Las enzimas

La Enzima Como Unidad Fundamental De Vida Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. Los propios genes son reguladores de la produccin de las enzimas; por tanto, genes y enzimas pueden considerados como las unidades fundamentales de la vida. Este concepto poco difundido casi hasta el siglo XX, se ha desarrollado y concretado cada vez mas, y constituye un componente esencial de diversas disciplinas: la microbiologa, la fisiologa, la bioqumica, la inmunologa y la taxonoma, formando adems parte del campo aplicado, en gran variedad de industrias. El rasgo particular de las enzimas es que pueden catalizar procesos qumicos a baja temperatura, compatible con la propia vida, sin el empleo de sustancias lesivas para los tejidos. La vida es, en sntesis, una cadena de procesos enzimticos, desde aquellos que tienen por sustratos los materiales mas simples, como el agua (H2O) y el anhdrido carbnico (CO2), presentes en los vegetales para la formacin de hidratos de carbono, hasta los mas complicados que utilizan sustratos muy complejos. La formacin de los prtidos, los glcidos y los lpidos es un ejemplo tpico. Son a la vez degradados y reconstruidos por otras reacciones enzimticas, produciendo energa a una velocidad adecuada para el organismo, sin el gasto energtico que exigen los mtodos qumicos de laboratorio. Importancia biomdica de las enzimas Sin enzimas, no sera posible la vida que conocemos. Igual que la biocatlisis que regula la velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiolgicos, las enzimas llevan a cabo funciones definitivas relacionadas con salud y la enfermedad. En tanto que, en la salud todos los procesos fisiolgicos ocurren de una manera ordenada y se conserva la homeostasis, durante los estados patolgicos, esta ltima puede ser perturbada de manera profunda. Por ejemplo, el dao tisular grave que caracteriza a la cirrosis heptica puede deteriorar de manera notable la propiedad de las clulas para producir enzimas que catalizan procesos metablicos claves como la sntesis de urea. La incapacidad celular para convertir el amoniaco txico a urea no txica es seguida por intoxicacin con amoniaco y por ultimo coma heptico. Un conjunto de enfermedades genticas raras, pero con frecuencia debilitantes y a menudo mortales, proporciona otros ejemplos dramticos de las drsticas consecuencias fisiolgicas que pueden seguir al deterioro de la actividad enzimtica, inclusive de una sola enzima. Despus del dao tisular grave (por ejemplo, infarto del miocardio) o siguiendo a multiplicacin celular descontrolada (por ejemplo, carcinoma prosttico), las enzimas propias de tejidos especficos pasan a la sangre. Por lo tanto, la determinacin de estas enzimas intracelulares en el suero sanguneo proporciona a los mdicos veterinarios informacin valiosa para el diagnstico y el pronstico. Caracteristicas de las enzimas Desde el punto de vista qumico, las enzimas estn formadas de carbono (C), Hidrgeno (H), oxigeno (O), Nitrgeno (Ni), y Azufre (S) combinados, pero siempre con peso molecular bastante elevado y comn propiedades catalticas especificas. Su importancia es tal que puede considerarse la vida como un "orden sistemtico de enzimas

funcionales". Cuando este orden y su sistema funcional son alterados de algn modo, cada organismo sufre ms o menos gravemente y el trastorno puede ser motivado tanto por la falta de accin como por un exceso de actividad de enzima. Las enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la velocidad a la cual se realizan los procesos fisiolgicos, producidos por los organismos vivos. En consecuencia, las deficiencias en la funcin enzimtica causan patologas. Las enzimas, en los sistemas biolgicos constituyen las bases de las complejas y variadas reacciones que caracterizan los fenmenos vitales. La fijacin de la energa solar y la sntesis de sustancias alimenticias llevadas a cabo por los vegetales dependen de las enzimas presentes en las plantas. Los animales, a su vez, estn dotados de las enzimas que les permiten aprovechar los alimentos con fines energticos o estructurales; las funciones del metabolismo interno y de la vida de relacin, como la locomocin, la excitabilidad, la irritabilidad, la divisin celular, la reproduccin, etc. Estn regidas por la actividad de innumerables enzimas responsables de que las reacciones se lleven a cabo en condiciones favorables para el individuo, sin liberaciones bruscas de energa a temperaturas fijas en un medio de pH, concentracin salina, etc.; prcticamente constante. A diferencia de un catalizador inorgnico que interviene en numerosas reacciones las enzimas producidas por los organismos vivos habitualmente solo catalizan un tipo de reaccin o solo una reaccin determinada; la especificidad de las enzimas es tan marcadas que en general actan exclusivamente sobre sustancias que tienen una configuracin precisa; por ejemplo, solo atacan a los aminocidos que tienen su carbono asimtrico con estructura L y no muestran la menor actividad sobre formas idnticas de dichos aminocidos pero que sean del tipo D. En los sistemas biolgicos se llevan a cabo diversas reacciones a partir de la misma sustancia; por ejemplo algunos microorganismos convierten la glucosa en alcohol y bixido de carbono, al paso que otros grmenes la convierten en cido lctico o cido pirvico o acetaldehdo. Esto quiere decir que la glucosa puede descomponerse en distintos productos y aunque todas las posibilidades son tericas y prcticamente posibles la presencia de ciertas enzimas favorece uno de los caminos que llevan a la acumulacin de determinados compuestos. Las enzimas, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente especficos que:

Modifican la velocidad de los cambios promovidos por ellas. Determinan que sustancias particulares, de preferencia a otras distintas son las que van a sufrir los cambios. Impulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda seguir una sustancia, cual de ellos en especial, ser el utilizado.

Las enzimas representan las sustancias encargadas de graduar la velocidad de una reaccin determinada en el interior de las clulas; como en las diversas clulas se realizan infinidad de reacciones, ya que en una de ellas se encuentran varios miles de sustancias, se deduce, tambin, la presencia de varios miles de enzimas. Es posible, por lo tanto, que la mayor parte de esta estructura protenica celular est formada por enzimas, encargadas de las diversas funciones de sntesis, degradacin, oxidacin, etc. caractersticas de la actividad vital de los distintos organismos.

La estructura enzimtica Por su estructura y composicin qumica puede afirmarse que el origen de las enzimas esta vinculando al origen de las sustancias proteicas. Al hablar del origen de la vida se ha citado el xito de los experimentos realizados en el laboratorio para la produccin de aminocidos; estos aminocidos son los que precisamente constituyen la base del edificio proteico. Tambin en el laboratorio se ha intentado la sntesis de protenas a partir de aminocidos. La sede de las enzimas es el citoplasma. Los cloroplastos vegetales contienen una amplia gama enzimas encargadas de la funcin cloroflica, proceso que a travs de reacciones qumicas complejas y encadenadas transforman compuestos inorgnicos, como el agua, y el anhdrido carbnico, en sustancias complejas adecuadas para ser entre otras cosas el alimento fundamental de los animales. En las mitocondrias existe un sistema de transporte de electrones que determinan importantes fenmenos de oxidorreduccin, durante los cuales se forman notables cantidades de ATP, que es un compuesto altamente energtico del que depende la mayor parte de metabolismo y por tanto el trabajo de las clulas; en las mitocondrias se produce el metabolismo enzimtico de los cidos grasos, los cuales son en parte elaborados tambin en el citoplasma. En los ribosomas tiene lugar concretamente todas las sntesis de las sustancias proteicas, mientras que en los lisosomas se producen enzimas hidrolticos cuya misin escindir, con la intervencin del agua, molculas grandes en otras menores, que pueden a su vez ser utilizadas por las clulas; en cambio, las enzimas glucolticos estn difundidos en el citoplasma. La localizacin de las sedes de las distintas operaciones enzimticas antes mencionadas ha sido posible a travs del sistema de ruptura de las clulas y de la separacin de los distintos componentes mediante centrifugacin diferencial del homogeneizado de estas la ruptura celular y la subdivisin de los componentes subcelulares se realizan actualmente utilizando los tejidos, por ejemplo con saltos bruscos desde temperaturas inferiores a 0 C hasta temperaturas mas elevadas con cambios de presin osmtica o mediante ultrasonidos. Naturaleza qumica de las enzimas Existen numerosas razones para afirmar que las enzimas son en su inmensa mayora protenas. Las ms importantes son las siguientes: a. El anlisis de las enzimas obtenidas en forma ms pura, cristalizada, demuestra que son protenas. b. Las enzimas son inactivadas a altas temperaturas y, en general, la cintica de la desnaturalizacin trmica de las enzimas da resultados muy parecidos a los de la desnaturalizacin trmica de las protenas. c. Las enzimas son activadas en unas zonas muy restringidas de pH, y presenta un punto ptimo de ph donde su actividad es mayor. Las protenas en su punto isoelctrico, muestran propiedades parecidas desde el punto de vista de viscosidad, solubilidad, difusin, etc., que resulta del todo similares a las propiedades de este tipo que muestran las enzimas. d. Todos los agentes que desnaturalizan a las protenas tambin destruyen o inactivan a las enzimas, ya sea el calor, los cidos fuertes, o los metales pesados que pueden combinarse con ellas.

e.

Los problemas de solubilidad y de precipitacin son comunes a las protenas y las enzimas; en general, son solubles en agua o soluciones salinas, insolubles en alcohol, precipitan con determinadas concentraciones de sales neutras, etc.

