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ESTRUCTURA BACTERIANA
MEMBRANA CITOPLASMATICA
Es una fina estructura que rodea completamente la clula.
La estructura general es de una bicapa lipdica, los fosfolpidos poseen tanto
unidades altamente hidrofbicas (cidos grasos) como unidades relativamente
hidroflicas (glicerol) y pueden presentarse en mltiples formas qumicas
distintas debido a la variacin en la composicin de los cidos grasos y de los
compuestos fosforilados que se unen al esqueleto del glicerol.
Dado que los fosfolpidos se agregan en soluciones acuosas, tienden a formas
bicapas de manera espontnea, los cidos grasos apuntan hacia el interior
(mantenindose en un entorno hidrofbico), mientras que las porciones
hidroflicas son las expuestas a la fase acuosa.
ULTRAESTRUCTURA BASICA DE UNA BICAPA
H2O
LIPIDICA
REGION
HIDROFILICA
ACIDOS
GRASOS
REGION
HIDROFB ICA
GLICEROL
FOSFATO
H2O
Estructuras intracelulares
Estructuras intracelulares
FUNCIONES DE LA MEMBRANA CITOPLASMATICA
Estructuras extracelulares
Pared celular
Estructuras extracelulares
Pared celular
Estructuras extracelulares
Pared celular
A. La membrana externa
Sirve como membrana de permeabilidad selectiva que mantiene afuera
a sustancias hidrfobas y sustancias hidrfilas por encima de cierto
tamao y retiene las protenas periplsmicas. La membrana exterior es
una tpica capa doble de fosfolpidos en la cual los fosfolpidos de la
capa ms externa han sido sustituidos por molculas de LPS.
B. Porinas
Halladas en la membrana externa y con un peso molecular de 35,000,
forman los poros transmembrana o canales de difusin que permite el
pasaje de pequeas molculas hidrfilas a travs de la membrana
externa.
C. Lipoprotena
Es la protena ms abundante en las clulas Gramnegativas, su funcin
consiste en estabilizar la membrana externa y anclarla a la capa de
peptidoglucano.
D. LPS
Conocido como lpido A, consiste en unidades
del disacrido de glucosamina fosforilada que
tiene unidos varios cidos grasos de cadena
larga. Es termoestable, letalmente txico,
pirognico.
E. Protoplasto y Esferoplasto
La capa de glucopptidos de la pared celular puede eliminarse
mediante hidrlisis con lisozimas, pero es estabilizada en soluciones
hipertnicas de sacarosa.
- Protoplasto, cuando se libera un cuerpo esfrico sin pared
osmticamente sensible, Grampositivas.
- Esferoplasto, cuando hay retencin de la cubierta celular se
denomina esferoplasto (Gramnegativas).
G. Componentes de la membrana,
La membrana estn compuestas aproximadamente por 60 - 70% de
protenas, 30 - 40% de lpidos y pequeas cantidades de hidratos de
carbono. Los constituyente principales son las fosfatidiletanolaminas
75%, fosfatidilglicerol 20% y glucolpidos. La colina, esfingolpidos,
cidos grasos poliinsaturados y esteroides son raros.
Grampositiva
Gramnegativa
Micoplasma
PARED CELULAR
La pared celular encontrada en todas las bacterias con excepcin de los micoplasmas,
protege a la clula de los medios de baja presin osmtica y mantiene la forma. La
pared celular esta compuesta por un glucopptido nico para las bacterias.
El espesor oscila generalmente entre 0.150 um y 0.500 um de espesor, pudiendo
incluso alcanzar 0.8 um (Lactobacillus). Las paredes de las clulas jvenes son ms
delgadas que las clulas de cultivo antiguo.
FUNDAMENTO DE LA
COLORACION GRAM
PROCEDIMIENTO DE LA
COLORACION GRAM
PROCEDIMIENTO DE LA
COLORACION GRAM
COLORACION DE
ZIEHL-NEELSEN
FUNDAMENTO DE LA COLORACION
DE ZIEHL-NEELSEN
REACTIVOS
1. FUCSINA FENICADA DE ZIEHL-NEELSEN
Fucsina Bsica 0.5 g
Fenol 2.5 g
Alcohol 95
5 ml.
Agua destilada csp
100 ml
2. SOLUCION DECOLORANTE ALCOHOL-ACIDO
Etanol
97 ml.
