Actas de Fisiologa, 5: 79-107, 1999

Las clulas ciliadas de la cclea, un ejemplo de transduccin bidireccional

Marisa Pedemonte*, Peter M. Narins**
*

Neurofisiologa, Departamento de Fisiologa. Facultad de Medicina, Universidad de la Repblica. Montevideo, Uruguay. ** Department of Physiological Science. Life Sciences. Universidad de California, Los Angeles (UCLA). California, Estados Unidos.

Entender una meloda, reconocer las palabras, reconocer cientos de voces diferentes aunque digan o canten las mismas cosas, tener respuestas motoras reflejas frente a determinados sonidos, tener respuestas vegetativas frente a otros, emocionarse al or un poema, son algunas de las funciones que involucran al sistema auditivo en el contexto de todo el cerebro. Sin embargo, todo este proceso de adquisicin de informacin, almacenamiento, generacin de memoria y evocacin, comienza con la llegada de las ondas sonoras como una informacin que debe ser "entendida" por el sistema nervioso. Este proceso de traduccin o transduccin desde el idioma fsico de una onda sonora a las seales electrofisiolgicas procesadas por el sistema nervioso central, est realizado por las clulas ciliadas de la cclea. Estos receptores son transductores mecano-elctricos extremadamente sensibles. Como cada clula ciliada es sensible a un limitado margen de estmulos, deben combinarse miles de receptores para dar salida a un mensaje completo. Para tener los mejores resultados funcionales en este proceso de transduccin la evolucin ha desarrollado complicadas estructuras que modifican las ondas sonoras, tales como el odo externo, el odo medio y la cclea -parte del odo interno- en donde asientan las clulas receptoriales. Es necesario entonces, conocer el ambiente que hace posible el proceso de tranduccin, para lo cual haremos una pequea resea histolgica de la cclea, recordando que los receptores no trabajan aislados y la percepcin del sonido depende de la interaccin estructural y funcional entre clulas as como de la integridad del medio en el que asientan. 1. Estructura de la cclea de mamferos El caracol o cclea es un rgano del odo interno con forma de tubo arrollado en espiral, constituido por un laberinto seo tapizado de estructuras celulares que forman un laberinto membranoso (Figura 1). El eje central de la cclea, el modiolo, es un tubo seo dentro del cual corren las fibras del nervio auditivo. La espiral sea arrollada alrededor del modiolo est separada en 3 compartimientos: la escala vestibular, la escala media y la escala timpnica (Figura 2).

La escala timpnica se separa de las otras dos por la membrana basilar; la membrana de Reissner, compuesta por dos capas celulares, separa la escala media de la vestibular. Las escalas timpnica y vestibular -rellenas de perilinfa- se comunican en el vrtice de la cclea por un orificio, el helicotrema. En la base de la cclea la escala timpnica termina en la ventana redonda. Un pequeo tubo, el acueducto coclear, conecta la perilinfa con el lquido cefalorraqudeo. La escala vestibular, en la base de la cclea, se corresponde con la ventana oval en el odo medio donde se articula el estribo. Las escalas media y vestibular se continan en la base de la cclea con la porcin vestibular del odo interno. La escala media conecta con el sculo a travs del ductus reuniens y la endolinfa contenida en ella est en comunicacin con el saco endolinftico. En la escala media, limitada por la lmina reticular, la membrana de Reissner, la estra vascular, el ligamento espiral y la prominencia espiral, se encuentra el rgano de Corti que contiene, entre otras estructuras celulares, el receptor auditivo: las clulas ciliadas. 1.1. El rgano de Corti Las clulas ciliadas se ubican en el rgano de Corti que asienta sobre la membrana basilar, siguiendo la estructura en espiral a lo largo de la misma. Alberga unas 15.000 clulas ciliadas en el humano (esto vara con las especies) que se interdigitan de forma muy organizada con clulas de soporte. Estos receptores son sensibles a sonidos dentro de una gama de frecuencias entre unas decenas de Hertz (Hz) hasta unos 20 kHz en el humano joven. Los sonidos naturales integrados por muchas frecuencias se descomponen en cada una de ellas, que a su vez excitan la porcin que les corresponde de clulas ciliadas ubicadas en la membrana basilar. Debemos distinguir desde un principio dos poblaciones de clulas ciliadas, las clulas ciliadas internas (CCI) y las clulas ciliadas externas (CCE) que son funcional e histolgicamente diferentes. Las CCI forman una nica hilera, cercana al modiolo y las CCE forman tres hileras, separadas de las CCI por las clulas pilares de soporte, que dejan entre si un tnel: el tnel de Corti. Estas clulas y sus estructuras acompaantes cambian sus caractersticas segn su ubicacin en la cclea, seguramente dependiendo de las necesidades funcionales de cada porcin de la misma. El polo apical de las clulas ciliadas, que mira hacia la escala media, detecta el estmulo y realiza la transduccin sensorial. En el polo basal las clulas ciliadas hacen contactos sinpticos especializados con las fibras aferentes, que conducen la informacin hacia el sistema nervioso central, y fibras eferentes que controlan la entrada sensorial. El anlisis estructural fino de la cclea ha permitido distinguir varios tipos celulares diferentes pero aun son muy inciertos los roles funcionales de cada clula. Las clulas adyacentes a los receptores estn especializadas en el soporte mecnico y metablico. La cara endolinftica del limbo espiral tiene clulas secretorias encargadas de la formacin de la membrana tectoria, esta membrana contiene material extracelular de tipo gelatinoso.