Composicin qumica de las enzimas Los conocimientos sobre la composicin qumica de las enzimas constituyeron materia de numerosas controversias hasta 1926, cuando J.B Sumner (1887-1955) consigui cristalizar la ureasa, enzima que transforma la urea en anhdrido carbnico y amoniaco, y demostrar que era una sustancia proteica. A, partir de entonces fueron aisladas otras enzimas en forma pura, cristalina, y el anlisis demostraba siempre la presencia de una protena, simple o conjugada. Cuando los anlisis qumicos demuestran que la enzima es una protena conjugada, pueden distinguirse en el dos partes bien diferenciadas:

El grupo prosttico (Coenzima) La protena (Apoenzima)

En algunas enzimas oxidantes fue observada la presencia de la cromoprotenas, en las cuales el grupo prosttico esta representado por un compuesto que contiene Fe y otro elemento, el cual desempea un papel importante en la combinacin de la protena con el sustrato; otras veces este grupo prosttico es derivada de vitaminas (como la vitamina B); en muchos casos resulta fcil de separar de la molcula proteica. No obstante una vez separadas, las dos unidades no muestran actividad enzimtico; por tanto el grupo proteico (coenzima) y el grupo proteico (apoenzima) han de estar ntimamente ligados entre si para ser operativos. Por consiguiente, de las enzimas pueden distinguirse los formados por:

Solo protenas, que difieren entre si por la secuencia con que los aminocidos estn combinados, como la ureasa y las enzimas digestivas (la pepsina y la tripsina) Los conjugados, separados en dos entidades qumicas bien definidas: la coenzima y la apoenzima.

Despus del descubrimiento de Sumner, el nmero de las enzimas y el estudio de sus actividades qumicas proporcionaron un notable impulso en la enzimologa, y la gran cantidad de las enzimas que rpidamente se acumulaban determinaron la necesidad de utilizar una clasificacin o nomenclatura para evitar errores y facilitar la comprensin de futuros investigadores. Nomenclatura y clasificacin de las enzimas Cien aos atrs solo se conocan enzimas, muchas de estas, catalizaban la hidrlisis de enlaces covalentes. Algunas enzimas, de manera especial las que fueron descubiertas en un principio, recibieron nombres ligados mas bien a su sitio de procedencia anatmica que no siguen ninguna regla ni sistema; tal es el caso de la ptialina de la saliva, que ataca al almidn, de la pepsina del estmago y de la tripsina del pncreas, que atacan protenas; de la renina, que coagula la leche; de la papaina, enzima proteoltica que se encuentra en la papaya y de las catepsinas, tambin proteasas, que se encuentran en las clulas. Las enzimas relacionadas con la coagulacin de la sangre, como son la trombina, la plasmina, el plasmingeno, etc. reciben tambin nombres sistematizados. Al describir nuevas enzimas y proceder a su caracterizacin estricta se aplicaron reglas de nomenclatura basadas en el nombre del sustrato atacado, o en el tipo general de

sustrato, o en la reaccin catalizada y se ha aadido convencionalmente, la terminacin -asa. Por ejemplo: las lipasas (hidrolizan lpidos o grasas), las amilasas (hidrolizan almidn), las proteasas (hidrolizan protenas), las esterasas (basado en la unin general de tipo ster presentes en muchas sustancias), colesterol esterasa (si la esterasa es especfica de los esteres de colesterol) y acetilcolina esterasa (si la esterasa de la acetilcolina). Otros ejemplos: las fosfatasas son enzimas que atacan las uniones ster, pero en este caso, toman su nombre del grupo vecino a la unin que van a atacar, de manera que se denominan fosfatasas (cuando quitan una molcula de monofosfato), pirofosfatasas (cuando quitan el cido fosfrico como esteres dobles (pirofosfatos), o triples, etc.) De la misma manera, las carbohidrasas se denominan as genricamente, pero pueden comprender enzimas con nombres proveniente del sustrato particular sobre el que actan como la amilasa que ataca al almidn y la celulasa que acta sobre la celulosa y, en otras ocasiones, se denominan de acuerdo con la unin atacada, como la beta -glucosidasa que acta sobre las uniones beta-glucosdicas. Los ejemplos se pueden extender a todos los terrenos de la actividad enzimtica, como en las enzimas proteolticas, las fosforilasas, las nucleasas, etc. Esta manera de llamarlas, se demostr que era inadecuada porque al descubrirse varias enzimas, notaron que varias enzimas catalizaban reacciones diferentes del mismo sustrato, por ejemplo, oxidacin o reduccin de la funcin alcohol de un azcar. Aunque el sufijo asa contina en uso; actualmente, al nombrar a las enzimas, se enfatiza el tipo de reaccin catalizada. Por ejemplo: las hidrogenasas catalizan la eliminacin de hidrogeno y las transferasas, reacciones de transferencia de grupo. Con el descubrimiento de mas y mas enzimas, surgieron ambigedades y con frecuencia no estaba claro cual era la enzima que un investigador deseaba estudiar. Para remediar esta deficiencia, la Comisin para el estudio de las enzimas, que constituye con respecto a los sistemas anteriores un punto de vista ms uniforme, preciso y descriptivo; esta formada por la Unin Internacional de Bioqumica (IUB) adopto, en 1964, un sistema complejo pero inequvoco de la nomenclatura enzimtica basado en el mecanismo de reaccin. El sistema se basa en la reaccin qumica catalizada que es la propiedad especfica que caracteriza a cada enzima las cuales se agrupan en clases, porque catalizan procesos semejantes, y en subclases que especifican con mayor exactitud la reaccin particular considerada. En general, las enzimas reciben un nombre de acuerdo con el sustrato o los sustratos que participan en la reaccin seguidos por el tipo de reaccin catalizada y, por fin, la terminacin -asa. A menudo los nombres as obtenidos resultan largos y complejos, por lo que es muy difcil que en la prctica se pueda excluir el uso de los nombres triviales, consagrados por la costumbre. Sin embargo, con fines de sistematizacin, se reconoce la necesidad de aceptar el nuevo sistema. Aunque su claridad y carencia de ambigedad recomiendan al sistema de nomenclatura IUB para trabajos de investigacin, nombres ms ambiguos, pero bastante ms cortos persisten en libros de texto y en el laboratorio clnico. Por esta razn, a continuacin solo se presenta principios generales del sistema IUB: 1. Las reacciones y las enzimas que las catalizan se dividen en 6 clases principales, cada una con 4 a 13 subclases. 2. El nombre de la enzima tiene 2 partes: la primera es el nombre del o los sustratos; la segunda, con terminacin asa, indica el tipo de reaccin catalizada. 3. Informacin adicional, si es necesario aclarar la reaccin, puede seguir el parntesis. Por ejemplo: la enzima que cataliza L-malato + NAD= = piruvato +

CO2 NADH + H=, se denomina como 1.1.1.37 L-malato:NAD+ oxidorreductasa (descarboxilante). 4. Cada enzima tiene un numero clave (E.C.) que caracteriza al tipo de reaccin segn la clase (primer digito), subclase (segundo digito) y subclase (tercer digito). El cuarto digito es para la enzima especfica. As, E.C. 2.7.1.1 denota la clase 2 (una transferasa), subclase 7 (transferencia de fosfato), sub-clase 1 (una funcin alcohol como aceptor de fosfato). El ltimo digito denota a la enzima hexoquinasa o ATP: D-hexosa-6-fosforotransferasa, enzima que cataliza la transferencia de fosfato desde el ATP al grupo hidroxilo de carbono 6 de la glucosa. Al final de sus y trabajos, clasifico las enzimas en seis grupos principales, correspondientes por sus trminos a las raciones que cada enzima ejerce sobre el sustrato. Estos grupos se subdividen en otro, segn el tipo de sustrato y los tomos concretos que son sensibles a sus acciones. Estos seis grupos son los siguientes: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Oxidoreductasas Transferasas Hidrolasas Isomerasa Liasas Ligasas

1. Oxido-reductasas: Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y las reducciones biolgicas que intervienen de modo fundamental en los procesos de respiracin y fermentacin. Las oxidoreductasas son importantes a nivel de algunas cadenas metablicas, como la escisin enzimtica de la glucosa, fabricando tambin el ATP, verdadero almacn de energa. Extrayendo dos tomos de hidrgeno, catalizan las oxidaciones de muchas molculas orgnicas presentes en el protoplasma; los tomos de hidrgeno tomados del sustrato son cedidos a algn captor. En esta clase se encuentran las siguientes subclases principales: deshidrogenasas y oxidasas. Son ms de un centenar de enzimas en cuyos sistemas actan como donadores, alcoholes, oxcidos aldehdos, cetonas, aminocidos y muchos otros compuestos y, como receptores, las propias coenzimas, citocromos, O2, etc. 2. Transferasas: Estas enzimas catalizan la transferencia de una parte de la molcula (dadora) a otra (aceptora). Su clasificacin se basa en la naturaleza qumica del sustrato atacado y en la del aceptor. Tambin este grupo de enzimas actan sobre los sustratos mas diversos, transfiriendo grupos metilo, aldehdo, glucosilo, amina, sulfat, sulfrico, etc. 3. Hidrolasas: Esta clase de enzimas actan normalmente sobre las grandes molculas del protoplasma, como son la de glicgeno, las grasas y las protenas. La accin cataltica se expresa en la escisin de los enlaces entre tomos de carbono y nitrgeno (C-Ni) o carbono oxigeno (C-O); Simultneamente se obtiene la hidrlisis (reaccin de un compuesto con el agua) de una molcula de agua. El hidrgeno y el oxidrilo resultantes de la hidrlisis se unen respectivamente a las dos molculas obtenidas por la ruptura de los mencionados enlaces. La clasificacin de estas enzimas se realiza en funcin del tipo de enlace qumico sobre el que actan. A este grupo pertenecen protenas muy conocidas: la pepsina, presente en el jugo gstrico, y la tripsina y la quimiotripsina, segregada por el pncreas. Desempean un

