Nota tecnica
luences inf en volumen en Pi-ston operado Ai r-di spl
acement Pipet tes
Resumen
pipetas de desplazamiento de aire son instrumentos fácil de usar
para la transferencia de líquido de pequeño volumen, pero que son
propensos a errores de volumen resultante de la manipulación, las
condiciones ambientales y propiedades del líquido. Analítico
enfoques termodinámicos
se utilizaron para describir y cuantificar factores que
influyen en que afectan a volumen. Los resultados fueron
comparados con las mediciones. Los efectos relacionados
con la diferencia de temperatura entre el líquido y el
instrumento de lejos prevalezcan sobre la dependencia de
nivel de temperatura común de líquido, instrumento y el
medio ambiente. Una ecuación basado en las leyes de
Fick se desarrolló para efectos de volatilización de calcular
en el volumen de aire cautivo que explica la dependencia
de la humedad ambiental, de pipeteado ritmo, el período y
de partida incondicionado de espera. Además la
dependencia de la presión barométrica, ángulo de
inclinación, la densidad del líquido, profundidad de
inmersión y la energía superficial en las puntas se calculó
y / o medirse. La revisión permite una visión completa del
tamaño de los errores en la calibración de volumen y el
uso. Estos efectos son típicamente mucho más altas que
las resultantes de medición gravimétrica.
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Autor: Rainer Feldmann, BRAND GMBH + CO KG
Wertheim, Alemania
El Dr. Karl Heinz Lochner, Fraunhofer para la Investigación de Silicatos Insitute
Sucursal Bronnbach, Wertheim, Alemania
Introducción
El concepto de una alta precisión pipeta de
desplazamiento de aire con puntas
desechables fue patentado por Schnitger [1].
En los años setenta varias publicaciones
describen efectos sobre la exactitud de la
pipeta y el coeficiente de variación. Joyce y
Tyler [2] investigaron el efecto de
calentamiento mano. Ellis [3] mide y
correctamente explica la dependencia de
volumen en la diferencia de temperatura entre
el agua y el instrumento.
Zeman y Mathewson [4] asumieron volatilización en la punta para ser una posible razón para errores.
Curtis [5] presenta un método fotométrico a principios de los años noventa. En 1995 un método para calibrar pipetas
de bajo volumen usando una trampa de evaporación fue descrito por Michel, Sommer y Spieweck [6].
En 1992 un proyecto de investigación llamado FIA 9152 fue lanzado por “Forschungsgemeinschaft Technik und
Glas” en Wertheim / Alemania por KH Lochner publicado en 1995 [7] (informe completo) y en 1996 [8] (resultados
principales). Este proyecto integral identificado los principales factores que influyen en el volumen. En varios
casos, las influencias se pueden cuantificar. Esta propuesta está recogida en muchas partes de esta revisión. Las
investigaciones de Michel et al. y Lochner et al. dio lugar a una revisión de la norma alemana DIN 12650, lo que
resulta en la norma internacional ISO 8655 para la calibración de la pipeta.
Desde finales de los noventa en el número de laboratorios acreditados en este campo creció en todo el mundo, y la
llamada para las comparaciones entre laboratorios surgió. En Alemania detalles de una comparación bilateral se publicaron
[9], que culmina en el desarrollo de la directriz DKD-R-8 1 [10] y DKD informes de expertos [11], [12] y [13] para calcular la
incertidumbre de medición en DAkkS laboratorios acreditados . El trabajo importante también hecho por E. Batista et al.
[14]. conocimientos básicos sobre las pipetas de desplazamiento de aire también se encuentra en el folleto de Ewald K.
[15].
El presente trabajo ahora especifica influencias precisamente mediante el uso de términos matemáticos. En particular, los
fenómenos desafiantes de la evaporación en el volumen de aire cautivo y la influencia de las diferencias de temperatura
serán tratados usando modelos matemáticos. Los resultados calculados se comparan con las mediciones reales, cuando
sea posible. Momento de la transferencia de calor axial y radial en el volumen de aire cautivo, se calculará líquido y la
punta. Los factores que contribuyen a la dependencia de nivel de temperatura común entre el agua, el instrumento y el aire
ambiente se evalúan cuantitativamente y se compararon con experimento, así como la influencia de la tensión superficial de
la energía de líquido y la superficie de las puntas de pipeta.
 Nota tecnica

Principio de funcionamiento del pistón operado pipetas desplazamiento de aire

Pistón Las pipetas de desplazamiento de aire se construyen de acuerdo con ISO 8655 parte 2. El pistón es primero puesto

en su posición inferior (primera parada, Fig. 1). La punta de la pipeta se sumerge en el líquido de ensayo, cuya superficie

tiene que ser plana. Cualquier curvatura de la superficie influye en el volumen aspirado. El pistón se desliza hacia arriba para

aspirar líquido hasta llegar a su tope superior. Después de aspirar líquido y la observación de un período de espera [12], la

punta de la pipeta se retira del líquido de ensayo lentamente sin tocar la pared interior del tubo y sin sacudidas. El volumen

se define cuando se separa completamente de la fuente de líquido. Sólo la evaporación en la superficie del líquido alrededor

del orificio de la punta y los residuos en la punta podría resultar en una disminución en la relación dispensado al volumen

aspirado.

enfoque termodinámico

Eventos en el volumen de aire cautivo puede ser aproximadamente describen como cambio isotérmica de estado de gas ideal.

