UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
PRÁCTICA DE LABORATORIO N°12:
DEMOSTRACIÓN DEL PROCESO DE UREOGÉNESIS: ACCIÓN DE LA
ARGINASA
AUTOR:
DE LA CRUZ BARBOZA MATÍAS MANUEL
EXPERIENCIA CURRICULAR
BIOQUÍMICA AMBIENTAL
CICLO-SECCIÓN:
V-B
DOCENTE COORDINADOR:
CINTHYA LISSETT ASPAJO VILLALAZ
DOCENTE DE PRÁCTICA:
ESPINOZA RAMIREZ JESSICA
TRUJILLO – PERÚ
2024
INTRODUCCIÓN
Los aminoácidos son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino (NH2) en uno
de los extremos y un grupo ácido carboxílico (COOH) en el otro. Estos compuestos son
las unidades fundamentales de las proteínas. Además de formar proteínas, los
aminoácidos y sus derivados participan en diversas funciones celulares, incluyendo la
transmisión nerviosa y la biosíntesis de porfirinas, purinas, pirimidinas y urea. En la
naturaleza, los aminoácidos tienen la configuración estereoquímica L, mientras que los
sintéticos suelen ser una mezcla racémica de isómeros L y D. (Gutiérrez, 2006).
La ureogénesis es el proceso mediante el cual el hígado convierte el amoníaco, un
producto tóxico del metabolismo de las proteínas, en urea, que es menos tóxica y se
excreta por la orina. Este ciclo es esencial para la detoxificación del amoníaco en el
organismo (Roig, 1949). La arginasa es una enzima clave en este ciclo, ya que cataliza la
hidrólisis de la arginina para formar urea y ornitina. La arginina, siendo un aminoácido,
sigue la misma estructura general descrita anteriormente, y su metabolismo es crucial para
la eliminación de compuestos nitrogenados tóxicos del cuerpo (Caldwell, 2018).
La arginasa desempeña un papel vital en la ureogénesis. Su función es convertir la
arginina en urea y ornitina, completando así el ciclo de la urea. Este proceso no solo es
fundamental para la eliminación del exceso de nitrógeno del organismo, sino que también
tiene implicaciones en diversas funciones fisiológicas, incluyendo la regulación de la
presión sanguínea y el sistema inmunológico.
En este caso, el reactivo de Nessler se utiliza para la determinación de amoníaco (NH₃)
en los tubos de ensayo. La urea, cuando se descompone en presencia de ureasa, se
convierte en amoníaco y dióxido de carbono. El reactivo de Nessler reacciona
específicamente con el amoníaco para formar un compuesto coloreado, que facilita la
detección y cuantificación del amoníaco presente en la muestra (Cossoli, 2022).
OBJETIVO:
El objetivo de la presente experiencia es demostrar la acción de la arginasa sobre la
arginina para la síntesis de urea.
MATERIALES
1.1. Material biológico:
- Homogenizado hepático de rata 20% en sacarosa 0.25M.
1.2. Reactivos:
- Buffer fosfato 0.05M,pH 7.2
- Solución de arginina 0.3M
- Ureasa en polvo
- Ácido sulfúrico ⅔ N
- Tungstato de Sodio al 10%
- Reactivo de Nessler
1.3. Material y equipo de laboratorio:
- Gradilla para tubos de 16 x 125 mm y 20 x 150 mm
- Incubadora a 37ºC
- Pipetas de 1 mL, 1,5 mL, 2 mL, 5 mL y 10 mL
- Gotero o pipeta de plástico descartable
- Pizeta con agua destilada
- Embudo de vidrio
- Papel filtro
PROCEDIMIENTO
A. Sistema de incubación
Se toma un hígado de rata y se pesa para determinar la cantidad exacta de material. Luego,
se prepara una solución de sacarosa al 0.25M, que sirve como solución isoosmótica. El
hígado pesado se mezcla con esta solución y se introduce en un homogenizador de tejidos
para romper las células y obtener una solución homogénea al 20% m/v. Se toman 10 mL
de esta solución homogénea y se incuban a 60°C durante 15 minutos. La arginasa, que es
estable a esta temperatura, permanece en el sobrenadante, mientras que otras enzimas se
precipitan. Finalmente, se separa el sobrenadante, que contiene la arginasa, del
precipitado, que contiene otras enzimas.