Acido clorhdrico cc.
3 ml
3. SOLUCION DE AZUL DE METILENO
Azul de metileno
0.5 g.
Agua destilada 100 ml.
PROCEDIMIENTO
Hacer
calor.
Vierta unas gotas de solucin de fucsina fenicada hasta cubrir la
preparacin.
Calentar suavemente hasta que se desprenda vapor por tres veces
consecutivas, evitando la ebullicin.
Elimine el colorante y lave la preparacin con agua corriente.
Cubrir el portaobjetos con la solucin decolorante durante 1 minuto,
hay que asegurarse que no desprenda coloracin roja; si es
necesario, se pueden aadir unas gotas ms del decolorante.
Lavar con agua con la finalidad de eliminar el exceso.
Aadir el colorante de contraste azul de metileno y se deja actuar
por un minuto.
Lavar con agua, eliminando el exceso.
Secar al aire, a temperatura ambiente.
Observar al microscopio con lente de inmersin. (100X) y con
aceite de inmersin
ULTRAESTRUCTURA
BACTERIANA
FLAGELOS
FILAMENTOS AXIALES
MICOFIBRILLAS, FIMBRIAS, Y PILIS
(PELOS SEXUALES)
FLAGELOS
FLAGELOS
Los flagelos bacterianos son largos
apndices filiformes compuestos en su
totalidad por protena, miden de 12 a 30
nm de dimetro. Son los rganos de
locomocin para las formas que lo
poseen.
Un flagelo bacteriano est hecho de una
sola clase de subunidad protenica,
denominada FLAGELINA; el flagelo
est formado por la agregacin de
subunidads que forman una estructura
cilindrica hueca.
Los flagelos pueden variar desde unos
pocos (E. coli) hasta varios cientos
(Proteus).
volteretas
carrera
Los flagelos permiten que las bacterias encuentren medios favorables y eviten los
desfavorables. Aunque pudiera parecerlo, el movimiento no se produce al azar.
Cuando una bacteria nada hacia un nutriente o alejndose de un compuesto txico,
aumenta la duracin de las CARRERAS y disminuye la frecuencia de las
VOLTERETAS
Tincin de Flagelos
Es muy difcil observar flagelos en una preparacin teida, debido a que
se retraen muy fcilmente y se adhieren a la pared celular.
Ej: Spirillum volutans, Escherichia coli. Proteus, Pseudomona .
CONSIDERACIONES PARA REALIZAR LA TINCION
Se debe partir de cultivos jvenes, de entre 6- 12 sembrado en agar
nutritivo blando.
Debe emplearse portaobjetos nuevos, perfectamente limpios, tratados con
mezcla sulfocrmica, perfectamente aclarados con agua destilada y
secados en estufa.
Preparar una suspensin del germen en agua destilada, mezclando
suavemente hasta obtener una suspensin lechosa.
Colocar el portaobjeto ligeramente inclinado y se depositan sobre l un
par de gotas de la suspensin.
Dejar secar al aire sin aplicar calor.
METODO DE LEIFSON
Fundamento:
Los flagelos son estructuras demasiado finas para ser visible al
microscopio ptico, en presencia de cido tnico puede
evidenciarse su presencia y disposicin en las clulas, por medio
de un precipitado grueso que se deposita sobre la pared celular y
flagelos. En esta forma el dimetro aumenta de tal modo que con
la tincin de fucsina se les hace visibles al microscopio ptico.
Los flagelos se pueden teir con soluciones alcohlicas de
colorantes de anilina, que forman un precipitado al evaporarse el
alcohol en el proceso de tincin. La fucsina bsica es el colorante
primario y el cido tnico aadido a la solucin acta como un
mordiente.
Se puede usar un contracolor como el azul de metileno, para
visualizar mejor la bacteria en los casos en que el colorante
primario es dbil o no reacciona del todo con la pared celular
bacteriana.
METODO DE LEIFSON
Reactivos:
Colorante de Leifson (Fucsina bsica, alcohol
Acido tnico, cloruro de sodio)
Solucin acuosa de sulfato de cobre 2%.
Tcnica:
Se cubre la preparacin con el colorante de
Leifson
Se deja actuar por unos 10 a 15 minutos, hasta
que el
alcohol se evapore.
Se lava con agua, sin volcar el colorante.
Se seca a temperatura ambiente. Observar a
100X.
