FUNDACION UNIVERSITARIA INTERNACIONAL DEL TROPICO AMERICANO (UNITROPICO). PROGRAMA DE INGENIERIA AGROFORESTAL. AREA DE BIOQUIMICA.

LABORATORIO DE IDENTIFICACION DE PROTEINAS.

PREPARADO POR: Dalia Lucia tota bayter Anderson martinez Jeferson ortiz

YOPAL, COLOMBIA. 2012.

INTRODUCCION En el laboratorio de qumica de la fundacin universitaria internacional del trpico americano llevaremos a cabo la prctica de laboratorio de identificacin de protenas, donde veremos como reaccionaran con los diferentes reactivos y que caractersticas podemos determinar de aquellos. Tambin aplicaremos conceptos y analizaremos sus caractersticas con los conocimientos que tenemos de protenas. MATERIALES 20 tubos de ensayo Un vaso precipitado de 250ml 2 vasos de precipitados de 150ml 2 pipetas de 5ml Un embudo de vidrio mediano Un Erlenmeyer de 150ml Una gradilla Una planta de calentamiento Un aro con nuez Una propipeta Una pinza para tubo de ensayo Un pedazo mediano de gasa Una propeta de 100ml

OBJETIVOS Objetivo general

Identificar los diferentes factores que afectan la estabilidad de las protenas

Objetivo especifico
Identificar protenas con el reactivo de biuret. Identificar aminocidos con grupos bencnicos utilizando el reactivo de million. Identificar los aminocidos azufrados con acido ntrico y hidrxido de bario Realizar el proceso de desnaturalizacin.

MARCO TERICO
Las protenas desempean un papel, crucial en casi todos los procesos biolgicos, en la catlisis, la transduccin de seales y como soportes estructurales (Mark et al, 2008). Se pueden encontrar en todas partes de la clula; formando parte de la membrana celular, en los ribosomas, junto al ARN en el citoplasma, en los cromosomas junto al ADN, como enzimas etc. (Macarulla et al, 1994). Son las biomolculas ms abundantes en el contenido celular (50% de su peso seco). Una finalidad primordial de la bioqumica es el determinar cmo las secuencias de aminocidos especifican la conformacin y, por tanto, la funcin de las protenas (Mark et al, 2008). Los aminocidos tienen diferentes funciones en el organismo, pero ante todo sirven como unidades bsicas de los pptidos y las protenas (Koolman, 2005).

Tipos de protenas: Enzimas: Catalizadores biolgicos altamente especficos. Reserva: Almacenamiento de elementos nutritivos. Transportadoras: Trasportan tipos especficos de molculas por la sangre. Contrctiles: Elementos esenciales de los sistemas mviles y contrctiles. Protectoras: Defensiva. Hormonas: Regulan el metabolismo y distintos procesos biolgicos. Receptores: Reconoce especficamente ciertos grupos qumicos de hormonas, neurotransmisores u otros mediadores. Estructurales: Elementos estructurales. Su estudio estructural pasa por reconocer cuadro (4) niveles diferentes de organizacin en una protena: Estructura primaria. Estructura segundaria. Estructura terciaria. Estructura cuaternaria.

Se da por conocida la estructura de una protena cuando podemos describir los cuatro niveles con un grado razonable de precisin. (Battaner, 1993) Conocemos como estructura primaria a la secuencia de aminocidos de una protena, esta informacin nos dice que aminocidos y en qu orden estn colocados en la estructura polipeptidica. (Battaner, 1993)