Por su ubicacin sobre las clulas ciliadas se piensa que tiene un papel fundamental en el mecanismo de transduccin. Algunas clulas separan los compartimientos que contienen endolinfa de aquellos con perilinfa en tanto que otras participan en la formacin y mantenimiento de ambos fludos. Estas clulas de soporte presentan especializaciones de membrana, uniones intercelulares, tales como las uniones de hendidura o tipo "gap" (gap junctions), desmosomas (desmosomes), uniones adherentes (adherens junctions) y uniones estrechas (tight junctions) fueron encontradas en el rgano de Corti (Gulley & Reese, 1976; Iurato et al. 1976 a,b; Nadol et al. 1976; Nadol, 1978). Otra funcin de las clulas de soporte podra ser la de desarrollarse como nuevas clulas ciliadas sin proliferacin. Esto est sugerido por el hecho de que en reas lesionadas disminuye la densidad de las clulas de soporte mientras que el nmero de clulas ciliadas aumenta (Mahanthappa, 1994). 1.2. Mecanismos homeostticos en la cclea El odo interno posee una variedad de mecanismos micro-homeostticos que son la base de la integridad, sensibilidad y el rango dinmico del rgano de Corti para hacer posible la transduccin de las seales sonoras (Hawkins, 1973; Wagemann & Schacht, 1996). Estos mecanismos homeostticos responden a varias escalas temporales, desde milisegundos para restaurar disbalances inicos hasta minutos u horas cuando se involucran procesos tales como la transcripcin gentica y la sntesis proteica. Un ejemplo pionero es el modelo de la "batera" de Davis (Davis, 1965) en donde se demuestra cmo la estra vascular actuando como una batera mantiene un potencial contnuo (DC) en la endolinfa de la escala media que posibilita el mecanismo de transduccin por los receptores. As la endolinfa contiene una alta concentracin de potasio y un potencial positivo con respecto a la perilinfa, mantenido por las clulas marginales de la estra vascular, mediante una bomba Na+-K+ ATPasa que produce una salida neta de K+ a la escala media. El alto consumo de energa requiere de una adecuada disponibilidad de sustratos energticos -siendo la glucosa el principal- nutrientes esenciales y oxgeno, as como la posibilidad de remover los desechos metablicos y el anhdrido carbnico que se van produciendo. No debe olvidarse adems, que los contnuos procesos de transduccin generan cambios metablicos constantes que deben ser rpidamente corregidos. Todo lo antedicho justifica el alto grado de vascularizacin que posee la cclea. Sin embargo hay mucho por conocer an acerca de los mecanismos de control del flujo sanguneo coclear y ms an en el humano dado que la mayora de la investigacin es realizada en animales. Han sido descritos mecanismos de autorregulacin (Brown & Nuttall, 1994) como por ejemplo que el alto flujo de potasio hacia la escala media podra influir sobre la estra vascular. Los sonidos a cierto nivel pueden aumentar el flujo sanguneo coclear (Prazma et al. 1983) en tanto que ruidos intensos lo reducen (Thorne & Nuttall, 1987). El sistema vegetativo simptico noradrenrgico sera un potencial modulador del flujo sanguneo coclear a travs de receptores beta-adrenrgicos (Spoendlin & Lichtensteiger, 1966; Brechtelsbauer et al. 1990; Laurikainen et al. 1993).