papel esencial en los procesos digestivos, puesto que hidrolizan enlaces ppticos, estricos y glucosdicos. 4. Isomerasas: Transforman ciertas sustancias en otras ismeras, es decir, de idntica formula emprica pero con distinto desarrollo. Son las enzimas que catalizan diversos tipos de isomerizacin, sea ptica, geomtrica, funcional, de posicin, etc. Se dividen en varias subclases. Las racemasas y las epimerasas actan en la racemizacin de los aminocidos y en la epimerizacin de los azcares. Las primeras son en realidad pares de enzimas especficas para los dos ismeros y que producen un solo producto comn. Las isomerasas cis trans modifican la configuracin geomtrica a nivel de un doble ligadura. Las xido reductasas intramoleculares catalizan la interconversin de aldosas y cetosas, oxidando un grupo CHOH y reduciendo al mismo tiempo al C = O vecino, como en el caso de la triosa fosfato isomerasa, presente en el proceso de la gluclisis ; en otros casos cambian de lugar dobles ligaduras, como en la isopentenil fosfato isomerasa, indispensable en el cambio biosintico del escualeno y el colesterol. Por fin las transferasas intramoleculares (o mutasas) pueden facilitar el traspaso de grupos acilo, o fosforilo de una parte a otra de la molcula, como la lisolecitina acil mutasa que transforma la 2 lisolecitina en 3 lisolecitina, etc. Algunas isomerasa actan realizando inversiones muy complejas, como transformar compuestos aldehdos en compuestos cetona, o viceversa. Estas ultimas desarrollan una oxidorreduccin dentro de la propia molcula (oxido reductasa intramoleculares) sobre la que actan, quitando hidrgeno, a algunos grupos y reduciendo otros; actan ampliamente sobre los aminocidos, los hidroxcidos, hidratos de carbono y sus derivados. 5. Liasas: Estas enzimas escinden (raramente construyen) enlaces entre tomos de carbono, o bien entre carbono y oxigeno, carbono y nitrgeno, y carbono y azufre. Los grupos separados de las molculas que de sustrato son casi el agua, el anhdrido carbnico, y el amoniaco. Algunas liasa actan sobre compuestos orgnicos fosforados muy txicos, escindindolos; otros separan el carbono de numerosos sustratos. 6. Ligasas: Es un grupo de enzimas que permite la unin de dos molculas, lo cual sucede simultneamente a la degradacin del ATP, que, en rigor, libera la energa necesaria para llevar a cabo la unin de las primeras. Se trata de un grupo de enzimas muy importantes y recin conocidas, pues antes se pensaba que este efecto se llevaba a cabo por la accin conjunta de dos enzimas, una fosfoquinasa, para fosforilar a una sustancia A (A + ATP A - + ADP) y una transferasa que pasara y unira esa sustancia A, con otra, B (A - + B A B + Pi). A este grupo pertenecen enzimas de gran relevancia reciente, como las aminocido ARNt ligasas conocidas habitualmente con el nombre de sintetasas de aminocidos ARNt o enzimas activadoras de aminocidos que representan el primer paso en el proceso biosinttico de las protenas, y que forman uniones C-O; las cido-tiol ligasas, un ejemplo tpico de las cuales es la acetil coenzima. A sintetasa, que forma acetil coenzima. A partir de cido actico y coenzima A ; las ligasas cido amoniaco (glutamina sintetasa), y las ligasas cido-aminocido o sintetasas de pptidos, algunos de cuyos ejemplos ms conocidos son la glutatin sintetasa, la carnitina sintetasa, etc. La accin de estas enzimas se manifiesta con la formacin de enlaces entre tomos de carbono y oxigeno de diversas molculas, o bien entre carbono y azufre, carbono y nitrgeno y carbono y carbono. Las ligasas utilizan siempre, para el proceso de reaccin, la energa proporcionada por el ATP o compuestos homlogos que son

degradados, Por consiguiente las enzimas de esta clase son los nicos que intervienen en reaccin no espontnea desde un punto de vista termodinmico; Actan sobre los sustratos ms diversos y revisten particular importancia en el metabolismo de los cidos nucleicos. Estas reacciones enzimticas se desarrollan en dos tiempos: en el primero se forma un complejo intermedio con potencia energtica muy alta-, en el segundo utilizan la energa obtenida para realizar la reaccin de sntesis. Grupo 1. Oxidoreductasas Accion ejemplos

Catalizan reacciones de oxidorreduccin. Dehidrogenasas Tras la accin catlica quedan Aminooxidasa modificados en su grado de oxidacin por lo que deben ser transformados antes de Deaminasas volver a actuar de nuevo. Catalasas

2. Transferasas

Transfieren grupos activos (obtenidos de Transaldolasas la ruptura de ciertas molculas) a otras Transcetolasas sustancias receptoras. Suelen actuar en procesos de interconversiones de Transaminasas azucares, de aminocidos, etc. Verifican reacciones de hidrlisis con la Glucosidasas consiguiente obtencin de monmeros a Lipasas partir de polmeros. Suele ser de tipo digestivo, por lo que normalmente actan Peptidasas en primer lugar Esterasas Fosfatasas

3. Hidrolasas

4. Isomerasas

Actan sobre determinadas molculas Isomerasas obteniendo de ellas sus ismeros de azcar funcin o de posicin. Suelen actuar en Epimerasas procesos de interconversin Mutasas Realizan la degradacin o sntesis Aldolasas (entonces se llaman sintetasas) de los Decarboxilasas enlaces denominados fuertes sin ir acoplados a sustancias de alto valor energtico.

de

5. Liasas

6. Ligasas

Realizan la degradacin o sntesis de los Carboxilasas enlaces fuertes mediante el acoplamiento Peptidosintetasas a sustancias ricas en energa como los

nuclesidos del ATP Partes del sistema enzimtico Los sistemas enzimticos en general, estn formados por la enzima propiamente dicha (apoenzima), el sustrato o los sustratos un grupo proteico (o coenzimas) y sustancias activadoras. La estructura formada por la apoenzima y la coenzima se denomina holoenzima; con cierta frecuencia se reconocen sistemas enzimticos que no tienen grupo prosttico o activadores reconocidos. Apoenzima: concepto del centro activo La apoenzima es la enzima propiamente dicha, de naturaleza proteica formada por cadenas de polipptidos, con peso molculas elevado, no dializable y termolbil. Las estudiadas analticamente hasta ahora, han sido, por razones tcnicas de peso molecular bajo, 12 a 24 000, tienen una sola cadena polipeptdica (ribonucleasa, papaina, tripsina, pepsina, etc.) excepto uno o dos casos (quimiotripsina y aldolasa) que tienen dos. El anlisis de los aminocidos que componen a diversas enzimas demuestran que tienen una estructura similar a la de cualquier protena; existen, de hecho unos cuantos casos en los que se ha determinado su secuencia completa, es decir, el orden en el que estn dispuestos todos ellos en la cadena. El anlisis de la estructura secundaria de la protena, o sea el modo como la cadena peptdica se dispone a lo largo de su eje mayor y el de la estructura terciaria, o sea la forma en que la cadena se pliega y se acomoda para formar una estructura tridimensional se conocen muy mal para todas las enzimas. Solo en el caso de la lisozima (enzima presente en las lgrimas donde funciona como un antisptico suave y que tiene la capacidad de atacar a los polisacridos que forman la pared de diversas bacterias) se ha determinado la estructura tridimensional de una enzima; para este fin se aplican las tcnicas de cristalografa de rayos x, con una solucin de dos , lo que demostr que la lisozima es una protena con su cadena de 129 aminocidos ampliamente plegada y en la que se reconoce una hendidura representante del centro activo donde se acomodan muy bien los inhibidores ciertos compuestos del tipo de carbohidratos que nulifican su actividad enzimtica. Se ha demostrado, en este caso, que es cierta regla general de que el modo como se ordenan y disponen los aminocidos determinan el arreglo espacial que permite a las otras partes del sistema enzimtico sustratos, cofactores, iones, etc. adaptarse, en el espacio, en forma adecuada, para que se lleve a cabo la accin cataltica. Por lo tanto, las estructuras indispensables que permiten la combinacin con el sustrato y que confieren propiedades enzimticas a la molcula se denominan "centro activo". Se acepta que el centro activo no es una parte muy grande de la enzima completa y, en ciertos sistemas estudiados por medio de bloqueos qumicos no parece constituir una zona de ms de 20 de dimetro. Es muy posible que el centro activo est formado por la contribucin de grupos funcionales de aminocidos situados en distintas cadenas o en diferentes repliegues de una cadena, asiendo aparecer a dichos grupos muy distantes entre ellos si se considera el orden que guardan a lo largo de la cadena polipeptdica. Un caso muy ilustrativo sobre lo que significa la estructura del centro activo desde el punto de vista de la composicin de los aminocidos es el de la triptfano pirrolasa, enzima ampliamente estudiada en bacterias desde el punto de vista de la bioqumica gentica. En ella, la modificacin de algunos aminocidos produce perdida e la actividad enzimtica, que se recupera si vuelve a incluirse los aminocidos en el orden