Inmediatamente antes de la inmersión, la presión barométrica pag un existe en el volumen de aire cautivo

V D ( Figura 1). Después de la aspiración la presión en el sistema se reduce por la presión hidrostática de la columna de
Figura 1: Después de la inmersión de la pipeta con punta (d) el pistón (a) se
líquido pag h y la presión capilar de menisco pag S. Debido a esta presión cambiar el volumen del aire cautivo V re está
desliza hacia arriba y se expande el volumen de aire cautivo (b). El pistón está

agrandada por el volumen de carrera de émbolo V str
y reducida por el volumen V del líquido aspirado. V S t r es siempre un poco más grande que V.
La diferencia entre V str y V se denota por ? V W. Siguiendo resultados de la ecuación:
pag un ∙ V D = ( pag un - pag h - pag S ) ∙ (V D + V str - V)
Presion hidrostatica pag H = ρ W ∙ g ∙ h se coloca en la Ec. (1):
pag un ∙ V D = ( pag un - ρ W ∙ g ∙ h - p S ) ∙ (V D + V str - V)
sellado de limpiaparabrisas al eje (c). La pipeta ocupa líquido hasta que el
pistón alcanza su tope superior. Al levantar las formas de tensión superficial
pipeta un pequeño cuello de líquido por encima de la superficie hasta que el
líquido en la punta se separa completamente del vaso receptor (sección
amplificada). h denota el ascensor líquido en la punta. Se mide desde la
(1) superficie del líquido al vórtice menisco. Aproximadamente el ascensor líquido
después de la retirada de la pipeta puede ser utilizado para h. Al levantar la
pipeta (punta todavía se sumerge), el menisco se aplana (sección amplificada)
en vez de hundirse, mientras que la conservación de su forma. (E) denota el
tope superior (posición de reposo), (f) la primera parada y (g) la segunda parada
(2) (posición de reventón)

ρ W: la densidad del líquido, sol: aceleración gravitacional. Eq. (2) permite el cálculo de los efectos resultantes de los

cambios en la presión barométrica, la presión capilar, ángulo de inclinación, los cambios en la densidad del líquido y la

gravedad. Eq. (2) resolvió volumen pipeta real V es:

(ρ W ∙ g ∙ h + p S)
V = V St r- V re ∙ = V str - ? V W (3)
(pag un- ρ W ∙ g ∙ hp S )

Para utilizar este término para el cálculo, Ensayo de elevación líquida h en la punta y el volumen de volumen de aire cautivo V re tiene que

ser medida.

operaciones físicas durante el uso de una pipeta de desplazamiento de aire pueden ser matemáticamente incluidos mediante el

uso de sumandos adicionales ? V EV y ? V T contribuir para efectos de evaporación y efectos de la temperatura en el volumen de

aire cautivo, respectivamente:

V = V str - ? V W - ? V EV - ? V T (4)

Las ecuaciones se derivaron también en [7], [8] completado por pag S.

Influencias resultantes de la carrera del pistón

volumen de la pipeta se determina principalmente por medio de topes que definen la carrera del pistón (Fig. 2). Las mediciones de la

repetibilidad y la reproducibilidad de carrera identifican las desviaciones en el rango micrométrico debido a las imperfecciones

mecánicas.

El aumento de la fuerza contra los primeros resultados de parada en un poco más alto volumen entregado y viceversa. Las diferencias en

el suministro de volumen se producen para diferentes usuarios que solicitan diferentes fuerzas operativas.

En conjunto, una incertidumbre estándar en un mínimo de 0,014% del volumen nominal tiene que ser asumido para contribuir a Figura 2: fuerza típica de dependencia de la trayectoria de un mecánico
pipeta 200-l. La posición de reposo se denota por (a), la carrera de pipeteo
las influencias dependientes de carrera para el personal bien entrenado. Para pipetas de volumen fijo incluso una cantidad por (b), la primera parada por (c) y el golpe fuera de carrera por (d). En la

menor puede ser justificado [12]. pipetas electrónicas, por supuesto, no están influenciados por las fuerzas de operación que es sección (c), la curva no es completamente vertical, causando operativo
dependencia fuerza. De Lochner [7] (modificado)
sin duda una ventaja.

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Efectos de la presión barométrica, la densidad del líquido, el ángulo de

inclinación y la presión capilar

cambio de volumen resultantes de las variables de presión barométrica pag un, la densidad del líquido ρ W,

presión capilar pag S, aceleración gravimétrica sol y el aumento del líquido en la punta h se calculan utilizando la ecuación. (3).

)
ρ W2 ∙ g 2 ∙ h 2 + pag S2 ρ W1 ∙ g 1 ∙ h 1 + pag S1
? V = - V re ∙ ( - (5)
pag a2 - ρ W2 ∙ g 2 ∙ h 2 - pag S2 pag A1 - ρ W1 ∙ g 1 ∙ h 1 - pag S1

El aumento de líquido h en la punta puede ser aproximadamente constante respetaba el cálculo de las dependencias

mencionadas. El efecto de diferentes aceleraciones gravimétricos sol todo el mundo es pequeño no medible. La presión

hidrostática y la presión capilar se pueden despreciar contra la presión de aire pag un en el denominador.

Eq. (5) a continuación muestra que la influencia de los cuatro factores mencionados es aproximadamente proporcional al

volumen de aire cautivo V re y el aumento de líquido h.

La dependencia de la presión barométrica

La dependencia de volumen en el cambio en los resultados de la presión barométrica de la ecuación. (5) cuando se cambia volumen nominal [l] 10 1000 100 20
ml
desde la presión atmosférica pag a, X1 en la ubicación X1 a la presión atmosférica

presión del
pag a, X2 en la ubicación X2 en constante ρ W y pequeña pag S

Altitud [m]

aire [hPa]
Desviación [%] de
volumen nominal

)
1 p a, 1 p a,
? V ≈ -V re ∙ ρ W ∙ g ∙ h ∙ ( - (6)
X2 X1 (1) 3500 658 - 1.2 - 0.53 -0.74 -1.56
(2) 2300 766 - -0.31 -0.44 -0.93 0.74
Esta ecuación se puede usar para calcular la dependencia de los cambios de presión meteorológicos, también.
(3) 518 953 - 0,15 -0,06 -0,09 -0,18
(4) 0 1,013 0,00 0,00 0,00 0,00
Para pequeñas pipetas de volumen incluir la presión capilar como en la ecuación. (5).
Tabla 2: Calculado desviación volumen dependiendo de la altitud
Ajuste por altitud en pipetas manuales sólo es correcta para un volumen específico. Sin embargo, las pipetas electrónicas
suponiendo típico de pipeta datos de diseño utilizando la Ec. (6). (1)

con ajuste de dos puntos permiten búsqueda de todo el rango de volumen especificado. Jungfraujoch (Suiza), (2) Ciudad de México, (3) Múnich, (4) el nivel del
mar