2. Morfologa de las clulas ciliadas Las clulas ciliadas pueden agruparse en internas y externas, con marcadas diferencias como la posicin en el rgano de Corti, la ultraestructura, la implantacin de las estereocilias y la inervacin (Figura 3). Estas diferencias estn al servicio de dos acciones diferentes, conocidas hace ya dos dcadas: las CCIs y las CCEs actan como transductores mecano-elctricos del sistema auditivo mientras que las CCEs actan adems, como transductores electro-mecnicos, es decir, como clulas motoras. Las CCEs responden a cambios de potencial cambiando su longitud. La fuerza generada por ellas es capaz de alterar los delicados mecanismos cocleares incrementando la sensibilidad auditiva y la selectividad de las frecuencias. Segn Nobili et al. (1998) cada frecuencia seleccionada se resalta con un efecto mecnico equivalente a las inhibiciones laterales de las estructuras neurales; estos procesos son explicados por el interjuego de interacciones hidrodinmicas entre las diferentes particiones cocleares y el efectivo comportamiento no-lineal de estas clulas motoras. 2.1. Caractersticas ultraestructurales Tanto las CCI como las CCE tienen cilias rgidas que asemejan dedos proyectndose desde la superficie apical de la clula sensorial hacia el espacio endolinftico. Hace ya mucho tiempo que se conocen las estereocilias en clulas del rgano de Corti sugirindose que fueran responsables de la transduccin, pero esto fue confirmado directamente slo recientemente (Hudspeth & Corey, 1977; Russell et al. 1986). En la superficie apical cada clula ciliada externa tiene sus estereocilias ordenadas en hileras en forma de "U" o "W". Cada hilera contiene estereocilias de similar longitud, las hileras de esterocilias mas cortas miran hacia el modiolo y las mayores hacia la pared lateral. El largo de las estereocilias va aumentando de la base al pex del conducto coclear. Todas estas caractersticas han sido revisadas tanto en mamferos como en no mamferos (Nielsen & Slepecky, 1986). Existe material fibrilar que establece conexiones cruzadas entre las cilias de un mismo haz: algunas conectan esterocilias adyacentes de la misma hilera y tamao similar a travs de su superficie lateral (within-row) y otras conectan estereocilias de una hilera con las ms altas ubicadas detrs (across-row). Estos tipos de conexiones parecen ser la causa de que el haz de esteroacilias se mueva como un grupo cuando slo los extremos de las ms largas son inclinados. Otros puentes van desde la punta de una estereocilia corta hasta una esterocilia vecina de mayor tamao (tip-link). Estos puentes podran estar implicados en el proceso de transduccin dado que su tironeamiento podra abrir canales inicos relacionados a sus puntos de insercin (Pickles et al. 1984). Por dentro de cada estereocilia se observa un haz de filamentos de actina unidos entre si y con la membrana plasmtica. Si bien se pens que la estereocilia no se mova por si misma, recientes estudios encontraron miosina I y calmodulina que sugieren la posibilidad de una

estructura contrctil, que tendra implicancias importantes en la adaptacin de las clulas ciliadas. La adaptacin a la inclinacin contnua de las estereocilias es sensible al calcio y bloqueable por antagonistas de la calmodulina (Assad & Corey, 1992). La cara apical de las clulas ciliadas constituye la placa cuticular y est formada por una malla de filamentos de actina desordenados que contribuiran al soporte y motilidad. Aparte de todas las caractersticas antedichas compartidas por las CCEs y las CCIs, existen algunas diferencias. 2.1.1. Clulas ciliadas internas Estas clulas tienen el cuerpo globuloso, con sus estereocilias ordenadas linealmente sin hacer contacto con la superficie inferior de la membrana tectoria. La porcin basal de las CCIs hacen sinapsis directamente con las fibras aferentes que proyectan al sistema nervioso central. Las fibras nerviosas y las clulas de soporte rodean la superficie basolateral de forma que la CCI no hace contacto con la membrana basilar. Estas clulas poseen uniones estrechas (tight junctions) a nivel de la lmina reticular, con las clulas de soporte (clulas del pilar interno y falngicas internas). Su superficie apical est separada de las otras CCI, por clulas de soporte. Sin embargo, las CCIs contactan con sus vecinas en las zonas en donde el cuerpo se ensancha a nivel del ncleo. Por lo tanto cabra la posibilidad de una comunicacin directa entre ellas, pero an no ha sido encontrada. 2.1.2. Clulas ciliadas externas Estas clulas son alargadas y cilndricas con el ncleo en situacin ms basal. De menor dimetro que las internas su superficie apical contacta con las clulas de soporte mediante uniones estrechas (tight junctions) y uniones adherentes (adherens junctions). Cada CCE est envuelta en su base por una clula de Deiters que presentan una prolongacin alargada que forma parte de la lmina reticular. A diferencia de las CCIs, las CCEs tienen libres sus superficies laterales que slo contactan con el fludo circundante. Esto imposibilita la comunicacin directa entre ellas pero, no obstante, facilita su funcin contrctil. Sin embargo pueden estar acopladas a clulas de soporte a travs de uniones de hendidura (gap junctions). Actualmente hay evidencias funcionales controvertidas acerca de la existencia o no de conexiones elctricas (Oesterle & Dallos, 1989; Santos-Sacchi, 1986; Zwislocki et al. 1992). Las estereocilias de las CCEs estn ordenadas en "W" y graduadas en altura siendo ms largas y finas que las de las CCIs de la porcin de la cclea equivalente. Las estereocilias de las hileras ms alargadas estn unidas firmemente a la membrana tectoria y en su porcin basal terminan en un cono proyectado a mitad de camino de la placa cuticular que aparece como una malla ms organizada que a nivel de las CCIs. Las CCEs presentan densas bandas longitudinales asociadas con microtbulos, vesculas de membrana y mitocondrias, entre la placa cuticular y el ncleo. Encima del ncleo el citoplasma es homogneo con ribosomas, mitocondrias y retculo endoplsmico. Debajo del ncleo hay abundantes microfilamentos y microtbulos .