Observacin
Los flagelos se observan de color rojo oscuro
a azul negruzco.
METODO DE RHODES
Reactivos:
Mordiente de Rhodes (contiene una solucin
acuosa de tanino, alumbre potsico, aceite de
anilina y cloruro frrico).
Nitrato de plata amoniacal.
Tcnica:
Se cubre la preparacin con el mordiente de
Rhodes durante 3 a 5 minutos.
Se lava cuidadosamente con agua, mejor por
inmersin.
Se cubre con la solucin de nitrato de plata
amoniacal, calentndolo hasta casi ebullicin y
dejndolo actuar por 3 a 5 minutos.
Se lava con agua destilada.
Se seca a temperatura ambiente.
Observar a 100X.
Observacin
Los flagelos se observan
por el precipitado de
nitrato de plata que se ha
depositado en torno suyo.
METODO DE TRIBONDEAU
Reactivos:
Mordiente de Tribondeau.(contiene solucin alumbre
potsico y tanino).
Solucin de cristal violeta.
Tcnica:
Se fija el frotis con alcohol.
Se cubre la preparacin con la mezcla formada por 5
ml del mordiente y 0.5 ml de cristal violeta
previamente sometida a ebullicin.
Se deja actuar la mezcla unos veinte segundos.
Se lava rapidamente con agua, sin volcar previamente
el colorante para evitar que se forme una pelcula sobre
la preparacin.
Se seca a temperatura ambiente.
Observar a 100X.
Observacin
Los flagelos se
observan de color rojo
oscuro a azul negruzco
FILAMENTOS AXIALES
Las Espiroquetas, Treponemas, Leptospiras, Borrelias; son clulas con
motilidad y se mueven desplazndose por una onda helicoidal, tipo de
movimiento que le permite la penetracin en medios viscosos.
Estas bacterias producen filamentos axiales semejantes a flagelos, en torno
de los cuales se arrolla la clula.
Estos filamentos estn ubicados en el espacio periplsmico entre las
membranas interna y externa de la clula. El Treponema microdentium
produce dos filamentos por clula, el T. reiteri produce 6 a 8.
FIMBRIAS
Las fimbrias y los pili presentan una estructura similar a la de los flagelos pero
no participan en la motilidad.
Las fimbrias son bastante ms cortas que los flagelos y mucho ms numerosas.
Pero tambin son de naturaleza protica.
No todos los microorganismos poseen fimbrias y la capacidad para fabricarlas
es un rasgo hereditario.
No se conoce con certeza la funcin de las fimbrias en todos los casos, pero
parece evidente que favorecen, en algunos organismos, su fijacin a las
superficies como los tejidos animales, en el caso de algunas bacterias
patgenas, o la formacin de pelculas o la fijacin a las superficies lquidas.
PILIS
ENVOLTURA CELULAR
CAPSULA Y MUCUS O GLICOCALIX
MEMBRANA CITOPLASMATICA
PARED CELULAR
CAPSULA, GLICOCALIX
CAPSULA, GLICOCALIX
Capsula Glicocalix
Biopelicula
CAPSULAS
El material capsular pueden ser polmeros de un nico monosacrido (glucosa,
dextrano, levano) o heteropolisacridos que contienen tanto hexosas como
pentosas, ms ribitol, glicerol u otros alcoholes azcar. Los fosfatos con
frecuencia tambin estn presentes.
En Bacillus es de naturaleza polipeptdica. La cpsula es sintetizada a nivel de
la membrana celular, sus componentes son sintetizados y exportados fuera de
la clula por un sistema transportador para lpidos isoprenoides, en el cual los
componentes se unen a un material capsular
Bacteria que presentan cpsula:
Streptococus pneumoniae,
Haemophilus influenzae, Klebsiella
pneumoniae,y Neisseria meningitidis,
Cryptococcus neoformans.
FUNCIONES
Protege
TINCION DE CAPSULA
La cpsula es una capa mucosa, ms o
menos gruesa, que envuelve la pared
celular de algunas bacterias.
Est
compuesta
de
polisacridos,
mucopolisacridos o polipptidos.
A consecuencia de su elevado contenido en
agua, se tien dbilmente por los
colorantes.
Algunas tcnicas colorean el fondo de la
preparacin, destacando sobre l las
cpsulas sin teir.
Nota:
Preparacin de los frotis: debe realizarse un
frotis espeso a partir de una suspensin de
los grmenes en suero sanguneo a 1/3 en
suero fisiolgico.