La dependencia de la altitud ha sido validado en los Alpes de Berna en Suiza por Spaelti Chr et al. [13] y también

por Rodríguez G [16] en el montaje Washington (NH, EE.UU.). El efecto de los cambios meteorológicos en la

presión del aire es baja. Se considerará en el presupuesto de incertidumbre [10].

Influencia de la presión capilar en la punta

A partir de la ecuación. (5) una expresión simple se puede derivar para calcular aproximadamente la influencia de la densidad de un

líquido:
g∙
? V ≈ -V re ∙ ∙ Δρ W (7)
hp un

Si el agua se intercambia contra el ácido sulfúrico (densidad 1,8 g / ml) y asumiendo una pipeta 1000-l, la disminución de

volumen calculado es 0,78% en volumen nominal. Sin embargo, un cambio en conlleva líquido un cambio en la presión de

vapor y la tensión superficial, también. Por lo tanto, se observa una diferencia de volumen diferentes para estos valores

calculados en la realidad.

Ángulo de inclinación

Si una pipeta se inclina durante la aspiración por un ángulo ε a la línea vertical, se obtiene un mayor volumen.
Sólo la proyección de presión hidrostática a la línea vertical es eficaz. La expresion

g ∙ pW
? V ≈ V re ∙ ∙ (H - h ∙ cos ε) (8)
pag un

se aplica en este caso. Usando una pipeta de 1000-l a una inclinación de 45 ° con el volumen aumenta de línea vertical

mediante 0,28% en volumen nominal, un valor que corresponde bien a la

0,27% medido por KH Lochner et al. [8].

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Influencia de la presión capilar en la punta

Angulo de contacto Θ entre los conductores de líquidos y de punta a una presión capilar pag S. Suponiendo forma esférica, pag S =
4 ∙ σ ∙ cos Θ
resultados.
re

σ es la tensión superficial del líquido, y d el diámetro interno de la punta. Sólo en pequeñas puntas, se desarrolla una

superficie esférica. Tips de varios milímetros de diámetro muestran un perfil aplanado por gravedad (Fig. 3).

La influencia de la presión capilar puede comprobarse usando puntas de pipeta con la energía superficial reducida, que muestra

un ángulo de contacto significativamente mayor a polipropileno (valores medidos 115 ° frente a 104 °). A partir de la ecuación. (5)

un simples resultados de la ecuación para describir el efecto capilar en el volumen:

Ap S
? V ≈ -V re ∙ (9) Figura 3: Forma de la superficie de líquido en la punta de la pipeta después de la
pag un
aspiración y la pipeta lift-off de líquido. Parte superior: la punta de polipropileno puro.
Volumen de 1000 l. Baja: MARCA ® punta ULR PP muestra una protuberancia mayor
El efecto es pequeño para pipetas con mayor volumen nominal de 100 l. pipetas 1000-l muestran una reducción de

volumen máxima de 0,1% en volumen nominal, mientras 1 pipetas l muestran una reducción de volumen de 1% o más.

Cumple de cálculo bien con las mediciones. Debido a estas desviaciones volumen reducido de energía superficial sobre

consejos parece ser una desventaja, pero en realidad estos consejos evitar residuos en las puntas, una característica que

conlleva efectos mucho más beneficioso para muchos líquidos.

Desarrollo temporal de la concentración de vapor en el volumen de aire cautivo

En este capítulo se analiza la sumandos ? V EV en la ecuación (4). Los cálculos integrales utilizan primera ley de
Fick:
ca az
j = -D ∙ ∙ Δρ W (10)

aC

y la segunda ley de Fick (aquí en una forma tridimensional):

un 2 c
=D∙ az 2
(11)
un t

j es la difusional flujo en mol / (m 2 s), C es la concentración de vapor en mol / m 3. El volumen de aire cautivo se modela como un

cilindro de volumen V re y la sección transversal igual a la superficie del líquido con un diámetro d ( La Fig. 4), z corre a lo largo del

eje central de la punta, t transcurrido el tiempo,

re es la constante de difusión, L es la altura del cilindro.

Esta ecuación diferencial puede resolverse aplicando el método de Laplace transformar. para finita L, la solución se

(véase [17], página 41):

(12)

Esta solución también es exacta para largos intervalos de tiempo, pero no converge bien a intervalos de tiempo muy cortos.

Puede verse así que incluso después de 1 segundo, la mayor parte del vapor liberado es todavía no encuentra a más de 12 mm por

encima de la superficie del líquido (Fig. 4). Entrega y al lado de llenado, por supuesto, se mezclarán hasta piezas húmedas y secas de

la cantidad de aire cautivo.

Debe tenerse en cuenta que, por supuesto, también convección forzada por el movimiento de la superficie del líquido juega un Figura 4: Calculado desarrollo temporal de la concentración de cautivo
humedad volumen de aire en una punta de pipeta 1.000 l durante 0,05 s a 2 s
papel. Sin embargo, cerca de las líneas de flujo paralelo de la superficie existe (flujo pistón). Por lo tanto, en la región cerca de después del primer contacto entre el aire y el agua. La humedad relativa en el

la difusión superficial líquido puede ser asumido para desarrollar sin molestias. volumen de aire cautivo antes de contacto con el agua: 50%. Después de 2 s
los alcances de concentración cerca de la mitad de la posible saturación de
humedad. El cilindro sombreada representa el modelo matemático del
volumen de aire cautivo

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volumen evaporado

Multiplicando el flujo de difusión j en la Ec. (10) por la superficie del líquido y la integración de la expresión sobre un

período de tiempo t mi, el número de partículas se evaporó ν ( en los resultados mol):

La ley de los gases ideales relaciona el volumen de vapor • •• a ν. • • es la presión de aire,

• • la constante molar de los gases y • la temperatura en K.