Tabla 1. Sistema de incubación: Producción de urea utilizando arginina.
Componentes (mL) TUBO 1 TUBO II
Buffer fosfato 0.5 M pH 7.2 1.0 1.0
Solución Arginina 0.3 M 0.5
Agua destilada ------- 0.5
Pre – incubar a 37°C por 5 min
Homogeneizado hepático 0.5 0.5
Ureasa en polvo Pizca Pizca
Incubar a 37°C por 30 min
H2SO4 2/3 N 1.0 1.0
Tungstato de Sodio 10% 1.0 1.0
Agua destilada 6.0 6.0
La reacción que ocurre en la primera etapa se puede representar por el siguiente esquema,
vemos como interviene el agua junto a la arginasa para convertir la arginina y ornitina
más urea.
Figura 1. Reacción de la arginina y arginasa
Fuente: Aspajo Villalaz, 2024
B. Determinación de la urea (amoniaco) mediante el reactivo de Nessler
El primer paso es etiquetar todos los tubos de ensayo que se van a utilizar. Luego, se
procede a crear el sistema de incubación agregando 1 ml de filtrado 1 al tubo 2 y,
seguidamente, 0.1 ml de filtrado 2 al tubo 3. Al trabajar con agua destilada, se añaden 9
ml al tubo 1 y 8.9 ml a los tubos restantes. Finalmente, para determinar la cantidad de
urea en los tubos, se añade 1 ml del reactivo de Nessler a cada uno.
Tabla 2. Determinación de la úrea (amoniaco) mediante el reactivo de Nessler.
Componentes (mL) TUBO B TUBO I TUBO II
Filtrado I ------ 0.1 -------
Filtrado II ------ ----- 0.1
Agua destilada 9.0 8.9 8.9
Reactivo de Nessler 1.0 1.0 1.0
La reacción que ocurre en esta etapa, representada esquemáticamente, muestra cómo la
ureasa cataliza la conversión de urea en dióxido de carbono y amoníaco. Sin embargo,
debido a la inestabilidad del amoníaco, se considera que se forman iones amonio, los
cuales se detectan utilizando el reactivo de Nessler.
Figura 2. Reacción de la urea y ureasa.
Fuente: Aspajo Villalaz, 2024
RESULTADOS
Después de seguir el procedimiento descrito en la práctica, se obtuvieron los siguientes
resultados, desde un ámbito general se puede observar que la coloración de los tubos es
la correcta.
Tabla 3. Coloración de los tubos de ensayo B, I y II.
Componentes TUBO B TUBO I TUBO II
Coloración Incoloro Amarillo Incoloro
Composición: Contiene agua destilada y reactivo de Nessler.
TUBO B (Incoloro): Este tubo se utiliza como control negativo. No se añadió ninguna
fuente de amoníaco (urea), por lo que no se esperaba ninguna reacción. La ausencia de
coloración confirma que no hay amoníaco presente en este tubo.
Composición: Contiene 0.1 ml de filtrado I, agua destilada, y reactivo de Nessler.
TUBO I (Amarillo): La coloración amarilla indica la presencia de amoníaco. Esto sugiere
que el filtrado I contenía urea, que fue descompuesta por la ureasa en amoníaco. El
reactivo de Nessler reaccionó con el amoníaco, produciendo un color amarillo.
Composición: Contiene 0.1 ml de filtrado II, agua destilada, y reactivo de Nessler.
TUBO II (Incoloro): La ausencia de coloración indica que no hay amoníaco presente en
el tubo. El filtrado II no contenía urea. La urea en el filtrado II no fue descompuesta por
la ureasa, posiblemente debido a una inactivación de la enzima o a una concentración
insuficiente de urea.
DISCUSIÓN
La determinación de urea y amoníaco mediante el procedimiento descrito, utilizando el
reactivo de Nessler, tiene varias aplicaciones importantes en la ingeniería ambiental. Estas
aplicaciones incluyen el monitoreo y control de la contaminación, el tratamiento de aguas
residuales, y la evaluación del impacto ambiental de ciertas actividades industriales y
agrícolas.
Los estudios sobre ciclos biogeoquímicos y la dinámica de nutrientes en diferentes
ecosistemas a menudo requieren la medición de compuestos nitrogenados. Estos estudios
contribuyen al entendimiento de procesos ecológicos fundamentales y a la gestión
sostenible de recursos naturales (Garzón, 2013). Así mismo, la implementación de
proyectos industriales y agrícolas requiere estudios de impacto ambiental para asegurar
que no afecten negativamente los recursos hídricos.