La estructura segundaria de una protena es el plegamiento que la cadena peptidica experimenta gracias al establecimiento de enlaces de hidrogeno entre tomos de las distintas uniones peptidicas -CO-NH-. Aunque este plegamiento puede adquirir diferentes formas las ms importantes son las hlices y laminas. (Battaner, 1993) Con o sin estructura segundaria la cadena peptidica presenta un plegamiento tridimensional que adopta una forma determinada en el espacio; la estructura terciaria consiste en la disposicin espacial de los distintos grupos moleculares de una protena, determina la fijacin de ligados especficos. Cuando una protena consta de ms de una cadena polipeptidica, decimos que tiene una estructura cuaternaria. La estructura cuaternaria entonces queda definida por el numero de polipeptidos presentes en una protena y su disposicin espacial. (Battaner, 1993). En resumen la estructura primaria describe la secuencia lineal de los aminocidos que poseen las protenas, la estructura segundaria refiere a la adopcin de conformaciones locales por la formacin de puentes de hidrogeno entre los aminocidos; la estructura terciaria se refiere al plegamiento total de las protenas en las que se intervienen enlaces disulfuro, fuerzas de Vander Walls e interacciones hidrofilicos e hidrofobicas, la funcin de las protenas depende de su estructura terciaria; y la estructura cuaternaria se refiere a la asociacin de dos o ms polipeptidos con estructura terciaria (Macarulla, et al, 1994). El fenmeno de desnaturalizacin se refiere a la perdida de la estructura cuaternaria y terciaria por medio de mtodos fsicos fuertes como la aplicacin de calor y rayos X de alta energa o mtodos qumicos como acidos fuertes (H2SO4, HCl) o con reactivos como la urea y el amoniaco (Macarulla, et al, 1994). La leche contiene Casena, la principal protena de la leche, se encuentra dispersa como un gran nmero de partculas slidas tan pequeas que no sedimentan, y permanecen en suspensin. Estas partculas se llaman micelas y la dispersin de las mismas en la leche se llama suspensin coloidal (Carrillo et al, 2010). La clara de huevo Representa el 60% del peso del huevo. Est constituida por agua (90%) y un 10% de protenas de alto valor biolgico (ovoalbmina, ovoglobulina, ovomucina, etc). Es una sustancia viscosa, transparente y se coagula a 65 C adquiriendo un color blanco. Estas protenas tambin son responsables de la espuma al montar las claras (Carrillo et al, 2010). En la pasta, contiene alrededor de 18 de aminocidos, como a cistina, fenilamina, glicina, entre otros, Estos aminocidos se combinan para formar protenas. Las protenas de la pasta son usadas por nuestro organismo para formar nuestros msculos y tambin son necesarias para mantener nuestra masa muscular.

En la carne Tienen funcin estructural ya que constituyen las miofibrillas de la clula muscular. Podemos distinguir: protenas que forman filamentos delgados: actina, tropomiosina, troponina, alfa actinina, beta actinina; protenas que forman filamentos gruesos: miosina, protena C, protena M. La reaccin de biuret es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida (Portillo et al, 2009).Est hecho de KOH y sulfato cprico (CuSO4), El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta (Portillo et al, 2009). El reactivo de millon es una mezcla de nitrato mercuroso y mercurio en cido ntrico. En contacto con protenas, los compuestos mercricos en medio fuertemente ntrico (reactivo de Millon) se condensan con el grupo fenlico del aminocido tirosina, formando complejos de color rojizo (Portillo et al, 2009). La Reaccin Xantoproteica se debe a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro (Portillo et al, 2009) (Carrillo et al, 2010).

Las protenas presente en la leche Protenas. La leche de vaca contiene de 3-3,5 por ciento de protenas, distribuida en casenas, protenas solubles o cero protenas y sustancias nitrogenadas no proteicas. Son capaces de cubrir las necesidades de aminocidos del hombre y presentan alta digestibilidad y valor biolgico. Adems del papel nutricional, se ha descrito su papel potencial como factor y modulador del crecimiento http://www.alimentacion-sana.com.ar/informaciones/novedades/leche%202.htm

Las protenas presente en la clara de huevo La principal protena de la clara de huevo es la ovoalbmina, un tipo de albmina que constituye entre el 60% y el 65% del peso de la clara de huevo. Adems de tener el

mejor perfil proteico que se puede encontrar en un alimento, la clara contiene vitaminas y minerales y aporta aproximadamente 17 caloras. Adems de la ovoalbmina, la clara de huevo tiene otras protenas como la ovomucina (2%), responsable de cuajar el huevo pochado o frito, la conalbmina (14%) y el ovomucoide (2%). http://alimentosproteinas.com/huevo Desnaturalizacin de las protenas Cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su interaccin con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa (Figura inferior). Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija. Estado nativo Estado desnaturalizado

Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitar la agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la protena se encuentra desnaturalizada (Figura superior).

Floculo Es la protena desnaturalizada, pierde su estructura y por lo cual pierde su propiedad de solubilidad