En el modo de pipeteo estándar, • • es igual al tiempo de aspiración más el tiempo de espera: • • + • ••.

La concentración se puede expresar utilizando de nuevo la ley de los gases ideales. Presentación de la humedad relativa del

aire � y la presión de vapor del líquido pag re la expresion

(13) Figura 5: volumen condensado sobre la superficie del líquido de una punta de
1000-l, lleno a volumen nominal. La humedad inicial es 50%. El modelo cilíndrico
fue utilizado para el volumen de aire cautivo descuidar el orificio del eje. La línea
La siguiente fig. 5 muestra los resultados para el volumen evaporado en una punta de 1,000 l. efectos de la humedad dependen
de: modelo lineal, línea completa: el uso de la ecuación. (13) que muestra una

principalmente de la superficie del líquido. Zero volumen de aire cautivo de suprime curso la evaporación por completo. curvatura convexa y alcanzando un punto final de saturación. La escala de
tiempo muestra la suma de tiempo de aspiración y el período de espera

La dependencia de volumen en el tiempo de contacto entre el volumen de aire líquido y

cautivo

El volumen de vapor creado V EV aumenta el volumen de aire cautivo durante la aspiración y tiempo de espera. Vale la pena

notar que a partir de uno de nanolitros de agua sobre 1.300 nanolitros de los resultados de volumen de vapor por

evaporación. Esto hace que los efectos de humedad grande. El aumento de tiempo de contacto entre el agua y el volumen

de aire cautivo reducirá el volumen aspirado mientras que la punta todavía está inmerso. En [7] se midió la dependencia de

la entrega de volumen en tiempo de inmersión (Fig. 6). Los resultados se compararon con valores para V EV calculado por la

Eq. (13) (resta de 20 l), suponiendo los parámetros de diseño típicas de una pipeta de 20-mL. Incluso este sencillo modelo

conduce a una buena correspondencia entre el cálculo y medición. Sólo los valores a 95% no cumplir posiblemente debido

a cuestiones experimentales (medición de la humedad). Este ejemplo demuestra claramente que la humidificación del

volumen de aire cautivo determina el volumen en la punta y no un efecto de “humectación” en las paredes de la punta. El
agua no puede mojar polipropileno. llenado Tip y la entrega no deja ninguna película detectable en la superficie. Si es así,
el agua y / o calidad de punta están fuera de grado.
Figura 6: La dependencia del volumen emitido el tiempo de inmersión en
una pipeta de 20-mL. volumen entregado se midió aplicando tres ajustes
diferentes de la humedad ambiente (5%, 55%, 95%). Un nuevo, no
preacondicionado, la punta se utilizó para cada pesaje. Las líneas
continuas representan los valores calculados. Cada curva alcanza un
punto final de saturación. De Lochner [7] (modificado)

Es obvio que el pipeteado de líquidos volátiles conduce a una mala exactitud e incluso goteo. Este efecto perjudicial se puede

remediar por ejemplo, enjuagando los punta varias veces para alcanzar la saturación más vapor en el volumen de aire cautivo.

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efectos iniciales de la pipeta sin cambio secuencial punta

Fig. 7 muestra que la solución a valores estables toma hasta 5 veces de pre-lavado de la punta para alcanzar el equilibrio, un

hecho que ha entrado en muchas directrices. Pipetas con alta relación de aire cautivo volumen / volumen seleccionado pueden

requerir un número de ciclo más alto. Hay un problema comparación de los resultados calculados y medidos: el lapso en el

primero de pesada entre el volumen de aire cautivo saturado y el volumen de aire cautivo en la humedad del ambiente es

mucho mayor en los valores medidos. Presumible este comportamiento puede ser explicado por la turbulencia en el aire.

Figura 7: Primeros 10 mediciones de una pipeta manual de

1000-l después del montaje de punta. Las líneas completas:
cálculo, líneas discontinuas: medición. Dos líneas superiores:
volumen de aire cautivo y la punta se saturaron antes del
experimento, dos líneas inferiores: mediciones comienzan con
volumen de aire cautivo y la punta de la humedad del aire
ambiente. Un volumen de aire cautivo saturado provoca
volumen máximo porque la evaporación es cero. Una punta
que contiene la humedad del aire ambiente a la primera
permite la máxima evaporación conduce a valores bajos.
Todas las curvas convergen al mismo valor de equilibrio
intermedio

Cálculo de la humedad de equilibrio en el volumen de aire cautivo

Durante los ciclos de pipeteado los aumentos de volumen de aire en cautividad la humedad de la superficie del líquido y pierde

humedad por la carrera de escape y re-aspiración de aire ambiente seco. Cálculo y experimentos muestran que establece el

volumen de aire de humedad en cautiverio en el rango medio entre humedad exterior y la saturación completa.

