Una extensin o frotis sanguneo consiste en recubrir parcialmente un porta con una gota de sangre, de tal manera que

las clulas de sta se dispongan formando una sola capa de ellas. Esto puede hacerse manual o automticamente. Lo ltimo se realiza mediante un aparato (spinner) que centrifuga rpidamente el porta con la sangre depositada en su centro. Con este aparato se obtienen unos frotis que presentan una distribucin celular muy homognea. PARTES DE UNA EXTENSIN. CABEZA Es la zona inicial de la extensin.

Es la regin ms gruesa. En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates forman aglomerados (pilas de monedas).

CUERPO.

COLA.

Es la zona media del frotis. Su espesor es el apropiado. En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de leucocitos. Contiene la "zona ideal" de observacin, que corresponde a la porcin que limita con la cola.

Es la zona final de la extensin. Suele tener un aspecto redondeado. Es la regin ms fina. En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y adems. los hemates estn deformados y presentan una tonalidad uniforme. En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes.

BORDES.

Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes.

Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por estar deformadas o destruidas CARACTERSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIN.

La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del porta. La cola debe estar cercana al otro extremo del porta, pero sin llegar a l.

El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el nombre de "barbas". Toda la extensin ha de ser fina y homognea. Los bordes laterales de la extensin deben estar separados de los bordes del porta por 1 mm aproximadamente. Una extensin normal ha de tener una longitud de las partes del portaobjetos. El uso de teidores automticos exige la realizacin de extensiones ms cortas que las consideradas normalmente como correctas

UTILIDAD DE LAS EXTENSIONES. El estudio de las extensiones sanguneas es esencial para el anlisis morfolgico de las clulas hemticas y para la realizacin del recuento diferencial linfocitario (RDL). Adems, es imprescindible para la distincin de una autntica trombopenia de una pseudotrombopenia producida por agregados plaquetarios. La investigacin de las extensiones tambin es til para la comprobacin de las alarmas que proporcionan los autoanalizadores hematolgicos REALIZACIN DE UNA EXTENSIN SANGUNEA. Las extensiones sanguneas se llevan a cabo deslizando un porta sobre otro en el que se ha depositado previamente una gota de sangre. Con esto se obtiene una fina capa de clulas sanguneas que puede ser adecuadamente observada con el microscopio. Material necesario

Una lanceta de aplicacin manual o automtica (por ejemplo, la del sistema Glucolet de los laboratorios Ames). Algodn. Un capilar no heparinizado, si la muestra es sangre venosa anticoagulada, o heparinizado, si la muestra es sangre capilar. 2 portas limpios y libres de grasa. Uno de ellos puede ser normal y el otro ha de ser, preferentemente. esmirilado y biselado (el porta extensor). Para mantener limpios los portas, se deben seguir las siguientes indicaciones:

Lavar los portas con agua y jabn lquido. Aclararlos con abundante agua caliente. Sumergir los portas, durante una hora en una solucin de etanol- ter etlico o, simplemente etanol. Volver a aclarar los portas y dejar secar. Por ltimo recordar que siempre debemos tocar los portas por los bordes, de esta forma evitamos manchar las superficies de los mismos con suciedad o grasa procedente de los dedos.

Guantes desechables. Un rotulador de vidrio.

Reactivos


Muestra

Un desinfectante: alcohol etlico (etanol) de 70, o mejor an, solucin alcohlica de povidona yodada. Solucin de etanol-eter etlico en una proporcin de 50:50.

Sangre capilar no anticoagulada o sangre venosa adecuadamente anticoagulada. La forma correcta de extraer sangre capilar es la siguiente:

Elegir el tercer o cuarto dedo de una de las manos. Desinfectar el pulpejo del dedo selecciondo con un algodn embebido en un desinfectante apropiado. Dejar que el desinfectante se evapore. Con una lanceta, pinchar firme y rpidamente una cara lateral de este pulpejo. Tras lo anterior con un algodn seco retiramos la primera gota emitida. Presionamos el extremo del dedo, a nivel del lado opuesto al de la puncin, hasta obtener la cantidad de sangre deseada. Por ltimo, tapamos el pulpejo con una tirita. La sangre venosa tiene que haber sido extrada hace menos de 3 horas, ya que pasado este tiempo, se producen unos cambios apreciables en las clulas, que se manifiestan, al ser teidas stas, como alteraciones en su morfologa. Una vez extrada, la sangre venosa ha de ser anticoagulada con EDTA. Para realizar frotis sanguneos no debe utilizarse sangre anticoagulada con heparina, ya que sta agrega las clulas y produce un fondo azul en las extensiones de sangre teidas con el colorante de Wright.

Tcnica

Hay que tener en cuenta que la sangre capilar contiene ms hemates y leucocitos y menos plaquetas que la sangre venosa.

Con los dedos ndice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta normal (porta soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa. Tambin puede apoyarse, simplemente, el porta soporte sobre el extremo del dedo corazn de la mano que lo sujeta. De esta forma, el porta soporte forma un ngulo con la mesa. Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema, depositar una pequea gota de sta (de unos 5 microlitros) en la cara superior de ese porta, a no menos de 2 cm del extremo opuesto al que agarra la mano. Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un poco por delante de la gota de sangre y formando un ngulo de 45 con el porta soporte. Es conveniente utilizar siempre el mismo porta extensor, para adaptarlo a esta funcin. Desplazar suavemente hacia atrs el porta extensor, hasta que alcance la gota de sangre. Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del porta extensor que toca el porta soporte. Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta extensor hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una velocidad media. Este deslizamiento debe acabar, aproximadamente, a 1 cm del extremo final del porta soporte, con un movimiento de ascensin del porta extensor. Secar rpidamente la extensin, agitndola al aire, para que sus clulas no se distorsionen.