DESNATURALIZA CIN TRMICA

Agregar 3 ml de leche a un tubo de ensayo

Agregar 2 ml de clara de huevo a un tubo de ensayo

Depositarlos en un vaso con agua caliente

La leche cambio de color

Las protenas de la clara del huevo se desnaturalizaron y formaron floculo

LECHE

HUEVO

DESNATURALIZACIN POR PH EXTREMO

En 2 tubos de ensayo agregar 3 ml de leche en cada uno

En 2 tubos de ensayo agregar 2 ml de clara de huevo

Se adiciona 0,5 ml de HCl diluido

Se adiciona 0,5 ml de NaOH diluido

Se adiciona 0,5 ml de HCl diluido

Se adiciona 0,5 ml de NaOH diluido

Colocarlos a bao maria

No sufri ningn cambio

En la parte superior se formo una capa de nata de grasa

Formacin de floculo

Las protenas se desnaturalizaro n y formacin de floculo

HUEVO

LECHE

PRECIPITACIN POR SALES

En 2 tubos de ensayo se agregan 3 ml de leche

En 2 tubos de ensayo se agregan 2 ml de clara de huevo

Se adiciona NaCl, gota a gota, hasta q produzca un cambio

Adiciona cloruro de magnesio

Se adiciona NaCl, gota a gota, hasta q produzca un cambio

Adiciona cloruro de magnesio

Se nota una precipitacin formando 2 pacas

No hubo ningn cambio

Se formo una precipitacin

Formacin de 2 capas y formacin de floculo

PRECIPITACIN POR SALES

En 2 tubos de ensayo se agregan 3 ml de leche

En 2 tubos de ensayo se agregan 2 ml de clara de huevo

Se adiciona NaCl, gota a gota, hasta q produzca un cambio

Adiciona cloruro de magnesio

Se adiciona NaCl, gota a gota, hasta q produzca un cambio

Adiciona cloruro de magnesio

Se nota una precipitacin formando 2 pacas

No hubo ningn cambio

Se formo una precipitacin

Formacin de 2 capas y formacin de floculo

DESNATURALIZACIN POR PRESENTE DE SOLVENTE ORGNICO

En 3 tubos de ensayo se adicionan 5 ml de leche en cada uno

En 3 tubos de ensayo se adicionan 5 ml de clara de huevo a cada uno

Se agrega 5 ml de etanol, agite deje reposar

Se agrega 5 ml de acetona, agite deje reposar

Se agrega 5 ml de mescla de etanol y acetona, agite y deje reposar

Se agrega 5 ml de etanol, agite deje reposar

Se agrega 5 ml de acetona, agite deje reposar

Se agrega 5 ml de mescla de etanol y acetona, agite y deje reposar

Se dividieron en 3 capas, y en la mitad se formo una capa de

Formacin de floculo en la parte superior y se precipita un material de la leche

Formacin de una capa delgada de floculo y una gran capa de material precipitado

Se formo en la parte superior floculo y en la parte inferior se precipito

Formacin de 3 capas y en la mitad se formo una capa de floculo

Se formo 3 capas, en la mitad e formo una capas de floculo

DESNATURALIZACIN POR FORMACIN DE SALES

En un tubo de ensayo se le agregan 5 ml de leche

En un tubo de ensayo se le agregan 5 ml de clara de huevo

Se le adiciona 2 ml de acido ntrico

Se le adiciona 2 ml de acido ntrico

Formacin de 2 capas, en a capa superior un formacin de floculo y en la inferior una coloracin amarilla

Cocino y desnaturalizo las protenas presente en la clara de huevo y una formacin de floculo y una coloracin amarilla

DESNATURALIZACIN POR MEALES PESADOS

En un tubo de ensayo colocar 3 ml de leche

En un tubo de ensayo colocar 3 ml clara de huevo

Adicionar gota a gota hasta 10 gota la solucin de nitrato de mercurio, agite y dejarlo reposar

RECONOCIMIENTOS DE AMINOCIDOS AZUFRADOS

En un tubo de ensayo adicionar 3 ml de leche

En un tubo de ensayo adicionar 3 ml de clara de huevo

Agregar 2 ml de NaOH al 20% y luego 10 gotas de acetato de plomo al 5%

Agregar 2 ml de NaOH al 20% y luego 10 gotas de acetato de plomo al 5%

Calentar el tubo en bao maria

Se formo 3 capas, en la superior una coloracin amarilla, en la mitad una formacin de floculo y en la inferior material precipitado

Se presento una coloracin crema

REACCIN XANTOPROTEICA (AMINOCIDOS AROMTICOS)

En un tubo de ensayo se coloca 3 ml de leche

En un tubo de ensayo se coloca 3 ml de clara de huevo

Adicionar 1 ml de NHO concentrado y caliente en bao maria

Enfriarlo en agua y hielo y adiciona gota a gota de NaOH al 40%, agitar y en frio observar

Formacin de 3 capas, en la superior presento una coloracin marrn, en la mitad formacin de floculo y en la inferior material precipitado

Formacin de 3 capas, en la superior presento una coloracin marrn, en la mitad formacin de floculo y en la inferior material

CONCLUSIONES Nos dios de cuenta que con cualquiera de las pruebas realizadas en este laboratorio las protenas se desnaturalizan Cuando se desnaturalizan hay formacin de floculo por lo cual pierde su estructura y su propiedad de solubilidad Cuando pierde la propiedad de solubilidad, hay precipitacin de materiales Se Identifico protenas contenidas en la leche como casena, en la clara de huevo como albumina, y la carne con la prueba de biuret. Se Identifico aminocidos de grupos bencnicos como en la leche, clara de huevo, carne y pasta. Se Identifico los aminocidos en todos los alimentos utilizados azufrados con acido ntrico y hidrxido de bario Se noto que el proceso de desnaturalizacin de protenas se denotaron caractersticas fsicas como coagulacin y precipitacin en la leche y la pasta.