original; sin embargo, se pueden reemplazar dos de ellos por otros completamente distintos, y la enzima vuelve a ser totalmente activa. Es posible que con estos nuevos aminocidos se consigan tambin las condiciones de distribucin espacial de grupos funcionales y estructuras necesarias para la actividad enzimtica. El concepto de arreglo tridimensional adecuado de los aminocidos que forman la cadena polipeptdica de la enzima para lograr la actividad funcional correcta permite entender numerosos fenmenos: la necesidad de que la molcula proteica ntegra est preservada en su forma; el hecho de que la desnaturalizacin de la enzima al permitir la separacin de los pliegues, conduce a la perdida de la actividad enzimtica; que al calentar una enzima con su sustrato (por ejemplo, la invertasa con sacarosa, la transaminasa con cido alfa-cetoglutrico), se impide una desnaturalizacin que sin ellos se producira, pues es posible que el propio sustrato contribuya a sostener y reforzar la aproximacin de los pliegues de la cadena, etc. Tambin se entiende por que al atacar la ribonucleasa con pepsina y romper una sola unin peptdica que separa un tetrapptido del extremo con grupo carboxilo libre se pierde la actividad, mientras que si solo se quita los tres ltimos disminuye su accin sugiriendo as la importancia del residuo de cido asprtico para sostener el centro activo en condiciones de eficiencia, o lo que es ms probable, para formar parte del propio centro activo. Si se parte la ribonucleasa entre los aminocidos 20 y 21, y se separan los dos fragmentos, ninguno es activo, pero basta mezclarlos para que se unan en tal forma que se restablece la actividad, aunque un poco menor que la originalmente observada. El estudio detallado de la estructura del centro activo se hace por medio de inhibidores o de reactivos que se combinan de modo especfico, con algunos de los aminocidos del centro activo tales como el diisopropilfluorofosfato (DFP), que se combina con el OH del aminocido serina, en diversas esterasas, peptidasas, etc. , e inactiva el centro activo del que forman parte dicho aminocido; este inhibidor, an a concentraciones de 10-10 M, inhibe a la acetilcolinesterasa; mucho de los derivados del DFP se utilizan como gases de guerra o como insecticidas (parathion), y su utilidad se debe, en rigor a su capacidad para destruir funcionalmente ciertas enzimas. La unin del DFP al aminocido serina es muy estrecha y a permitido el anlisis de los aminocidos vecinos a l, haciendo un estudio de su ordenamiento en el centro activo. La secuencia de los centros activos de diversas enzimas hidrolticas sensibles al DFP, se demuestran que la mayora tienen cerina y a dems un aminocido dicarboxlico (asprtico o glutmico) y en el otro un aminocido neutro (alanina o glicina). Tambin se ha demostrado que la histidina, cuando menos para el caso de la quimiotripsina, forma parte del centro activo an cuando el anlisis de la secuencia no demuestra que exista cerca de la cerina ninguna histidina; se trata, por lo tanto, de otro ejemplo de una aminocido, alejado e otro, y en distinto pliegue de la cadena, que integra el centro activo. Teniendo en cuenta estos hechos, se deduce, por lo tanto, que la actividad de la enzima depende en parte de la disposicin o arreglos de los aminocidos y grupos prostticos en determinada regin de la protena. Los aminocidos que componen a las protenas pueden tener moderadas actividades catalticas, aunque de ninguna manera comparable en su magnitud, cuando se les considera en forma aislada, a las que muestran la gran molcula proteica. De hecho para muchos sistemas enzimticos se han ideado modelos anlogos, o sea sustancias qumicas sencillas que suelen reproducir los efectos ocasionados por la enzima, tal es el caso de los anlogos, a base de piridoxal que

representan la parte activa de enzimas descarboxilantes y transaminantes. Esto no significa que necesariamente, en el estado natural, la enzima funcione como lo hace el anlogo pues muchos sistemas pudieran tener otro mecanismo de operacin; la hidrlisis del almidn lo mismo se logra con la adicin del cido que con la enzima especfica amilasa, an cuando en el primer caso se atacan indiscriminadamente numerosas uniones glucosdicas, y con la enzima, en cambio solo se desprenden, uno tras otro fragmentos de dos unidades de glucosa de los extremos de las ramificaciones.

Conformacin de la enzima y propiedades del centro activo. La propiedad cataltica de las enzimas parece depender de la facilidad con la que ayudan a que se pongan en contacto las sustancias reaccionantes para dar el producto o los productos de la reaccin. Esto implica que el sistema enzimtico tenga una conformacin especial o sea, una disposicin adecuada de os grupos funcionales aminocidos de la apoenzima y grupos prostticos, cuando existen estos y de las molculas mismas de los sustratos que se unirn a aquellos y permitirn que se lleve a cabo la reaccin qumica. Este acercamiento de las sustancias reaccionantes de los grupos prostticos y los grupos funcionales fue las razn del modelo de Ehrlich, conocido clsicamente como de la "llave y la cerradura". As la enzima sera un molde tridimensional en negativo, de la estructura tambin tridimensional, en positivo de los reaccionantes que se adaptaran perfectamente a ala disposicin de la enzima. Sin embargo ha sido necesario reconsiderar esta situacin y sugerir de acuerdo con Koshland la teora de un "acomodo inducido".

As las enzimas pueden sufrir un cambio en su estructura desde el momento en que entran en contacto con los reaccionantes, sustratos y cofactores, y es posible que todos ellos modifiquen el arreglo tridimensional de la enzima; la enzima los recibe en un orden determinado y cada uno de ellos al unirse a la enzima modifica su estructura. La nueva analoga es la del "guante y la mano"; aquel no representa una estructura de negativo tridimensional mientras no se halla la mano en el, ya que antes pueden tener diversas formas y disposiciones, una vez que ha entrado la mano - que a su vez tambin puede adoptar distintas posiciones se ponen en contacto todas las partes correspondientes, es decir, en el caso de la enzima, las partes reactivas del sistema enzimtico, con las partes reaccionantes, o sea los sustratos. Se ha preservado con esta nueva idea, el aspecto de la armona estructural entre el sustrato y la enzima pero se introduce el nuevo concepto de que es necesario provocar un cambio en la estructura proteica que favorezca la colocacin adecuada de todos los elementos que interviene en la reaccin enzimtica. Los cambios de la estructura proteica se denominan "conformacionales". El cambio en la disposicin tridimensional puede hacerse a distancia y en muchas ocasiones la unin del sustrato a una parte de la enzima modifica otras zonas de ella y an su estructura completa, debido a plegamientos que acercan o alejan diversos grupos colocados a lo largo del pptido que forma la enzima. Esta alteracin mltiple y de tipo flexible, permite entender mejor el proceso de entrada ordenada de los sustratos, y los cofactores y la reaccin en la que se participan. Tambin permiten comprender porque un sustrato entra a una enzima y es atacado y uno que no lo es an muy parecido a l, puede quedar excluido del centro activo.

Coenzima y grupos prostticos Aparte del sustrato, cuya transformacin ser condicionada por la enzima, existe otra parte del sistema enzimtico, de peso molculas bajo y por lo tanto dializable, termoestable y en general, no proteica, adherida de mas o menos laxa a la apoenzima y a la cual se le llama grupo prosttico, si est muy ntimamente ligada a la apoenzima como es el caso del ncleo porfirnico de numerosas oxidasas o la estructura flavnica de la deshidrogenasa succnica o coenzima cuando la unin es dbil y se separan fcilmente. Es muy grande la importancia del grupo prosttico o de la coenzima desde el punto de vista funcional pues suelen ceder y recibir alternadamente parte de los productos de la reaccin. Por ejemplo en las reacciones de oxido reduccin los hidrgenos desprendidos de un sustrato deben ser captados por una sustancia con lo que se expulsa al sustrato oxidado y es posible recibir una nueva molcula del sustrato con hidrgenos. Tal sustancia es una coenzima, como el DPN, el TPN, el FAD, etc., que, a su vez, suele cederlos a una tercera sustancia o, cuando las reacciones son reversibles los pasan al sustrato oxidado para reducirlo. Algunos autores denominan cosustratos a estos agrupamientos coenzimticos para hacer nfasis en su carcter reversible, no cataltico y equimolecular con respecto al sustrato. Una proporcin de las vitaminas forman parte de molculas ms complejas que funcionan como coenzimas en diversas reacciones.

Muchas enzimas requieren una coenzima

Muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos y otras reacciones requieren, adems de su sustrato, una segunda molcula orgnica conocida como coenzima sin la cual son inactivas. Para distinguirlas de iones metlicos activadores y de las enzimas mismas, las coenzimas se definen como compuestos orgnicos termoestable, de peso molecular bajo, requeridas para la actividad de las enzimas. La mayor parte de las coenzimas se unen a las enzimas por fuerza no covalentes. Las que forman enlace covalentes con las enzimas se denominan tambin grupos prostticos. Entre las reacciones que requieren coenzimas estn las oxidorreducciones, las reacciones de transferencia de grupo e isomerizacin y las reacciones que forman enlaces covalentes (claves 1, 2, 5 y 6; IUB). Las reacciones lticas que comprenden reacciones hidrolticas catalizadas por enzimas digestivas no requieren de coenzimas.

