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ENZIMTICA
INTRODUCCION
Se deriva del griego que significa en las
levaduras
Fue hasta la dcada de los setenta que se
conoci la composicin precisa de las enzimas
mediante la secuencia de la ribonucleasa y
estudios de conformacin tridimensional por
cristalografa de rayos X.
Aplicaciones de las
Enzimas.
Amidasas
Produccin de aminocidos.
Amilasas Detergencia. Hidrlisis de almidn.
Amiloglucoxidasa Hidrlisis de almidn.
Catalasa
Produccin de cido glucnico.
Celulasa
Detergencia, Hidrlisis de celulosa.
Hemicelulasas Hidrlisis de hemicelulosa.
Lipasas
Detergencia. Biotransformaciones.
Pectinasas
Clarificacin de bebidas.
Catlisis Enzimtica.
Estructural
Cintico
Protenas
Catalizadores
aminocidos
Protenas (enzimas)
+
grupos prostticos
(orgnicos
inorgnicos)
PROPIEDADES
PODER CATALITICO
Ms rpidas
Acta a condiciones de presin y
temperaturas moderado.
ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS
A la naturaleza del sustrato y al tipo de
reaccin.
REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Mediante iones o molculas pequeas
ENZIMA
Los enzimas son catalizadores muy potentes y
eficaces, qumicamente son protenas , las
enzimas actan en pequea cantidad y se
recuperan indefinidamente. No llevan a cabo
reacciones que sean energticamente
desfavorables, no modifican el sentido de los
equilibrios qumicos, sino que aceleran su
consecucin.
CATALIZADOR
Un catalizador es una sustancia que acelera
una reaccin qumica, hasta hacerla
instantnea o casi instantnea. Un catalizador
acelera la reaccin al disminuir la energa de
activacin.
ES
EP
E+P
Complejo enzima-producto.
Modelo de llave-cerradura
cofactor a la enzima.
Clasificacin de las
Enzimas.
Tradicionalmente para nombrarlas se agrega el sufijo
asa al nombre del sustrato sobre el que actan
(proteasa, lipasa, etc) y en otros casos el de la
reaccin que catalizan (alcohol deshidrogenasa,
cataliza la deshidrogenacin oxidativa de un alcohol).
La nomenclatura tradicional es poco prctica, no
sistemtica y poco informativa.
La Enzyme Commission las ha clasificado
sistemticamente basndose en la naturaleza de la
reaccin catalizadas, sin embargo por la complejidad
de algunos nombres, se sigue utilizando sus nombres
tradicionales.
E+S
K-1
k2
ES
E+P
r = k2 . Eo . S
kM + S
Estaecuacin
ecuacinpredice
prediceun
un
Esta
comportamientocintico
cinticode
de
comportamiento
primerorden
ordenpara
para
primer
concentracionesbajas
bajasde
de
concentraciones
sustratoyyde
deorden
ordencero
ceropara
para
sustrato
concentracioneselevadas
elevadas
concentraciones
Actividad Enzimtica.
1. Activadores.
2. Inhibidores .- Irreversible; reversible
Tipos de Inhibicin..
a) I. Irreversible: El inhibidor se combina con la
b) I. Reversible:
Mecanismos de Rx con ms de un
sustrato
1. Secuenciales.- Enzima se une a ambos
Enzimas Inmovilizadas
p Unin
- adsorcin
- covalente
- inclusin en geles
Contencin
- retencin en membranas
Agregacin
- CLEC
- CLEA
E sol.
c. intrseca
EI
c. intrseca
p
c. inherente
rd
c. efectiva
p
p0
s0
s
s0
s0
Efectos de Particin
s0
s
v
s
s0
V
K
1
s 0 exp[- Z / k B T]
pH - pH 0 0.43
pH0
kB T
q v' J
s0
V' s
h (s 0 - s)
Ks
q
V' s 0
q v' lim
K s0
q J lim h s 0
s0
V'
hK
V' s
(1 0 )
K s
f (, 0 )
V' s 0
0 (1 )
K s0
(1 0 ) [1 0 - ( 1 - 0 )2 4 0 ]
2 0
X
0,i - 0
0,i
( X)
0 0i (1 X)
f(X )
Determinacin de parmetros
V' s 0
K 1
1
K
1
( 1)
v' V'
s0
v'
1/v
Zona 2
2=K(1+)/V
1=K/V
0
Zona 1
1
K 1
1
v'
V' s 0
V'
h'
C Sc- 2/3 Re-m
G
1/s0
Sc
2
-1
1
x x+x
s0
I)
x=0
s = s0
II)
x = L/2
ds/dx = 0
s0
s
K
s0
K
V"
KD
I)
z=0
II)
= 0
z = 0.5
d /dz = 0
f( 0 , , z )
(1 0 )
f( 0 , , z )
0 (1 )
'
A dz
0
A dz
0
'
tanh( / 2)
/2
1.0
'
=0.5
=1
0.8
0=10
1.0
=2
0=1
0.6
0=0.1
0=0
0.4
0.1
=5
0.2
0.01
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.0
10
100
J 4r
r r
- J 4r
2
r
4
v" (r r)3 - r 3
3
s0
ds
J D
dr
2
d
s
ds
2
r D 2 2r D
r 2 v"
dr
dr
r
r+
s0
r
I) r = R
II) r = 0
s = s0
ds/dr = 0
R
3
I) = 1
= 0
II)
=0
d /d = 0
' f( 0 , )
' f(X )
V"
KD
r
R
s0
r
r+
r
s0
ICP
'
d 2 2 d
9 2
0
2
d
1
d
1
0.8
d 2 2 d
0
P
1
d 2 d
0.6
0.4
d 2 2 d
9 2
0
2
1 1
d
d
0.2
0
d2 2 d
9 P2
0
2
1 1
d
d
0
0
5
10
10
K/KP = 1
X = 0.9
IAS
INCP
'
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
K/K= 1
d 2
d 2
2 d
9 2
0
d
(1 ) 1
5
10
10
Determinacin de parmetros
1/v
1/V
1/V
-1/K
1/s0
Def D0
C=0
C = Ct
C = C
c
c
ct c c e
2 De f
r
RDE + RDI
membrana
esfera
d 2
Bi
dz
h'L
D
- 2
d
Bi ( 0 - ) dz
z 0
d 2
d 2
Bi
h' R / 3
D
ds
dx
x0
h' (s 0 sS ) D
ds
dr
rR
0
1
z0
d
dz
tanh
'
d
0
dz
z 0.5
2 d
- 9 2
0
d
1