La dependencia de la humedad del aire externo

cables superiores externos de humedad a más alto de humedad de equilibrio en el volumen de aire cautivo, lo que permite menos
tamaño de Medición Cálculo
evaporación durante la aspiración y período de espera. Por lo tanto mayores corresponde humedad externa a un mayor volumen. pipeta
Alícuota de volumen pipeta 100% 50%
Además, la influencia de los efectos iniciales y período de espera disminuye con el aumento de la humedad ambiente. 10% 100% 50% 10% 10 ml
0,05 0,04 0,03 0,03 0,03 0,02

1000 l 0,05 0,05 0,03 0,05 0,04 0,02

Alícuota volúmenes mostrar menor dependencia absoluta en puntas cónicas. Este comportamiento se puede explicar bien porque
100 l 0,08 0,07 0,03 0,07 0,05 0,03
los efectos de humedad dependen del área de la superficie de líquido que es más pequeño en el intervalo alícuota.
10 l 0,09 0,08 0,01 0,07 0,06 0,05

Tabla 2: Volumen de pipetas se midió utilizando diferentes tamaños de

valores mucho más altos se alcanzan si no están lo suficientemente pre-enjuagadas consejos. Sobre todo, si el volumen de aire
pipetas. Los valores se midieron con pipetas condicionados al equilibrio
cautivo es mucho mayor que el volumen nominal, de humedad de equilibrio se alcanza sólo después de muchos ciclos de valores moisture.The indicadas muestran la desviación de volumen en
porcentaje si los externos cambios de humedad del aire por 10% de HR. Los
pre-aclarado, por ejemplo con respecto a una pipeta de 20 l usando 200 consejos mu l. Después de 2,5 s de tiempo de inmersión
valores se refieren al porcentaje de volumen nominal! Ejemplo: De acuerdo
de la punta y 3 veces de pre-aclarado, se midió un cambio de volumen 2,1% -3,5% en volumen nominal si la humedad externa con las mediciones, el volumen de una pipeta de 1.000 l en 50% de los
cambios de volumen nominal por
cambió de 20% a 80% [7]. Este valor coincide bien los cálculos suponiendo incompleta humedeciendo en el volumen de aire

cautivo. Si las puntas de pipeta no son pre-enjuagadas en absoluto, se incrementa la dependencia del nivel de humedad. 0,05% del volumen nominal (0.5μl absoluta) si los cambios de humedad
externas por 10%. Las mediciones con pipetas 10 l usando 20 consejos l
mostraron una confiabilidad

Con respecto a los efectos de la humedad, es esencial conocer la sección de líquido menisco cruz, el diseño de la punta y

la extensión del preacondicionamiento realizado.

A veces las discrepancias entre las mediciones de dos personas diferentes permanecen no fijadas porque libera un operador

del pistón después de la entrega, mientras que la punta ya está fuera de la trampa de recipiente y la humedad de pesaje,

aspirando aire ambiente seco, mientras que el otro, por el hábito, libera el pistón cuando la punta de pipeta todavía está dentro

de la región de alta humedad de un peso de recipiente y la humedad trampa. El último escenario conduce a un aumento del

volumen.

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 Nota tecnica

La dependencia de tiempo de espera

Después de la aspiración, debe observarse un período de espera de 1 segundo (3 segundos para pipetas de más de 1.000 l).

A los efectos de cálculo de la incertidumbre, el cambio de volumen se debe conocer si el período de espera se desvía de estos

valores. Mediciones y cálculos para una pipeta de 1000-l muestran una caída de volumen de aproximadamente 0,04% en

volumen nominal si el período de espera se incrementa en 1 segundo porque se evapora más líquido durante el período de

espera. Los resultados medidos para otros tamaños de pipetas fueron inconsistentes.

La dependencia de nivel de temperatura común

Las mediciones realizadas por Lochner [7] y Ylätupa [18] y otros mostraron ninguna influencia significativa de nivel

de temperatura común. Los efectos son:

a) la expansión térmica longitudinal de la distancia de parada del pistón.

b) la expansión térmica de la sección transversal del pistón. expansión máxima se produce si se utiliza un mecanismo de pistón

polímero y accidente cerebrovascular, lo que resulta en un cambio de volumen hasta 0,03% por cada 1 K. diferentes diseños del

interior de la pipeta puede aumentar o disminuir esta dependencia.

Además de a) y b) en el volumen de aire cautivo, efectos adicionales son eficaces:

c) la expansión cúbica de punta y el volumen eje no tiene influencia directa en el volumen medido, pero un volumen de aire

cautivo más grande es más suave y se reduce el volumen aspirado.

d) aumentar Además del volumen de la punta interna se acompaña de ascensor menos líquido causando un aumento

del volumen aspirado y contrarrestar a c).

e) Densidad del líquido disminuye al aumentar la temperatura, seguido de un aumento de volumen.

f) El aumento de temperatura reduce la tensión superficial del agua. Los cálculos

mostraron influencia insignificante para c) a f).

g) El efecto de la evaporación en el volumen de aire cautivo es fuertemente dependiente de la temperatura debido a la presión de

vapor aumenta con la temperatura.

Otros experimentos se realizaron en pipetas 1000-l. La habitación entera incluyendo todo el equipo de medición se llevó a

cabo estable a temperatura ambiente, 29 ° C y 5 ° C. Se observó una tendencia de la temperatura ambigua dependiendo del

tipo de pipeta. Ninguna declaración significativa estadística se podría dar. Pero mediante la corrección de mediciones para la

expansión térmica del pistón y el accidente cerebrovascular, se encontró una pequeña tendencia negativa. Cálculo utilizando

la fórmula (13) produce 0,016% de disminución por 1 K.

Para los propósitos de cálculo de la incertidumbre de medición que es razonable suponer una dependencia máximo

de +/- 0,02% de desviación volumen por 1 K cambio de nivel de temperatura común. Efectos de la diferencia de

temperatura entre el líquido y pipeta siempre prevalecerán.

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 Nota tecnica

Las diferencias de temperatura

Descripción

El uso de un más frío líquido que pipeta y el medio ambiente, que se enfría la punta hacia abajo en el área de contacto con el

líquido de prueba durante el pipeteo o cuando la punta está pre enjuagado (Fig. 8) y viceversa. Si el volumen de aire cautivo se

calienta o enfría durante la aspiración, un gran efecto en los resultados de volumen aspirado. Esto corresponde a una situación

típica en el trabajo de laboratorio de rutina cuando un líquido se pipetea a la temperatura corporal o a temperatura de refrigerador,

mientras que la pipeta y el aire son a temperatura ambiente.

