared Celular
Ribosomas
( m : micrmetro)
( nm : nanmetro)
( : Angstrom )
Luz blanca
Distintas longitudes de onda
Ondas electromagnticas
Se desva en su trayecto al pasar por
medios de distinto ndice de refraccin
Al pasar por compuestos coloreados son
absorbidos determinados rayos
Estativo
Pie
Brazo
Platina
Tubo
Parte ptica :
Espejo
Aparato de
Condensador Iluminacin
Diafragma
Objetivo
Ocular
Marcha de rayos
Lado de la lente donde se
forma la imagen
Centro de la lente
Distancia Focal
Punto focal
Imagen
objeto
Punto focal
objeto
Lente biconvexa
Eje ptico
Lente objetivo
Formacin de la imagen
en el objetivo:
Algunos principios de ptica
La imagen :
se forma por interseccin de rayos: por
eso es real
Tambin es invertida
Lente
objetivo
Lente ocular
Formacin de la imagen del ocular:
Lente
objetivo
Lente ocular
VIDRIO
AIRE
AIRE
VIDRIO
LR =
0.61 x
n x sen
Objetivo
0,61
AN
AN : Apertura numrica
n.: .ndice de refraccin del aire = 1
(que est entre el preparado y la lente objetivo)
n x sen
0.61
1)
Objetivo
Este rayo no contribuye
a formar la imagen
Aire
Objetivo
n=1
2)
Aceite de inmersin
Campo claro
Campo oscuro
Luz polarizada
Contraste de fase
Contraste diferencial de interferencia (Optica
Nomarsky)
Fluorescencia
Confocal
Invertido.
De proyeccin.
Microscopio de interferencia
- Se hacen visibles las diferencias de velocidad que
sufren los
rayos luminosos al atravesar un objeto transparente:
como
diferencias de intensidad o de coloracin.
- Aspecto de relieve.
- Luz blanca polarizada (polarizador).
- Divisin del rayo en dos haces paralelos (prisma de
cuarzo)
- Colector de rayos
- Analizador
- Interferencia entre ambos haces: diferencias de fase
se
convierten en diferencias de intensidad y cambios de
Microscopio de polarizacin
Consta de:
Un polarizador: est debajo del condensador.
Un analizador: Encima de las lentes objetivos.
Cuando estos estn cruzados no hay transmisin de luz
polarizada.
Rotar el objeto para encontrar el brillo mximo o mnimo.
fibras colgenas, fibras musculares estriadas, mielina,
cristales
Propiedades de la fluorescencia
Las molculas fluorescentes absorben la luz de
una determinada longitud de onda y emiten luz de
otra longitud de onda ms larga. Si un componente
de este tipo es iluminado a su longitud de onda
absorbente y visualizado a travs de un filtro que
slo permita pasar la luz de longitud de onda igual
a la de la luz emitida, el componente aparece
brillante sobre un fondo oscuro. La intensidad y el
color de la luz es una propiedad caracterstica de la
molcula fluorescente utilizada
Microscopio confocal
Permite que slo observemos el plano que
est situado en el punto de foco del sistema
ptico eliminando, de forma ptica a travs
de un diafragma o "pinhole", la luz
proveniente de los planos que estn fuera de
foco. Este principio fu descrito por Minsky
en los aos 50, pero es a partir de los 80
cuando se empieza a extender su uso.
Microfotografamitocondias
electrnica
de un hepatocito
Ultraestructura:
nucleolo
ncleo
REG
Microscopa
electrnica
nucleolo
ncleo
REG
mitocondria
Aparato de Golgi
REL
Fraccionamiento subcelular
ETAPAS
1- Ruptura de las clulas
Homogenizadores. Se rompen las clulas
con la ayuda de un mbolo rotatorio
que se
ncleos
Conjunto
de mtodos
y tcnicas
que tienen
como objetivo
ajusta
perfectamente
a las gruesas
paredes
de
unobtener
tubo de cristal
especial.
fracciones
puras o enriquecidas
mitocondriasde un determinado
componente celular.
citosol
celular
homogenato
Uso de detergentes
que solubilizan las
membranas celulares.
Fraccionamiento subcelular
ETAPAS
2- Separacin de componentes
Centrifugacin
La separacin de partculas u
organelas que no presentan una
tendencia a sedimentar
espontneamente, requiere
aumentar la fuerza gravitatoria
a travs de la centrifugacin .
refrigeraci
vaco
Fraccionamiento subcelular
ETAPAS
2- Separacin de componentes
rotor
centrfuga
Fraccionamiento subcelular
ETAPAS
2- Separacin de componentes
Centrifugacin diferencial
La velocidad de sedimentacin
de cada partcula
Mediante centrifugaciones
es proporcional
a suy crecientes
tamao, en
correlativas
sobrenadante
es proporcional a velocidad,
la densidadsedelogran
la partcula
aumenta al incrementarse
la fuerza
separar los principales
gravitatoria
componentes celulares
sedimento o
pellet
Fraccionamiento subcelular
por centrifugacin diferencial
1.000 g
10
homogenato
20.000 g
20
pellet:
mitocondrias,
lisosomas,
peroxisomas
80.000 g
1h
sobrenadante:
citosol
pellet:
ribosomas,
grandes macromolculas
100.000 g
3h
pellet:
microsomas
Gradiente de sacarosa
Fraccionamiento subcelular
por centrifugacin diferencial
Cmo se confirma el xito de la tcnica?
Determinando actividades enzimticas
especficas de una organela