Las coenzimas pueden considerarse como segundo sustrato

La coenzima puede considerarse como un segundo sustrato o cosustrato por dos razones. En primer lugar, los cambios qumicos en la coenzima compensan exactamente a los que realizan en el sustrato. Por ejemplo, en las reacciones de oxidorreduccin (deshidrogenasa), una molcula de sustrato es oxidasa y una molcula de coenzima es reducida. Una segunda razn para dar igual nfasis a las reacciones de la coenzima es que, en realidad, este aspecto de la reaccin es el que puede ser de significado fisiolgico fundamental. Por ejemplo, la importancia de la capacidad del msculo que trabaja en condiciones anaerobias para convertir el piruvato en lactato no reside en el piruvato ni en el lactato. La reaccin sirve solamente para oxidar la coenzima reducida NADH a NAD+. Sin NAD+ la gluclisis no puede continuar y la sntesis anaerobias de ATP (y por tanto, el

trabajo) tiene que cesar. En condiciones anaerobias, la reduccin del piruvato en lactato reoxida al NADH y permite la sntesis de ATP. Otras reacciones pueden servir igualmente bien. Por ejemplo, en las bacterias o levaduras que crecen en medio anaerobio, algunos metabolitos derivados del piruvato son utilizados como oxidantes para el NADH y son reducidos en el proceso.

Las coenzimas funcionan como reactivos en la transferencia de grupos

Las reacciones bioqumicas de transferencia de grupo del tipo. DG+A=AG+D En la cual un grupo funcional, G es transferido de una molcula donadora, D-G, a una molcula aceptora, A, por lo general comprende la participacin de una coenzima como ltimo aceptor (por ejemplo, reacciones de dehidrogenacin) o como portador intermediario del grupo (por ejemplo, reacciones de transaminacin). El esquema siguiente muestra el ltimo concepto. D-H CoE A-G D CoE-G A Aunque estos sugiere la formacin de un complejo sencillo CoE-G, durante el curso de la reaccin global, pueden intervenir varios complejos intermediarios CoE-G en una reaccin particular (por ejemplo, transaminacin). Cuando el grupo transferido es el hidrgeno, es costumbre representar slo la "mitad izquierda de la reaccin": D-H CoE D CoE-H Que esto representa en realidad slo un caso especial de la transferencia general de grupos puede apreciarse mejor en trminos de las reacciones que ocurren en las clulas intactas. Se pueden representar de la siguiente manera: D-H CoE A-H D CoE-H A

Las coenzimas pueden clasificarse de acuerdo al grupo cuya transferencia facilitan

Basndose en este concepto podra clasificarse a las coenzimas como sigue: Para la transferencia de grupos distintos del hidrgeno:

Fosfatos de azcares CoASH Pirofosfato de tiamina. Fosfato de piridoxal Coenzimas del folato Biotina Coenzimas de cobamida (B12) cido lipoico Para la transferencia del hidrgeno: NAD+, DADP+

FMN, FAD. cido lipoico Coenzima Q.

-Muchas coenzimas derivan de vitamina B y del monofosfato de adenosina Las vitaminas B forman parte de la estructura de numerosas coenzimas. Las vitaminas B; nicotinamida, tiamina, riboflavina y cido pantotnico son constituyentes esenciales de las coenzimas para las oxidaciones y las reducciones biolgicas y las coenzimas cido flico y cobamida funcionan en el metabolismo de compuestos de un solo carbono. Numerosas coenzimas contienen adenina, ribosa y fosfato y se derivan del monofosfato de adenosina AMP. Los ejemplos incluyen NAD+ y NADP+ Activadores Las enzimas son catalizadores orgnicos que disminuyen la barrera denominada energa de activacin; y por tanto facilitan el que se inicie una reaccin. Este proceso implica el trabajo necesario para poner a dos molculas en un contacto lo suficientemente estrecho como para que reaccionen; adems, el trabajo debe realizarse sobre la unin qumica una con covalencia en sentido estricto para que pueda romperse y formar otros compuestos. Las enzimas, como muchos catalizadores, son partculas de gran superficie y muestran que tienen capacidad para atraer y captar diversas molculas. Cualquier factor que permita por una parte atraer al sustrato a su centro activo se pude considerar como un activador, adems algo que permita la rpida salida de los productos tambin pude considerarse como un activador. As se reconocen diversas posibilidades:

Activacin inica. Numerosos metales mono y bivalentes son necesarios para la actividad enzimtica de diversos sistemas. Destacan entre ellos los siguientes: K+, Mn++, Mg++, Ca++, Fe+++, Cu+, Cu++, etc. A menudo el metal, a estas condiciones, es el centro que permite la unin conjunta del sustrato, de la coenzima y de la misma apoenzima con la que forma quelatos (de chelos, garra; complejos moleculares sostenidos por un metal) al unirse con grupos cargados elctricamente. Muy a menudo se demuestra que es posible sustituir los metales divalentes entre ellos, sin grandes modificaciones de la velocidad de la reaccin.

Los metales como el hierro, el cobre y el molibdeno, actan a menudo como transportadores de electrones y no se les puede considerar activadores en el sentido estricto pues forman parte integral del grupo prosttico. Algunos aniones tambin son necesarios para la actividad de ciertas enzimas; bien conocido es el caso del Cl-, el que puede sustituirse, a un cuando con baja de la velocidad, por Br-, para la amilasa salival; o el propio radical fosfato que se requiere en reacciones de fosforilacin.

Activacin por el grupo prosttico. En determinadas reacciones estos son indispensables para el trabajo de la enzima y constituyen, en rigor, la parte funcional activa del sistema. Activacin de la apoenzima. Consiste en la obtencin de una correcta estructura del centro activo de la protena con actividad enzimtica, ya referido anteriormente. Integridad de los grupos funcionales del centro activo. Destaca la relacionada con los grupos sulfhidrilo, -SH. Cualquier alteracin qumica que los destruya, bloquee u oxide a disulfuro, -S-S-, puede inactivar a las enzimas. Esto puede suceder incluso en las suaves condiciones del trabajo celular por exposicin a agentes oxidantes o al oxigeno mismo, aunque puede lograrse por el efecto de sustancias que

los ataquen y que combinen con ellos como la yodacetamida. En otras ocasiones la destruccin de los grupos SH, aun la distancia del centro activo modifica de tal manera la estructura tridimensional de la enzima que el centro activo se deforma al grado de que no puede llevar a efecto su accin sobre las sustancias reaccionantes. Existen otros grupos funcionales cuyo bloqueo acaba por completo con la actividad enzimtica; en tal caso estara la accin de inhibidores o venenos enzimticos. Medida de la actividad enzimtica. Aparte del problema de medir las pequesimas cantidades de enzimas presentes en los tejidos; muy pocas de ellas poseen caractersticas qumicas o espectroscpicas particulares que permita medirlas directamente. En general, las enzimas se cuentan siguiendo la actividad de la reaccin que catalizan y se aceptan, en principio que dicha actividad es proporcional a la cantidad de enzima presente. Como la actividad de una enzima slo rara vez se puede expresar en relacin a su peso absoluto o a la molaridad de la enzima, lo habitual es expresarla en "unidades" fijadas de modo convencional con relacin a la protena presente en la preparacin.

La actividad enzimtica se mide por la desaparicin del sustrato o la aparicin de alguno de los productos de la reaccin, siguiendo dichos cambios en el tiempo. Sin embargo, las condiciones del sistema no son uniformes a lo largo del tiempo: el grado de saturacin de la enzima con el sustrato cambia constantemente, los productos que aparecen suelen inhibir a la enzima o se presentan modificaciones del pH que afectan a la reaccin, etc. Para evitar estos problemas se hace la medida de la velocidad inicial, tomando en cuenta solo el comienzo, en forma de lnea recta de la grfica, lo que sucede en general cuando se ha consumido no ms de una cuarta parte del sustrato. La actividad puede expresarse, una vez determinada la reaccin, en relacin con el tiempo empleado por la enzima para producir un cambio determinado; mientras mayor sea el tiempo, la actividad de la enzima es menor. Por lo tanto, la recproca del tiempo (la inversa del tiempo o sea el valor que resulta de dividir la unidad sobre el tiempo, 1/T) es una medida de la actividad enzimtica. 13. Las enzimas son catalizadores estereoespecficos Casi todos los sustratos forman por lo menos tres enlaces con las enzimas. Esta adherencia en tres puntos puede conferir asimetra a una molcula por otro lado simtrica. La figura * muestra una molcula de sustrato, representada como un tomo de carbono que tiene tres grupos diferentes, prximos a adherirse en tres puntos a un sitio de la enzima. Si el sitio puede ser alcanzado slo desde un lado y nicamente los tomos complementarios y los sitios pueden interactuar (ambos suposiciones vlidas para las enzimas reales), la molcula se unir slo en una forma. La reaccin misma puede estar confinada a los tomos unidos en los sitios 1 y 2 an, cuando los tomos 1 y3 sean idnticos. Girando mentalmente la molcula de sustrato en el espacio, ntese que puede adherirse en tres puntos a un costado del sitio planar con una sola orientacin. En consecuencia, los tomos 1 y 3 aunque sean idnticos vienen a ser distintos cuando el sustrato est adherido a la enzima. Por tanto, un cambio qumico puede afectar el tomo uno (pero no al tomo tres) o viceversa. Esto puede explicar el porqu la reduccin, catalizada enzimticamente de la molcula del piruvato pticamente inactiva, forma L- y no D, L-lactato. 14. Especificidad enzimtica Los distintos grupos de enzimas muestran variaciones considerables en su grado de especificidad. Algunas de ellas muestran requerimientos estrictos tanto para el sustrato