La obtención de urea a partir de los efluentes provenientes de los procesos de cianuración
de minerales auroargentíferos en el departamento de Antioquia se relaciona directamente
con varias de las aplicaciones mencionadas anteriormente en la ingeniería ambiental
(López Ramirez, 2015). Los procesos de cianuración utilizados en la extracción de oro y
plata generan efluentes que contienen cianuro, un compuesto altamente tóxico. El
tratamiento de estos efluentes es crucial para neutralizar el cianuro y convertirlo en
compuestos menos tóxicos. La urea puede ser utilizada en este contexto para tratar cianuro
en las aguas residuales, formando cianato y posteriormente amoníaco y dióxido de
carbono
La arginasa es una enzima clave en el ciclo de la urea, catalizando la hidrólisis de la
arginina para formar urea y ornitina. La arginina, un aminoácido con la estructura general
descrita anteriormente, es esencial en el metabolismo del nitrógeno. La actividad de la
arginasa no solo facilita la eliminación de exceso de nitrógeno, sino que también tiene
implicaciones en la regulación de la presión sanguínea y el sistema inmunológico
(Caldwell, 2018). La importancia de la arginasa se extiende más allá de la ureogénesis,
afectando diversas funciones fisiológicas.
En la práctica realizada, se observó una coloración amarilla en el tubo I, indicando la
presencia de amoníaco y, por lo tanto, la actividad de la ureasa sobre la urea. La ausencia
de coloración en los tubos B y II sugiere que no había amoníaco presente en estas
muestras. El tubo B sirvió como control negativo, confirmando que no había ninguna
fuente de amoníaco presente. La falta de coloración en el tubo II puede deberse a la
inactivación de la ureasa o a una concentración insuficiente de urea. Estos resultados
corroboran la efectividad del reactivo de Nessler para detectar amoníaco y demuestran la
actividad de la arginasa en la síntesis de urea.
CONCLUSIÓNES
El experimento confirma la acción de la arginasa sobre la arginina para la síntesis de urea,
un proceso vital para la detoxificación del amoníaco en el organismo. La utilización del
reactivo de Nessler permitió una detección precisa del amoníaco, validando la
metodología empleada. Estos hallazgos subrayan la importancia de la ureogénesis y el
papel crucial de la arginasa en el metabolismo del nitrógeno, con implicaciones
significativas en la fisiología y la salud humana.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Aspajo Villalaz, C. L. (2024). P11. - DEMOSTRACIÓN DEL PROCESO DE
UREOGÉNESIS: ACCIÓN DE LAARGINASA.
http://file:///C:/Users/manue/Downloads/lab-11-bioquimica-ambiental.pdf
Caldwell, R. W., Rodriguez, P. C., Toque, H. A., Narayanan, S. P., & Caldwell,
R. B. (2018). Arginase: a multifaceted enzyme important in health and
disease. Physiological reviews, 98(2), 641-665.
Cossoli, M. R., Recalde, J. M., Romero, A. M. E., Correa, A., González, D.,
Ferreira, M., & Iglesias, M. C. (2022). Determinación de nitrógeno en forma de amonio
a partir de la actividad microbiana.
Garzón, J. E., & Cárdenas, E. A. (2013). Emisiones antropogénicas de amoniaco,
nitratos y óxido nitroso: compuestos nitrogenados que afectan el medio ambiente en el
sector agropecuario colombiano. Revista de la Facultad de Medicina Veterinaria y de
Zootecnia, 60(2), 121-138.
Gutiérrez Olvera, C. (2006). AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS.
https://fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_5.pdf
López Ramírez, C. D. (2015). Obtención de urea a partir de los efluentes
provenientes de los procesos de cianuración de minerales auroargentiferos en el
departamento de Antioquia (Doctoral dissertation).
Roig, J. S. (1949). FACULTAD DE MEDICINA DE BARCELONA.-CLÍNICA
B: La exploración funcional del hígado. In Anales de medicina y cirugía (pp. 111-114).
ANEXOS
Figura 3. Resultados de los tubos después de usar el reactivo de Nesller
Figura 4. Algunos implementos de laboratorio usados en la práctica.