La temperatura del aire disminuye rápidamente a cerca de la temperatura de la pared punta mientras se mueve hacia abajo a la parte

fría de la punta de pipeta (para reanudar posición de inicio para la aspiración). Mientras que el llenado de la punta, el aire enfriado se

desplaza en la parte superior de la punta de la pipeta y el eje de calentar de nuevo. Incluso un aumento mínimo de los cables de la

temperatura del aire a un notable incremento en el volumen de aire cautivo durante la aspiración, lo que lleva a la misma cantidad de

disminución de volumen. La ley de los gases ideales cuantifica este cambio de volumen que lleva a

(14)

cambio de volumen por Delta T = 1K diferencia de temperatura a 20 ° C. Sin embargo, la transferencia de calor desde la

superficie del líquido al volumen de aire cautivo compromete el efecto a un cierto grado. Por lo que la dependencia real es en

un 10% -35% menor que las mediciones muestran. La desviación de volumen es proporcional al volumen de elevación de

pistón V str y el cambio de temperatura relativa. Figura 8: El pipeteo de líquido frío. de aspiración y de descarga anteriores se
adapta parte inferior de la punta hasta la temperatura del agua. La curva muestra
laterales de la pendiente de temperatura de la fresca parte inferior de la punta de

No existe una dependencia del tamaño del volumen de aire cautivo. Sólo si el volumen de aire cautivo se hace menor su parte superior caliente. Durante la aspiración del cautivo diapositivas de
volumen de aire de fría a caliente y se expande
que el volumen de carrera del pistón son efectos temperatura reducida, respectivamente. Cero volumen de aire cautivo

suprime por completo estos efectos.

transición de calor en el volumen de aire cautivo y a la punta

La velocidad de la transición de calor radial entre la punta y el aire se puede calcular utilizando las funciones de Bessel [17].

Fig. 9 muestra que el tiempo de aspiración y período de espera son suficientes para asegurar una adaptación temperatura casi

completa de volumen de aire cautivo a la punta o la temperatura eje excepto en las grandes consejos.

En cuanto a intercambio de calor entre la punta y el agua es instructivo considerar la capacidad calorífica de la punta y el

agua aspirada (Tabla 3).

capacidad calorífica del agua es siempre mayor que el de las paredes de la punta. En cuanto a la capacidad de calor de aire, se

hace evidente que la temperatura del aire casi no tiene impacto en la temperatura de la punta sobre tiempos cortos. El

cumplimiento de las mediciones, los cálculos muestran que una punta se adapta a la temperatura del agua dentro de pocos
Figura 9: Calculado desarrollo de la distribución de temperatura del aire
ciclos de aspiración y la entrega. Cálculo del número de Nusselt muestra que la asunción de la conducción de calor en lugar de en una punta de pipeta 200 l si las paredes aumentarían
inmediatamente temperatura. Las curvas muestran el rápido
convección puede ser justificado.
calentamiento de aire en la punta a temperatura casi punta dentro de
0,05 s. Leyenda: (a) 0,0005 s, (b) 0,002 s, (c) 0,005 s, (d) 0,01 s, (e)
0,02 s, (f) 0,05 s

tamaño de la punta Agua Propina extremidad del interior de aire

10 ml 42 9 0,012

1000 l 4.2 0.9 0,0012

200 l 0.8 0.3 0,0002

20 l 0.08 0.05 0.00002

Tabla 3: La capacidad calorífica en J / K del agua aspirada en una punta y la

porción de pared punta adyacente, así como la capacidad térmica del
volumen de aire cautivo igual al volumen de agua aspirado.

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 Nota tecnica

propagación temperatura Axial

En muchas aplicaciones consejos no son pre-aclarado y se desechan después de cada uso. consejos no enjuagadas no son

pre-enfriados o precalentado por ciclos anteriores, y por lo tanto, las paredes de la punta no se transferirá calor al volumen de aire

cautivo antes de la aspiración.

Sin embargo, durante la aspiración del volumen de aire cautivo está en contacto con la superficie del líquido y comienza a

adaptarse a la temperatura del agua. En caso de baja temperatura del líquido, los contratos de volumen de aire en cautividad y

el volumen de líquido aspirado se aumenta (Fig. 10). Es de esperar que ambas líneas se cruzan en la temperatura ambiente /

pipeta de 28 ° C. Que hacen a una temperatura más baja es probablemente debido a la falta de humectación del volumen de

aire cautivo en la curva (a) bajar el volumen.

la transferencia de calor axial en la superficie del líquido funciona como un antagonista a la transferencia de calor radial de la superficie de

la punta precalentada / pre-enfriado y viceversa, mientras que prevalece de transferencia radiales.

Para la conducción de calor axial se hizo un enfoque teórico. La siguiente ecuación se podría derivar (ver [19],
página 169), que describe la expansión de volumen procedente de la conducción de calor axial de la superficie
del líquido al volumen de aire cautivo.