(o los sustratos si se trata de reacciones bimoleculares) como para el tipo de unin qumica sobre el que van a actuar; pequeos cambios en cualquiera de ellos bastan para inactivar la reaccin; tal es el caso de la mayora de las enzimas. En otras ocasiones, la deshidrogenasa alcohlica, que funciona con DPN como coenzima, es absolutamente especfica para el DPN, pero pude actuar sobre diversos alcoholes aparte del etlico que es su sustrato caracterstico. As mismo, las enterasas, las fosfatasas y ciertas peptidasas a menudo solo son especficas para el tipo de unin atacada ster, peptdica, etc. y no requieren estructuras definidas en el sustrato, a ambos lados de la unin. Hay ejemplo de especificidad doble: la xantina oxidasa, altamente especfica para la xantina a la que convierte en cido rico, y por otro lado muy activa, pero en forma inespecfica, al mostrar gran capacidad para mostrar la activacin de gran variedad de aldehdos. El requisito de estereoespecificidad para los sustratos es muy importante. Las enzimas que habitualmente atacan a los azcares naturales con configuracin D-, no lo hacen sobre sus ismeros artificiales L-; las enzimas tan activas en la naturaleza sobre los aminocidos comunes tipo L- so inactivas para los aminocidos artificiales (o muy raros en los organismos vivos) de tipo D-. Esto es tan absoluto que cuando existen mezclas racmicas de ismeros D- y L-, un mtodo conveniente de separarlas, es el de dejar que acte sobre ellas una enzima que degradar exclusivamente a uno de los dos ismeros dejando al otro intacto. Cuando el sustrato es simtrico y el producto es asimtrico, la enzima provoca, especficamente, la formacin de uno solo de los productos asimtricos, aquel para el que la enzima es activa; tal es el caso de la deshidrogenasa lctica que, al actuar sobre el cido pirvico (simtrico) produce exclusivamente cido D-lctico y no cido L-lctico, y el de la deshidrogenasa glutmica que al atacar el cido alfa-cetoglutrico produce solo cido L-glutmico: CH3 | C=O | COOH cido pirvico CH3 | HCOH | COOH cido D-lctico

Existen otras formas de ismeros geomtricos aparte de los ismeros D-, L-, susceptibles de ser reconocidas por enzimas. Tal es la situacin de los ismeros cis trans en que solo uno de los tipos del par es atacado. La fumarasa introduce una molcula de agua en el cido fumrico trans, pero el ismero cis, o sea el cido maleico, no es atacado. H C COOH H C COOH HOOC C H H C COOH cido fumrico (trans) cido malico (cis) Las enzimas tambin pueden distinguir molculas que desde el punto de vista estructural, como compuestos qumicos, son idnticas. Por ejemplo, la glicerol cinasa, por medio de ATP, convierte al glicerol en L-glicerol 3- fosfato, o sea produce su

fosforilacin, pero exclusivamente en la posicin 3, hecho que se ha demostrado con glicerol marcado con C radiactivo, C14, en las dos posiciones posibles 1 y 3. Los mismo sucede con el cido ctrico que al ser oxidado y descarboxilado hasta producir cido a -cetoglutrico adquiere un grupo C=O, en uno de los lados de la molcula, qumicamente simtrica. Esta capacidad de la enzima para reconocer el sustrato obedece a que debe tener por lo menos tres grupos qumicos orientados en el espacio de tal modo que el sustrato, aunque en apariencia simtrico, solo puede adaptarse por completo a la enzima en una sola posicin. De todo esto se desprende por el sustrato a los sustratos necesitan tener un patrn peculiar de grupos qumicos, especficos para cada enzima particular, de modo que se adapte perfectamente a su centro activo; mientras mayor y ms complejo sea este requerimiento mayor ser la especificidad de la enzima. Isoenzimas Al hacer el estudio electrofortico del suero humano normal y hacer un revelado de la actividad de la deshidrogenasa lctica se encontr distribuida en cinco bandas diferentes; se lleg as al concepto que es posible que en un tipo de tejido existan diversas y mltiples formas moleculares de una enzima, a las que se denominan isoenzimas. Son por lo tanto protenas con actividad cataltica que favorece la misma reaccin pero que pueden distinguirse por alguna caracterstica fsica, estructural, inmunolgica, etc. En el ejemplo anterior sus diferencias se registraron en la velocidad de migracin electrofortica. En otras ocasiones la diferencia reside en las propiedades cinticas; por ejemplo, existen dos deshidrogenasas mlicas que catalizan la misma reaccin; sin embargo, actan de modo distinto cuando se les pone en contacto con los anlogos artificiales del DPN y, adems, una es de origen mitocondrial, la otra se encuentra en el sobrenadante celular. Sin embargo, este concepto tiene sus limitaciones; el caso de la deshidrogenasa lctica es muy ilustrativo. Esta enzima se diferencia en 5 isoenzimas denominadas I, II, III, IV y V que parecen ser caractersticas de distintos tejidos; en el corazn dominan el I y la II, el hgado tiene un predominio de la V, etc. al tratar la enzima que pesa 135 000 con urea o guanidina, su molcula se fragmenta en cuatro porciones, cada una de las cuales tiene un peso molecular de unos 35 000. Las cinco isoenzimas comunes de la hidrogenasa lctica parecen ser mezclas de dos tipos bsicos A y B, o H (de "heart", corazn) y de m (msculo) de la siguiente manera: HHHH Tipo I, miocrdico, H HHHM Tipo II HHMM Tipo III HMMM Tipo IV MMMM Tipo V, muscular, M Se ha confirmado inmunolgicamente su presencia; los anticuerpos preparados contra ambas molculas originales H o M no muestran reaccin cruzada entre si, pero si reaccionan con los hbridos formados de H y de M. Del mismo modo, muestran diferencias considerables en su composicin de aminocidos. No solo las caractersticas fisicoqumicas son diferentes; quiz aun ms importante sea el aspecto funcional. La actividad de las deshidrogenasas lcticas ante sus sustratos normales, lactato, piruvato, y ante los anlogos del DPN indican el papel de la enzima

en la regulacin de las relaciones DPN/DPNH2, que a su vez, regulan funciones celulares importantes. Es muy notable la diferencia en la inhibicin producida por un exceso de piruvato sugerente de que, en rigor, la enzima tipo M o V funciona ms bien como una reductasa del piruvato. Esta forma (M o V) es muy til en los msculos voluntarios que presentan demandas bruscas de energa proporcionadas por la gluclisis, o en tejidos con poco oxgeno (anaerobiosis). Por el contrario la tipo H (I) funcionan preferentemente en msculos que deben realizar un ejercicio sostenido y en los que las necesidades energticas se satisfacen por medio de un metabolismo aerbico intenso; este tipo, por lo tanto, est capacitado, funcionalmente, para lograr una mayor oxidacin del lactato a cido pirvico. La distribucin de la enzima con respecto a la aerobiosis (o anaerobiosis) del tejido se ha comprobado en varios casos: la de tipo H (I) es ms abundante en la corteza renal (cerca de 100%) que en la mdula (50%) en las papilas (10%), en razn directa con el grado de aerobiosis de esas zonas renales. Lo mismo sucede con msculos de un mismo animal; si tienen que trabajar constantemente muestran grandes proporciones de la forma H (I), como el dorsal ancho de las gallinas que casi en el 100% muestran dicha forma; el pectoral, en cambio tiene menos del uno por ciento de ella, en cambio, en los pectorales de las aves migratorias que deben sostener por horas y aun das, esfuerzos extraordinarios, aparece nuevamente la forma H (I) de preferencia a la M (V). Es obvio que cuando son muy marcadas las diferencias de pesos moleculares, composicin de aminocidos, caractersticas cinticas y otras propiedades fsicas, es difcil hablar de isoenzimas; ms conveniente es considerarlas entonces como enzimas distintas que simplemente catalizan la misma reaccin reservando el trmino de isoenzima para aquellas situaciones como la de la deshidrogenasa lctica que representan agregados hbridos de composicin relativamente parecida. Cintica de las reacciones enzimticas Aunque las leyes generales de la catlisis debieran ser vlidas para las enzimas, el hecho de que stas sean sustancias complejas, de alto peso molecular, de tamao coloidal y de composicin difcil de precisar, impide la aplicacin de dichas leyes de una manera estricta; por ejemplo, su tamao coloidal puede causar fenmenos de adsorcin o diversas reacciones debidas a sus numerosas cargas elctricas. No obstante, los factores que afectan la velocidad de la reaccin enzimtica son los ya sealados a propsito de las reacciones qumicas en general, como la temperatura y las concentraciones de las sustancias reaccionantes que, en este caso particular, son la enzima el sustrato. Adems intervienen el PH medio donde se realiza la reaccin, la presencia de los productos de la reaccin, y otros factores secundarios como las radiaciones y los efectos xido reductores. 18. Relaciones entre la enzima y el sustrato. Es universalmente aceptado, que la enzima, como todo catalizador, participa de una manera activa en la reaccin. Existen pruebas experimentales de esta situacin cuando menos para algunos. Un ejemplo bien conocido es el de la peroxidasa que, en presencia de perxido de hidrgeno, H2O2, y un aceptor de hidrgeno adecuado, produce la reduccin del H2O2. La peroxidasa en ausencia de H2O2 muestras unas bandas de absorcin caractersticas en el espectro visible; cuando se combina con el H2O2, pero sin que exista el aceptor de los hidrgenos, aparece una nueva distribucin de las bandas. Si se permite el paso de los