METODO DE HISS
Reactivos:
Solucin acuosa de cristal violeta 1%.
Solucin acusoa de sulfato de cobre 2%.
Tcnica:
Se fija el frotis al calor.
Se cubre la preparacin con cristal violeta y
se calienta a vapor fluente durante 1 minuto.
Se lava con sulfato de cobre.
Se seca a temperatura ambiente.
Observar a 100X.
Las cpsulas se habrn coloreado de azul
plido, las bacterias de color prpura y el
fondo de color claro.
TINTA CHINA
Reactivos:
Solucin de fucsina diluida.
Nigrosina o tinta china
Tcnica:
Se fija el frotis al calor.
Agregar la fucsina diluida durante 2 minuto.
Se lava con agua destilada
Se seca a temperatura ambiente.
Se coloca, en un extremo del portaobjeto dos gotas
de nigrosina o tinta china y se hace una extensin
por el mtodo de los dos portaobjetos.
Se seca.
Observar a 100X.
Al haber hecho la extensin con la nigrosina, el
fondo aparecer negro, las bacterias teidas de rojo
por la fucsina y la cpsula ser un halo blanco que
las envuelve.
ESTRUCTURAS
CITOPLASMATICAS
CUERPO NUCLEAR
RIBOSOMAS
POLIAMINAS Y PROTEINAS
SIMILHISTONAS
GRANULOS CITOPLASMATICOS
ENDOSPORAS BACTERIANAS
CUERPO NUCLEAR
El ADN bacteriano puede ser detectado
como nucleiodes o cuerpos de cromatina con
microscopio ptico empleando la coloracin de
Feilgen, es difcil demostrar los cuerpos de
cromatina debido a la alta concentracin de ARN.
El tratamiento previo con ribonucleasa elimina casi todo al ARN, y los cuerpos
de cromatina pueden verse.
Con microscopio electrnico se observa material nuclear como una red
irregular, delgada, fibrilar de ADN, que corre paralela al eje de la clula.
El ADN bacteriano representa un 2 a 3% del peso celular, ocupa el 10% del
volumen de la clula, esta difusin permite una rpida difusin de los
materiales solubles hacia todas las partes de la estructura nuclear.
RIBOSOMAS
Los ribosomas estn compuestos por 30% de
protenas y de 70% de ARN.
La lisis suave de la clula en crecimiento hace que
aparezcan agregados polirribosomas y membrana,
que contienen todo el mecanismo de sntesis
protica: Los polirribosomas son cadenas de
ribosoma 70S manmeros, fijados al ARN
mensajero.
El nmero de ribosomas vara con las condiciones de crecimiento: Clulas de
crecimiento rpido en medios ricos contienen muchos ms ribosomas.
SUBUNIDADES, La estabilidad de los cromosomas depende de Mg+2 , con
bajas concentraciones de Magnesio, los ribosomas 70 S, se disocian en
monmeros ribosmicos 50S y 30S.
GRANULOS CITOPLASMATICOS
Los grnulos identificados por
procedimientos
de
tincin
adecuados indican la acumulacin
de
reservas
de
alimentos,
incluyendo polisacridos, lpidos o
polifosfatos.
El nmero y el tipo de grnulos de
almacenamiento vara con el
medio y el estado funcional de las
clulas.
GRANULOS CITOPLASMATICOS
El glucgeno es el principal material de almacenamiento de
las bacterias entricas y constituye el 40% del peso.
Mientras que algunas especies de Bacillus y Pseudomonas
acumulan un 30% como poli--hidroxibutarato
Los polmeros de alto peso molecular (polifosfatos) como el
polihexametafosfato
conocidos
como
granulos
metacromticos o volutina se producen en especies de
Corynebacterium, Yersinia pestis y especies de Mycobacteria.
Estos grnulos de volutina se ven rojo rosceo cuando se tien
con azul de metileno.
ENDOSPORAS BACTERIANAS
Las endosporas se forman en respuesta a la falta de nutrientes
dentro de la clula bacteriana vegetativa. Estas estructuras son altamente
resistentes a los efectos destructivos del calor, sequedad, presin y muchos
agentes desinfectantes. Se requiere de 120C por 15 a 20 minutos para matar
esporas. Se cree que la resistencia al calor de las endosporas se debe al
reducido contenido de agua en el centro propiamente dicho de la espora.