Bi ( 0 - )
1
h' (s0 sS ) - D
d
0
d
0
s0
2
1 tanh
2
Bi
sS
s0
1
1
Bi
-
tanh(3 ) 3
'
Bi - 1
tanh(
3
sS
TECNOLOGA DE ENZIMAS
S+E
ES
P+E
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INGENIERA DE ENZIMAS
Desde el punto de vista tecnolgico las
enzimas son catalizadores de procesos. Se
utilizan en transformar materias primas en
productos
Uso terico: indefinido
Son protenas: lbiles - uso no indefinido
Ventajas:
* Especificidad
* Eficiencia de conversin
Desventajas:
* Costo de separacin
* Uso restringido a procesos que involucren
pocos pasos bioqumicos.
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INGENIERA DE ENZIMAS
Es el rea de la Ingeniera Bioqumica
abocada al anlisis, diseo y
operacin de procesos para la
produccin y utilizacin de enzimas
como catalizadores de proceso.
50
FUENTES
DE ENZIMAS
Enzimas de origen
animal
Se obtienen a partir de animales sacrificados.
Se remueve todo el tejido y posteriormente es
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55
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Mutagnesis
Seleccin
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PRODUCCIN DE ENZIMAS
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APLICACIONES
Procesos industriales
Anlisis
Clnicas
60
APLICACIONES INDUSTRIALES
Industria de Alimentos
Industria Farmacutica
Industria Textil
Industria de Detergentes
Industria del Cuero
Biorremediacin y tratamiento de
efluentes
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disociables
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APLICACIONES ANALTICAS
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ELECTRODOS ENZIMTICOS
Se proyectan como elementos registradores y
controladores de procesos. El uso de enzimas
inmovilizadas permite aumentar la vida media
del electrodo.
Ejemplos:
* Electrodo de glucosaoxidasa en anlisis de
glucosa ( Detector: O2 disuelto)
* Electrodo de penicilinasa (Detector: pH)
* Electrodo de ureasa (Detector: NH 4+)
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APLICACIONES CLNICAS
Convencionales:
PRODUCCIN DE ENZIMAS
La produccin para ser competitiva exige un
biolgicos capaces de
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PREPARACONES INDUSTRIALES DE
ENZIMAS
Las enzimas industriales se obtienen por
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GENERACIN
ENZIMAS DE ORIGEN VEGETAL: sub-productos de la
actividad agrcola
matadero
proceso de fermentacin.
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RECUPERACIN
Fermentacin
torta
separacin
residual
slido - lquido
agotado
separacin
slido - lquido
Concentracin
Vegetal/Animal
Purificacin
Separacin
slido-lquido
Caldo
Tejido
Extraccin
Fragmentos
celulares
Concentracin
Purificacin
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RECUPERACIN
ENZIMA EXTRACELULAR: fase lquida.
ENZIMA INTRACELULAR: fase slida
TCNICAS:
* A gran escala:
Filtracin: Preferida para m.o.
Filamentosos. Filtros rotatorios
Centrifugacin: m.o. unicelulares
(Floculacin) Centrfuga de discos.
EQUIPOS:
* Contnuos (preferidos a escala industrial).
* Discontnuos.
En el caso de enzimas intracelulares se complican
estos mtodos porque el tamao de partcula es
menor que el de un microorganismo.
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EXTRACCIN DE ENZIMAS
INTRACELULARES
Ruptura de la envoltura celular:
EVAPORACIN AL VACIO
CRISTALIZACIN
LIOFILIZACIN
ESPUMACIN
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PURIFICACIN
Para enzimas de uso industrial es rudimentaria.
Generalmente se requieren varios pasos
Se considera:
* Factor purificacin
* Rendimiento (ms enfatizado a nivel
industrial)
Tendencia: purificar con pocas etapas
Sistemas de fraccionamiento proteico:
FORMULACIN
Es una operacin importante en el caso de
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ACABADO
INCLUYE:
Desalinacin.
Esterilizacin.
Concentracin y/o secado.
Estabilizacin por agregado de
conservadores.
Recubrimiento.
CONSERVADORES:
Sales inorgnicas
Protenas inertes
Polialcoholes
Azcares
Glicoles
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Sustratos.
Cofactores e inhibidores disociables.
Reactivos sulfhidrilo.
Agentes quelantes.
Inhibidores de proteasas
Agentes antimicrobianos
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NORMALIZACIN
DEBE CONTENER:
Actividad Especfica
Estabilidad al almacenamiento
ACTIVIDAD ESPECFICA:
En Unidades DEFINIDAS.
ESTABILIDAD:
Funcin de la Temperatura
Vida Media. (No inferior a..)
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