hidrgenos a un aceptor, automticamente desaparecen las bandas nuevas y reaparecen las originales de peroxidasa. Se acepta corrientemente una hiptesis propuesta por Michaelis para explicar la actividad enzimtica, sobre la base de la informacin de un compuesto de la enzima con el sustrato (complejo enzima sustrato), previamente al ataque del sustrato por la enzima y a la liberacin de los productos de la reaccin. El desarrollo matemtico que permiti a Michaelis formular su hiptesis, estuvo acorde con los datos experimentales obtenidos una vez vencidos los enormes obstculos de orden tcnico para llevar a cabo la confirmacin de la teora en el laboratorio. Si se hace el estudio de la actividad de una enzima en relacin con la concentracin de sustrato. En ella se registran, en las abscisas, la cantidad creciente de sustrato y, en las ordenadas, la cantidad de uno de los productos de la reaccin liberada de un tiempo dado, que expresa, en rigor, la actividad de la enzima. La curva obtenida es la de una hiprbola rectangular, la cual tiene algunas propiedades interesantes; por ejemplo, la velocidad lmite o velocidad mxima, es el valor que trata de alcanzar la curva a medida que se aumenta el sustrato y que, en la figura, est sealada con la lnea V. Existe un punto, fijado arbitrariamente, en el que la mitad de la velocidad lmite corresponde a una concentracin especfica del sustrato; esta concentracin de sustrato se representa habitualmente como KM, y se denomina constante de Michaelis, valor caracterstico para un par enzima sustrato y que, por lo tanto, es la concentracin de sustrato con la cual se alcanza la mitad de la velocidad lmite o velocidad mxima de la reaccin. Los resultados obtenidos experimentalmente concuerdan con los derivados de modo matemtico, sobre la hiptesis de formacin de un complejo enzima sustrato. La constante de Michaelis, KM, indica en trminos generales, las relaciones de afinidad entre el sustrato y la enzima; un KM, implica la necesidad de una alta concentracin de sustrato que, al combinarse con una enzima, produzca la mitad de la velocidad mxima, o sea, que la afinidad por la enzima y sustrato es pobre; por el contrario, si la concentracin de sustrato que se requiere para alcanzar la mitad de la velocidad es muy pequea (KM pequea), quiere decir que el sustrato tiene una gran afinidad por la enzima. En ocasiones, la misma enzima puede ser ms afn a un sustrato que a otro; por ejemplo, la sacarasa es 16 veces ms activa para atacar a la sacarosa que a la rafinosa. Se conocen con exactitud los valores de KM para muchos sustratos y enzimas, con los siguientes: la pepsina, actuando sobre albmina, de huevo: KM de 4.5 por ciento; la tripsina sobre la casena :KM de 2 por ciento; la amilasa sobre el almidn en presencia de Cl : KM de 0.4 por ciento ; la sacarasa de levadura, sobre la sacarosa : KM 0.016 a 0.04 M, etc. La explicacin de la curva hiperblica que implica la formacin del complejo enzima sustrato parece depender de la existencia fsica, en la enzima, de determinados sitios donde se absorbe el sustrato para ser activado. Al principio de la curva se puede aumentar la concentracin del sustrato y la enzima es capaz de activarlo con toda eficiencia; pero como una vez activado el sustrato se separa en forma de los productos, y la velocidad con la que stos se separan no es igual a la velocidad con la que captado el sustrato, y en vista de la cantidad creciente del sustrato, la lnea obtenida no es una recta, sino la curva sealada. Cuando la cantidad de sustrato ha sobrepasado la capacidad fsica de la enzima para recibirlo y poder transformarlo, la curva alcanza una meseta, lo que significa que la reaccin prosigue a la misma velocidad, independientemente de la cantidad de sustrato adicionada. De acuerdo con los trminos ligados a la velocidad de reaccin se encuentra que, al principio del experimento, la

reaccin depende exclusivamente de la concentracin del sustrato y se trata de una reaccin de primer orden; al final de ella, cuando hay un exceso de sustrato, la reaccin es independiente de la cantidad de sustrato y, por lo tanto, es de orden cero. Otra caracterstica en relacin con la finalidad de la enzima por el sustrato es la comprendida en el llamado nmero de recambio, el cual representa los moles de sustrato atacados por un mol de enzima en una unidad de tiempo determinada, generalmente un minuto. Este nmero de recambio, en algunas ocasiones, es muy elevado, como sucede con la catalasa que a 0 C., tiene un nmero de recambio de 2.5 millones; es decir, un mol de enzima es capaz, en un minuto, de desdoblar dos y medio millones de moles de H2O2; el citrocomo c, a 38 C, tiene un nmero de recambio de 1.4 X 103; la carboxilasa a 30 C., da un nmero de recambio de 1 X 103, etc. Mecanismo Ping Pong En la transaminacin, la reaccin avanza a travs de los fenmenos alternos de adicin de sustrato y liberacin de producto. Iones sustrato Estos facilitan la fijacin del sustrato y la catlisis por creacin de varias de complejo de puente constituidos por un enzima, metal y sustrato en la que os iones metlicos pueden actuar como catalizadores cidos generales o facilitar la aproximacin de los reactantes. Accin de inhibidores. Si a un sistema enzimtico se aaden sustancias que impidan la realizacin de la actividad propia de la enzima, se dice que el sistema ha sido inhibido, y la sustancia usada con estos fines se denomina inhibidor. Muchos inhibidores son agentes que desnaturalizan a las enzimas, ya que stas son molculas protenicas, susceptibles a una diversidad de agentes, especialmente qumicos, como aniones complejos o metales pesados, Zn++, Pb++, Ag++, etc. A menudo estos agentes que impiden la actividad enzimtica actan sobre casi todas las enzimas, lo que demuestra que su accin no es especfica, sino que afectan a tosa molcula protenica. Tal es el caso de los inhibidores de sufhidrilos, -SH, los cuales forman parte de una gran variedad de enzimas. Otras sustancias bloquean especficamente determinadas reacciones enzimticas y su especificidad es tal, que slo cierto sustrato y cierta enzima son los susceptibles. De acuerdo con esto, es posible clasificar los fenmenos de inhibicin enzimtica en diversos grupos: inhibicin por competencia e inhibicin por no competencia y sta, a su vez, en la debida a agentes desnaturalizantes y a agentes inespecficos. Inhibicin por competencia En este caso el inhibidor no permite la formacin del complejo enzima sustrato normal, ya que se forma un complejo enzima inhibidor; una vez que el inhibidor ocupa el lugar activo de la enzima, el complejo enzima inhibidor, no se separa, en vista de que la enzima no tiene accin sobre el inhibidor y, por lo tanto, queda bloqueada la parte activa de la enzima. El sustrato no puede entrar al lugar activo, que est ocupado por el inhibidor y, de esta manera, se impide la accin enzimtica. El ejemplo clsico de inhibicin competitiva es el de la enzima deshidrogenasa succnica que, en presencia de cido succnico en cido fumrico, reduciendo, simultneamente, al aceptor de H. Diversas sustancias parecidas al cido succnico,

como el cido malnico, el oxlico y el glutrico, se pueden combinar con la enzima e impiden su accin sobre el cido succnico. Al aadir el inhibidor, la actividad enzimtica disminuye sin embargo, si se aaden cantidades mayores del sustrato natural de la enzima (en el ejemplo anterior, de cido succnico) nuevamente empieza a aparecer actividad enzimtica, y cuando las cantidades de cido succnico aadido sobrepasan considerablemente a las presentes del inhibidor, la actividad enzimtica se restablece por completo. Esta situacin representa, aparentemente, un fenmeno de competencia entre el sustrato natural y el inhibidor para ocupar el sitio activo de la enzima; la cantidad presente de una sustancia o de otra , en un momento dado, en el sitio de la reaccin , determina si se dirige en un sentido o de otro; si hay ms inhibidor, la enzima queda bloqueada por ste, y no se lleva a cabo la reaccin enzimtica ; si an en presencia de importantes cantidades de inhibidor existen mayores cantidades del sustrato natural, ste domina al inhibidor y llega a desplazarlo introducindose en los sitios activos de la enzima para permitir que se reanude la actividad cataltica. Inhibicin por no competencia Cuando las sustancias inhibidoras actan independientemente de la calidad del sustrato natural presente, se trata de inhibicin por no competencia. En este caso, el inhibidor bloquea loas sitios activos de la enzima de modo irreversible; en ocasiones se trata de la desnaturalizacin de la enzima, como cuando se aaden aniones o cationes que precipitan las protenas. En otros casos la combinacin irreversible se hace con sustancias que actan de manera especfica sobre ciertos grupos activos de la enzima, o sobre la conformacin o estructura completa de ella ; sin embargo, en estas circunstancias, se ven afectadas por igual todos o cuando menos varios tipos de enzimas. Existen algunos inhibidores no competitivos que muestran cierta especificidad, como los agentes bloqueadores del radical sulfhidrilo, -SH, presente en las cadenas laterales del aminocido cistena, comn a todas las molculas protenicas y, por lo tanto, a las enzimas. Entre los inhibidores de sufhidrilos ms conocidos se encuentran el ferricianuro, el yodacetato, el famoso gas usado con fines blicos, la lewisita, y otras sustancias de tipo arsenical que deben sus efectos letales a su combinacin con los grupos sulfhidrilo de protenas y enzimas de gran importancia fisiolgica. Hay enzimas que contienen iones metlicos indispensables para su actividad y que son susceptibles a la accin inespecfica de agentes que afectan dichos iones; tal es el caso de las enzimas con hierro que son intoxicadas por medio del cianuro o el H2S. De la misma manera, la adicin de oxalato a un sistema puede precipitar el calcio o el magnesio, e impedir la actividad de enzimas que los requieren. Antagonismo metablico (antimetabolitos) Las enzimas pueden ser inhibidas por diversos compuestos, especialmente los que presentan una estructura parecida al sustrato natural, como expres en el caso del cido malnico y el cido succnico con respecto a la deshidrogenasa succnica. Esta inhibicin se denomina metabolitos las sustancias presentes o producidas en el curso del metabolismo celular, y antimetabolitos las sustancias parecidas a aqullos, y que impiden su aprovechamiento y utilizacin; en general, se trata de sustancias que compiten, a nivel enzimtico, en vista de su parecido estructural, con los metabolitos naturales.