Las endosporas son estructuras esfricas u ovales formadas dentro
de ciertas especies bacterianas que representan un estado latente o de reposo
en el ciclo de crecimiento de esos microorganismos.
El proceso de germinacin ocurre en tres etapas
iniciacin
activacin
excrecencia
ENDOSPORAS BACTERIANAS
La formacin de endosporas es un rasgo distintivo de la familia
Bacillaceae, que incluye al gnero aerobio, Bacillus y el gnero anaerobio
Clostridium.
Entre las bacterias con importancia clnica , las endosporas slo se
presentan en 2 gneros. Las bacterias aerobias grampositivas formadoras de
endosporas pertenecientea al gnero Bacillus y los anaerobios obligados del
gnero Clostridium.
ESPORAS
Bajo los estmulos de ciertas condiciones ambientales como el agotamiento
de nutrientes (glucosa, nitrgeno o fosfato) o la exposicin a temperaturas
o potenciales redox subptimos, el material nuclear se divide en dos
nucleoides, y uno se separa del otro por un septo membranoso.
El septo crece y el centro de la espora termina rodeado por una doble
membrana. Entre las dos membranas, una capa cortical se deposita sobre
ellas. Esta corteza consta principalmente de material peptidoglicano.
La capa cortical se endurece y acumula iones calcio debido a la actividad
quelante de una molcula singular llamada cido dipicolnico.
ESPORAS
El centro queda protegido por la alta concentracin de iones calcio que
entrecruzan fuertemente el material peptidoglicano y toda el agua
contenida en la espora es expulsada.
Varias capas de la cubierta de la espora (una sustancia de tipo queratina
que es rica en enlaces disulfuro) se depositan y la espora es liberada en
el momento en que muere y se lisa la clula madre vegetativa. Las
endoporas pueden permanecer por durante perodos prolongados.
ESPORAS
Cuando la endospora es colocada en condiciones ambientales favorables
en presencia de algn estmulo particular (presencia de una aminocido
particular, hidrato de carbono o agua) se produce su germinacin.
Bajo este estmulo las clulas son activadas, degradan la corteza de la
espora y lilberan material peptidoglicano, los iones calcio y el cido
dipicolnico. Comienza la sntesis del RNA, seguido por la sntesis de
protenas y, finalmente, la sntesis de DNA. El resultado es una nueva
clula vegetativa.
BACTERIAS
Subterminales
Centrales
Terminales
POSICION DE LA ESPORA
El tamao, la forma y la localizacin de las esporas incipientes en clulas
en fase estacionaria de especies Clostridium y Bacillus es til para la
caracterizacin e identificacin de ciertas especies dentro de estos dos
gneros.
Las endosporas pueden ser esfricas u ovales; pueden diferir en su
localizacin dentro de la clula es decir, central, terminal o subterminal y
pueden o no hinchar la clula.
Las endosporas generalmente no se tien por el mtodo de Gram y
aparecen cuerpos refractarios, no teidos en los extendidos.
POSICION DE LA ESPORA
A. ENDOSPORAS CENTRALES
Estn situadas en el centro de la clula.
B. ENDOSPORAS SUBTERMINALES
Se encuentran prximas al extremo. Bacilos
grampositivos
sobrecoloreados
con
endosporas subterminales. Caracterstico del
Bacillus y Clostridium.
La diferencia se realiza en base a que el
Bacillus es aerobio o anaerobio facultativo y
el Clostridium es anaerobio obligado.
C. ENDOSPORAS TERMINALES
Se encuentran situadas en el extremo.
Clostridium tetani
MORFOLOGIA MICROSCOPICA Y
REACCIONES TINTORIALES
TINCION DE LAS ESPORAS
Las esporas son la forma de resistencia de las bacterias. Tienen
forma esfrica u oval. Al microscopio, las esporas sin teir se observan como
grnulos brillantes.
Se tien con verde malaquita o carbolfucsina y en suspensiones de
bacterias sin teir se observan como cuerpos refringentes intracelulares.
Ej: Clostridium
BACTERIAS
A. TINCION DE GRAM:
Las bacterias se tien de color
violeta, mientras que las esporas no se
colorean dejando espacios vacos.
BACTERIAS
C. TINCION DE MOELLER
Las esporas se habrn teido de rojo o
rosado y las bacterias azules.