Figura 10: La dependencia de volumen suministrado en la temperatura del agua

en una pipeta 200 l en caso de punta no lavado (a) y pre-enjuagado (b).
Ambiente y la temperatura de la pipeta es de 28 ° C. En la curva de la
temperatura ambiente (b) muestra una desviación de volumen de
aproximadamente 0,25% por 1 K a volumen nominal, y la curva (a) de
λ es la conductividad de calor del aire, C pag su capacidad de calor y ρ su densidad. DT es la diferencia de temperatura inicial
aproximadamente -0,1% por 1 K. Los Cumple valor último con cálculos en la

entre el agua y el volumen de aire cautivo, y T un la temperatura absoluta del volumen de aire cautivo en K. Este efecto de tabla 4. La convección natural podría ser un motivo para la no linealidad. De
Lochner [7] (modificado)
volumen depende del área de superficie UN Florida del líquido. Comparación con las mediciones mostraron que la cantidad

resultados teóricos a aproximadamente el doble de los valores medidos. Esto es plausible, ya que la conducción de calor

radial compromete la conducción de calor axial. Tabla 4 muestra los resultados de cálculo de la propagación de temperatura
Alícuota de volumen nominal
axial.
100% 50% 10%

1000 l - 0,041 - 0,034 - 0,015

Si el nivel de líquido exterior supera el aumento líquido interno (profundidad de inmersión de la punta), a saber, la selección de partes
100 l - 0,099 - 0,060 - 0,020
alícuotas en las puntas de bajo volumen, de refrigeración o de calefacción en consejos no enjuagadas es eficaz desde el exterior durante la

aspiración. Los efectos dependen de pipeteado ritmo. Tabla 4: desviación de volumen en porcentaje del volumen nominal
causada por diferencia de temperatura entre el agua y el aire / pipeta en las
puntas no enjuagadas. Los valores resultantes de la ecuación. (15) se
dividieron en medio. Ejemplo: si un 1,000 l pipeta aspirados de 500 l de
temperatura común del agua y el aire que difiere de la agua más fría 1 K en comparación con la pipeta en una punta no lavado, el
temperatura de la pipeta volumen aumenta en 0,034% de 1000 l (absoluta

0,34 l) de acuerdo con el cálculo

Esta situación se produce, por ejemplo, si se utiliza una pipeta en una habitación fría, que ha sido adaptado a temperatura

ambiente antes. Este caso es similar a la situación ya se ha descrito cuando la temperatura del líquido es diferente de la

temperatura común de pipeta y el aire ambiente.

temperatura común de agua y pipeta que difiere de la temperatura

del aire

Esta situación no es un caso común en un laboratorio. Si, por ejemplo, el aire caliente se aspira después de la entrega, se

contraerá durante la aspiración posterior y dar lugar a un mayor volumen de aspirado. Sin embargo, después de la explosión

del aire dentro de la pipeta tiene tiempo para adaptarse a la temperatura de la pipeta. En [7], se midió la desviación de

volumen causada por la diferente temperatura del aire para una pipeta de 1000-l a 0,066% del volumen nominal por 1 K.

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Intercambio de punta de la pipeta durante la medición

ISO 8655, parte 6, exige cambio punta durante el pipeteado, seguido de un único ciclo de prelavado de cada nueva punta.

Intercambio de puntas de pipeta siempre implica una alteración del nivel de humedad en el interior de la pipeta. Sin un

cambio, un sistema de pipeta es más estable. Para reducir la incertidumbre de la medición y también por razones

económicas y de calibración rápida, las mediciones se pueden tomar sin cambio de la punta. Véase [10], así como [20].

Tan pronto como residuos, gotas o otras alteraciones ocurren en la punta, se hace necesario un cambio de la punta. Cualquier nueva

punta deberá prepararse para la calibración de nuevo por 35 ciclos de aclarado para establecer un nuevo valor de equilibrio de

humedad en el volumen de aire cautivo.

Orden de los ajustes de volumen para la calibración

Calibración debe, por convención, empezar por el volumen de la alícuota más baja, luego seleccionar la alícuota intermedia

y, finalmente, el volumen nominal [10, 20].

Si procediendo en orden inverso, volúmenes medidos no cambiarán si la punta está suficientemente preacondicionado para
alcanzar la humedad de equilibrio en el volumen de aire cautivo después de cambio de volumen.
Como un efecto secundario de la mano-calentamiento, el orden de las mediciones puede tener una influencia en volumen. Si
Figura 11: Influencia de la mano-calentamiento en el volumen de la pipeta en
una pipeta de 100 l. Temperatura de la habitación: 19 ° C. La temperatura del
agua 17,8 ° C. El instrumento se llevó a cabo en la mano sin interrupción y se
calentó hasta (parte (a)). Durante los primeros 30 minutos, el intercambio de
calor de la mano principal del operador a las diferencias de temperatura en el
interior de la pipeta, acompañado por una disminución de volumen. A partir de
entonces, guantes aislantes se pusieron sobre y la pipeta se establecen entre las

se comienza con el volumen más pequeño, el calor puede tomar tiempo durante las mediciones alícuotas para invadir la operaciones que resultan en un aumento del volumen (la parte (b)). La pipeta
investigado representa la dependencia extrema. pipeta actual diseña
pipeta partes cerca de la mano y por lo tanto se desarrolla un gran efecto cuando se selecciona el volumen nominal. generalmente muestran mucho más bajos efectos de calentamiento de mano (de
Lochner [7] (modificada))
Comenzando con el volumen nominal, calentando aún se observa al principio. El siguiente volumen de la alícuota responde

notablemente inferior a calentar.

ritmo de pipeteo

Principalmente debido a efectos de la humedad, el ritmo de pesajes afecta volumen. Fig. 12 muestra el efecto de largo período

de espera, el purgado de la pipeta durante la calibración y la aspiración de aire húmedo.

A espera más largos cables de época en primero para disminuir el volumen (a) la humedad y a mayor en el volumen de aire cautivo que

implica aumento de volumen subsiguiente (b). Obviamente la reducción de la humedad mediante el bombeo de cables de aire seco a

volumen inferior (siguiente c), el bombeo en aire húmedo a un mayor volumen (siguiente d).

Profundidad de inmersión

El volumen finalmente que queda en la punta de la pipeta se define en el momento de la interrupción de la columna de líquido. En ese

momento, el orificio de la punta se encuentra un poco por encima de la superficie del líquido. Por lo tanto, la profundidad de inmersión no

tiene un impacto directo en volumen. Sin embargo, existen algunos efectos que impactan indirectamente.

