UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

CARRERA DE INGENIERA EN BIOTECNOLOGA
BASES DE INGENIERA TISULAR

Introduccin
Obesidad y diabetes: susceptibilidad a lesiones cardacas

La
miocardiopata
diabtica

una enfermedad
progresiva

Producida por la
diabetes

Causas excluidas:
la hipertensin
arterial o la
patologa vascular

Se caracteriza
por una gran
variedad de
alteraciones
funcionales y
estructurales
del corazn
Disfuncin sistlica,
interrupcin
metablico-cardaca,
lipotoxicidad, y
mayor estrs
oxidativo

Se desconoce factores primarios que provoque la miocardiopata

diabtica

 Estudios permitieron identificar genes

productores de la Apolipoprotena O (APOO)

APOO est sobreexpresada en tejido cardaco en

pacientes diabticos y en animales sometidos a una
dieta rica en grasas

*
Pptido de 198 aa
* Extremo N-terminal ligeramente cargado de forma
negativa
* Hidrofobicidad global en la parte central

En levadura y de C.
elegans (nemtodo)

Los ortlogos APOO

se encuentran dentro
de la membrana
mitocondrial interna
A manera de
complejos de
protenas: sistemas
de organizacin de la
membrana
mitocondrial interna
o MITOS
Mantenimiento de la
morfologa de la
membrana interna
as como las
conexiones con las
crestas.

Apolipoprotenas
Molculas que facilitan el transporte
de lpidos en plasma.

Se han identificado funciones adicionales:

APOE activa la fosforilacin Akt / PKB
APOJ puede ser translocado al ncleo , donde se
une a la protena de reparacin del ADN Ku80;
APOL6 , que tiene homologas estructurales con
miembros de la familia Bcl-2, regula vas tales
como la apoptosis.

 Con el fin de descubrir cmo los cambios en la

expresin APOO intervienen en modificaciones de
la funcin cardiaca, se realiz manipulaciones in
silico, in vitro, in vivo , utilizando
(a) mioblastos cardiacos
(b) 3 lneas de ratones transgnicos que
expresar Apoo a niveles fisiolgicos (ratones
Apoo - Tg )
(c) transfeccin in vivo en hgado de ratn
(d) muestras de corazn humano

METODOLOGA

APOO se construye a partir de un fragmento BamHI -SalI

de 5,5 kb que contiene el promotor murino amhc y un
fragmento de ADNc SalI - HindIII que contiene la
secuencia de codificacin de APOO humana

Se utiliz para la inyeccin nuclear en los huevos

fecundados de hembras hbridas B6D2/F1 .

Los huevos fueron microinyectados y luego reimplantados

en B6CBA/F1 ratones hibridas pseudopreadas (madres
adoptivas).

3 lneas de ratones transgnicos se generaron y se

cruzaron con ratones C57BL/6J

PCR utilizando
cebadores rtiMHCP1F
y rtiMHCP1R

PCR se realiz al
menos 3 veces por
ratn, y los productos
de PCR se analizaron
por electroforesis

Los animales fueron

alojados en una
habitacin iluminada
12 horas al da (6am6pm) a una
temperatura ambiente
de 22 C 1 C.

Cultivos de clulas cardiacas H9c2 y

transfeccin de H9c2.

H9c2 clulas se obtuvieron de la

Coleccin Europea de Cultivos de
Clulas

H9c2 cardiomioblastos fueron

transfectadas por electroporacin

Generacin de clulas que

sobreexpresan APOO

Para sobreexpresar APOO

humana (PTT-APOO), la
secuencia de codificacin
APOO fue amplificado
utilizando cebadores
hAPOO5BamPTT y
hAPOO3BamPTT

se clon en el BamH1 sitio

del vector de expresin
pTT

Para localizar APOO en las

clulas cardacas H9c2,
estas clulas fueron
transfectadas con pSNAPAPOOvectorial.

RESULTADOS

Caracterizacin de los ratones Apoo-TG

Apoo-T

WESTERN
BLOT

Calreticulina

ECOCARDIOGRAF
AS

TEM
miocardio
Dieta alta
en grasas

MICROSCOPA
CONFOCAL

WESTERN BLOT

Anlisis in vitro de APOO en

mioblastos cardacos

supresin Nterminal de 40
aa

Papel de APOO
en la respiracin
y el estrs
oxidativo en
mioblastos
cardacos
(D) diacetato
de
diclorodihidrof
uorescena

Apoo tiene 2 efectos

distintos sobre la
funcin
mitocondrial:
un aumento en el
desacoplamiento
el aumento de la
respiracin total

Apoo induce el metabolismo de los

cidos grasos en los mioblastos
cardacos

MICROSCOPA
CONFOCAL

FAME: Niveles
intracelulares de
cidos grasos
totales

Fatp4: Protena
transportadora de
cidos grasos

CD36: transporte
de cidos grasos

Apoo induce el metabolismo de cidos grasos in

vivo

La induccin de la lipotoxicidad cardiaca

por Apoo

Apoo induce la apoptosis

Apoo asociados con el aumento de

PPAR y la expresin de PGC-1

DISCUSIN

CONCLUSIONES