Numerosos hongos, actinomicetos, bacterias, etc., producen sustancias que muestran actividad contra otros microorganismos. Estas sustancias se han denominado antibiticos y, en principio, se deben considerar como antimetabolitos que impiden, por razones de competencia, el crecimiento de determinadas formas microbianas. En medicina ha resultado del mayor inters el aislamiento y la actividad de los antibiticos, ya que en ciertas condiciones se usan para reprimir el desarrollo de grmenes patgenos para los seres humanos. El estudio de los antimetabolitos probablemente se inici al observar que numerosas bacterias podan crecer en un medio que tuviera sulfanilamida, que normalmente es un inhibidor de su crecimiento, siempre que se aadieran grandes cantidades de cido paminobenzoico, una vitamina necesaria para la nutricin celular. En vista del parecido estructural entre las dos molculas, la sulfanilamida y el cido p-aminobenzoico, se acept que los fenmenos de inhibicin tenan una base estructural. Entre los antibiticos, existen algunos de gran utilidad teraputica, como la penicilina, aislada de diversos hongos Penicillium ; la estreptomicina, proveniente de cultivos de Streptomyces griseus, y las tetracilinas, sustancias que tienen amplio campo de accin de diversas infecciones producidas por bacterias gram positivas o gram negativas. Qumicamente, son sustancias complejas formadas por distintos grupos: por ejemplo, la estreptomicina contiene glucosamina, estreptosa y estreptidina. Algunos antibiticos son pptidos, de tipo bsico, aislados de bacterias, tales como la gramicidina y las tirocidinas. Un ejemplo peculiar de antibitico producido por el hongo Penicillium notatum es la notatina, idntica a la enzima glucosa oxidasa que ataca a la glucosa permitiendo su conversin a gluconolactona y cido glucnico; es posible que de esta manera ejerza su accin de antibitico. Muchos antimetabolitos suelen intervenir de modo especfico a nivel de las coenzimas o de los grupos prostticos, cuando stos son del tipo de las vitaminas. Se trata, por lo tanto, en estos casos, de antivitaminas, muy comunes en las del grupo B. As, la tiamina modificada en su estructura qumica para formar piritiamina o oxitiamina, no participa en los procesos de descarboxilacin. El cido piridn 3 sulfnico impide la accin de la vitamina natural parecida a l, o cido nicotnico y perturba numerosas reacciones de deshidrogenacin. La piridoxina es antiorganizada por la desoxipiridoxina y la biotina, de la misma manera, por la destiobiotina. Se han preparado numerosas sustancias parecidas a las bases pricas y pirimidnicas con la finalidad de bloquear los sistemas de formacin de protena, que dependen de la presencia de cidos nucleicos que contienen dichas bases, en el interior de las clulas; estos trabajos se han planeado para deprimir la velocidad de desarrollo de clulas cancerosas. Entre las sustancias obtenidas en fechas recientes se puede sealar el grupo del 5 fluorouracilo, que produce inhibicin tumoral por el siguiente mecanismo, que puede ser comn a un gran nmero de sustancias con estas propiedades : en el tumor falta la enzima que destruye el antimetabolito, en este caso el 5 fluorouracilo, el cual se vuelve muy agresivo hacia el tumor ya que no es degradado por l; en cambio, dicha sustancia es menos txica para el tejido normal que s est en posibilidad de destruirlo. Inhibicin alostrica De gran importancia en el fenmeno de la actividad enzimtica es el hecho de que, en las protenas, pueden existir dos (o cuando menos dos) sitios diferentes desde el punto de vista estereo- especfico y que, adems, estn en lugares distintos. Un de estos sitios

es el centro activo, donde el sustrato es atacado para dar origen a los productos de la reaccin y por lo tanto donde reside el aspecto funcional de la protena. El otro sitio denomina sitio alostrico y en l puede acomodarse de manera complementaria - pero reversible - alguna sustancia llamada efector alostrico ; al efectuarse esta unin se produce una alteracin discreta de la estructura de la protena, la transicin alostrica, que modifica la actividad biolgica de la protena, porque altera la distancia, las propiedades del sitio activo. Es muy importante que el efector alostrico normal no tiene relacin qumica o metablica alguna con el sustrato de dicha enzima y que su accin tan especfica se debe a que altera de tal modo la conformacin de la protena que modifica su centro activo. El efecto alostrico se ha estudiado de manera especial en bacterias, pero ocurre tambin en animales superiores. En un principio se reconoci como un efecto inhibidor que, por su caractersticas, fue denominado "por retro- alimentacin" o "por producto final. En rigor, en las bacterias, es la regla que el metabolito formado al final de un camino metablico, resulte un poderoso inhibidor de su propia sntesis. Parte de la explicacin de este efecto se debe a que dicho metabolito inhibe especficamente a una sola enzima localizada en el camino metablico que forma a dicha sustancia, y de manera curiosa, la enzima sensible al metabolito final es la primera de este camino metablico. En un ejemplo de camino A B C D E, siendo E el metabolismo final, ste inhibira a la primera enzima la que forma B a partir de A. En este captulo en que se estudia la regulacin metablica se analizan con detalle algunos de estos ejemplos y las reacciones qumicas individuales afectadas. La inhibicin alostrica demuestra la alta especializacin de las enzimas que reconocen tanto al sustrato como al inhibidor, siendo muy especficas para ambos. Como qumicamente el sustrato y el efector alostrico son muy distintos, se acepta que la unin con la enzima debe efectuarse en sitios diferentes, lo que ha demostrado con mutantes bacterianas no sensibles al efector alostrico. Adems, no hay interaccin directa entre el sustrato y el inhibidor puesto que los sitios receptores estn muy separados. Las protenas alostricas pueden corresponder a polmeros, es decir, a molculas compuestas de sub- unidades idnticas, con ejes de simetra definidos. El hecho de que se agreguen las subunidades, por una parte, y el que al estar en forma polimrica adopten diversas situaciones conformaciones, hace susceptibles a la enzima a los inhibidores, o por el contrario, a recibir al sustrato y llevar a efecto su accin caracterstica. Ms an, para el caso de la transcarbamilasa asprtica se ha demostrado que una subunidad se combina con el sustrato y otra, distinta, con el inhibidor. Estos fenmenos adquieren una importancia de tipo general, al demostrar que es factible modificar la accin de las enzimas por cambios en la estructura cuaternaria de las protenas, basados en la asociacin y disociacin de subunidades. Algunos ejemplos particulares son los siguientes: la deshidrogenasa glutmica, con peso molecular de cerca de 1 milln puede partirse en subunidades de 250 000 por diversos agentes: ADP, estrgenos tiroxina y ciertos aminocidos. Otro ejemplo es la carboxilasa de la acetil coenzima. A, que es activada por la adicin de citrato, el cual cambia el coeficiente de sedimentacin de la enzima de 18 S a 43 S, o sea la molcula pasa a forma de polmero activo a partir de monmeros inactivos. Un caso ya clsico es el de la fosforilasa inactiva que se convierte en activa cuando se fosforila; la estructura inactiva est formada por 2 unidades y la activa por 4.

Enzimas: regulacin de actividades La regulacin del metabolismo logra la homeostasia La regulacin de la actividad enzimtica contribuye en gran parte a preservar la homeostasia que, mantiene un entorno intracelular e intraorgnico relativamente constante en presencia de fluctuaciones amplias en al medio ambiente externo, como cambios de temperatura, presencia o ausencia de agua o tipos especficos de alimentos. Como conservar la homeostasia Las concentraciones locales de sustrato, comparticin de enzimas y secrecin como proenzimas o zimgenos (como por ejemplo la quimiotripsina) sin actividad cataltica contribuyen a la regulacin de los procesos metablicos. Adems, las alteraciones rpidas y mnimas en la actividad cataltica de enzimas reguladas clave tienen funciones importantes en la canalizacin selectiva de metabolitos hacia uno u otro proceso metablico. Las enzimas reguladoras Tienden a ser aquellas que catalizan una reaccin temprana nica ( con frecuencia la primera ) de una secuencia determinada de reacciones metablicas . La actividad cataltica de las enzimas reguladas puede modularse por ejemplo, cambios repetidos entre estados bajo y alto de actividad cataltica; cuando no hay sntesis protenica nueva ni degradacin protenica. La modulacin se logra cuando metabolitos especficos se unen en forma covalente y no covalente, a la enzima regulada en general a sitios ( alostricos ) bastantes separados del sitio cataltico . Tres mecanismos generales regulan la actividad enzimtica Por ejemplo el flujo neto de carbono en una reaccin catalizada en una reaccin enzimtica podra ser influido 1. 2. Cambiando la cantidad absoluta de enzima presente. Alterando el tamao del conjunto de sustancias reaccionantes distintas de la enzima. 3. Alterando la eficacia cataltica de la enzima (estas tres opciones son utilizadas e casi todas las formas de vida). La modulacin de actividad enzimtica por cambios en la conformacin del sitio cataltico puede incluir la alteracin de Km para un sustrato de Vmax para la reaccin global o para efectos sobre los dos, Km y Vmax. A menudo las curvas de saturacin de sustrato para la inhibicin alostrica son sigmoideas, por ende la ecuacin de Michaelis Menten no se aplica.