Si la punta se sumerge más profundo, la superficie del agua alcanza una posición final más alta después de la aspiración. El
levantamiento de la pipeta aumenta la presión hidrostática en la punta que lleva a un poco de flujo de salida a través de la punta
que todavía está inmerso. Sin embargo, el menisco de la superficie no sigue este flujo de salida en su margen exterior debido a
que la histéresis muestra el ángulo de contacto. Más bien, el menisco se aplana en el centro. Este fenómeno se supone que
Figura 12: Influencia de las perturbaciones de ritmo y de humedad irregular
durante la calibración en una pipeta de 100 l. En el punto (a) el líquido se llevó a
cabo en la punta durante 30 segundos. En el punto se reanudó (a), el pipeteado
estandarizada. bombeo repetida (30 veces) en las derivaciones de aire seco a
gran disminución de volumen (c). Siguiendo (d), el aire como húmedo como sea
posible se aspiró. Siguiendo (e) estandarizada pipeteando volumen se deja

conducir a una pequeña dependencia de la profundidad de inmersión. Para grandes pipetas el efecto resultante permanece sedimentar de nuevo a los valores originales, desde Lochner [7] (modificado)

significativamente por debajo de 0,02% de desviación de volumen se refiere al volumen nominal por milímetro de profundidad de

inmersión desviación [12].

Las diferencias entre el agua y temperatura de la punta se asumen para crear efectos más grandes en volumen si el aumento de

líquido en la punta es menor que la profundidad de inmersión. En este caso, los impactos de temperatura de fuera de la punta, el

cambio de punta y la temperatura del volumen de aire cautivo.

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Manipulación y efectos instrumentales

Los experimentos mostraron que es razonable asignar a efectos de la carrera del pistón y la histéresis contador, ángulo de

inclinación, el cambio de la presión capilar de la punta a punta, el cambio de período de espera, la dependencia de nivel de

temperatura común, mano de calentamiento, pipeteando ritmo y profundidad de inmersión una incertidumbre estándar de

medición de aproximadamente 0,04% (para pipetas fijos) a 0,06% (para pipetas variables) se hace referencia al volumen

nominal [12].

Contribución debida al procedimiento de calibración gravimétrica

El efecto gravimétrico en la incertidumbre se calcula exhaustivamente en la norma ISO / TR 20 461 [21]. Como se

describe en detalle en [10], [12] la contribución de gravimetría a la incertidumbre total de la medición es relativamente

bajo.

iones lus Conc

La aplicación de diseño de pipeta de volumen de aire cautivo y las leyes básicas de la termodinámica de los gases ideales y física

de superficies, expresiones matemáticas se podían encontrar para describir y cuantificar las influencias básicas en el volumen

suministrado. Principal fuente de error es un dependiente de la temperatura entre el líquido y el instrumento (alrededor de 0,3% de

desviación de volumen a volumen nominal por 1 diferencia K), mientras que la dependencia de nivel de temperatura común de

líquido, el instrumento y el aire ambiente es menor en más de un factor de 10. Este último se origina de dependencia de la presión

de vapor del líquido dependiente de tempera-tura contrarrestar a la expansión térmica de la unidad de accidente cerebrovascular.

También hay un impacto significativo en el volumen si se cambia la humedad del aire ambiente. humedece antes de enjuagar el

volumen de aire cautivo. El volumen es mucho menor si se utilizan puntas sin pre-lavado. Sin embargo, en este caso, la dependencia

de la diferencia de temperatura entre el líquido y el instrumento se reduce a aproximadamente un tercio a una sexta parte. Si el

líquido está en el cuerpo o la temperatura del refrigerador sin enjuague previo de las puntas se debe aplicar.

Los líquidos con alta presión de vapor necesitan preacondicionamiento intensiva para evitar un error de gran volumen o incluso goteo.

Se demostró que la diferencia de temperatura efectos comportan aproximadamente proporcional al volumen de la alícuota seleccionada. La

dependencia de la presión barométrica, ángulo de inclinación y se comportan de la densidad del líquido sobre proporcionalmente al

volumen de aire cautivo, mientras que todos los efectos relacionados con la humedad dependen principalmente de la zona de superficie del

líquido.

Se pudo demostrar que las puntas de pequeño volumen con baja energía superficial reducen el volumen aspirado.

El cálculo de la incertidumbre de la medición, estos efectos relacionados system-siempre prevalecen sobre la

contribución acc gravimétrico. a [21].

pipetas de interfaz de aire deben ser aceptados son instrumentos de precisión, pero sus limitaciones en la aplicación y

calibración. Mientras observa recomendaciones de uso correcto, en errores de volumen de entrenamiento de 2-3% (en

volumen nominal) son realizables. De lo contrario, hasta el 10% o más se puede esperar.

Los esfuerzos para perfeccionar las pipetas de interfaz aérea se vean comprometidas por hechos termodinámicas. Si se requiere la entrega

precisa de diversos líquidos o independencia de las condiciones ambientales o de manipulación desfavorables, hay una buena razón para

utilizar sistemas de desplazamiento positivo, por ejemplo, múltiples dispensadores con accidente cerebrovascular.

Los cálculos dados representan estimaciones basadas en supuestos veces idealizadas. Por lo tanto, la precisión
de los resultados calculados no se puede esperar a ser muy preciso. Sería favorable usar programas de
elementos finitos que son capaces de manejar sistemas de dos fases.

Sin embargo, los enfoques analíticos dados arrojan luz sobre fenómenos desconocidos, al permitir una
comprensión básica y simple.

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afiliaciones:

R. Feldmann se emplea en la casa BRAND GMBH + CO KG, Alemania y KH Lochner se emplea en el

Fraunhofer para la Investigación de Silicatos Insitute, sucursal Bronnbach, Wertheim, Alemania.

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La publicación final está disponible en link.springer.com, Accred Qual Assur (2016) 21: 69-82 DO I 10.1007 / S00769-015-1171-y

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