En la base de las clulas se observan las sinapsis aferentes y eferentes. Se piensa que las seales neurales desde el sistema eferente produce cambios que modifican las propiedades mecnicas de las CCE influyendo en la mecnica de la membrana basilar. Existen receptores de membrana para la acetilcolina y el acido gama amino butrico (GABA) en la base de las CCEs (Canlon et al. 1989; Zenner et al. 1989), sin embargo la accin del sistema eferente sobre las CCEs no es aun conocida. Las CCEs asientan en la porcin de membrana basilar no soportada por hueso, por lo tanto esta regin del rgano de Corti tiene movimientos significativos durante los estmulos vibratorios. Esto implica que las clulas de soporte deben resistir las fuerzas mecnicas producidas por estos estmulos. Esta rigidez estructural est reforzada por microfilamentos y microtbulos entre las clulas. 2.2. Distribucin de la inervacin de las clulas ciliadas Desde trabajos piorenos de Lorente de N (1937) se describen las caractersticas estructurales de la inervacin de la cclea. Los estudios anatmicos han identificado fibras aferentes y eferentes determinando el nmero y la distribucin de las terminales nerviosas en cada tipo de clula ciliada y en los distintos niveles de la cclea (Figura 4). Estos estudios han sido desarrollados en distintas especies (Rasmussen, 1940; 1953; Spoendlin, 1966; Kimura, 1975; Nadol, 1988; Eybalin, 1993). En forma caracterstica se reconoce en las sinapsis con fibras aferentes que las clulas ciliadas muestran acmulos de vesculas sinpticas. En las sinapsis eferentes la acumulacin de las vesculas sinpticas aparece en el nervio y en las clulas ciliadas aparecen las cisternas subsinpticas. Las fibras aferentes estn subdivididas en dos grupos: (a) las fibras de las clulas ganglionares Tipo I, gruesas, mielinizadas y que hacen contacto con las CCIs y (b) las fibras de las clulas ganglionares Tipo II, finas, no mielinizadas que contactan con las CCEs (Rosenbluth, 1962). El sistema eferente fue inicialmente dividido en dos subsistemas (Warr & Guinan, 1979): (a) el medial, contactando con las CCEs y (b) el lateral haciendo sinapsis sobre las fibras aferentes que contactan con las CCIs. Con estudios inmunocitoqumicos para neurotrasmisores han sido sugeridas otras subdivisiones (Eybalin, 1993). 2.2.1. Inervacin de las clulas ciliadas internas Inervacin aferente En estudios realizados en gato y cobayo se demostr que el 90%-95% de las fibras en el nervio auditivo contacta slo con las CCIs (Spoendlin, 1973; Morrison et al. 1975), correspondiendo a las clulas ganglionares Tipo I. Cada fibra termina sobre una CCI habiendo una especializacin sinptica por fibra. Cada CCI contacta con 20 diferentes fibras aferentes; pudiendo aumentar ese nmero en regiones

de frecuencias funcionalmente importante para la especie, por ejemplo en el humano y en el gato la densidad neural es mayor en la regin media de la cclea. Esto implica una gran divergencia de la informacin desde cada CCI. Estas sinapsis tienen una delgada densidad de membrana presinptica y una densa membrana postsinptica, observndose en la hendidura sinptica filamentos y material granular. Las fibras postsinpticas han sido divididas segn criterios morfolgicos as como por el nmero de sinapsis eferentes que reciben (Liberman et al. 1990). Estas caractersticas determinan diferencias fisiolgicas as como cambios en el umbral y frecuencias de descarga. Las fibras gruesas de bajo umbral y alta frecuencia de descarga espontnea se agrupan cercanas a las clulas pilares internas, las finas de alto umbral y baja frecuencia de descarga se encuentran en la cara modiolar de las CCIs. Inervacin eferente Las fibras eferentes que llegan a la regin de las CCIs son finas, transcurren por el tnel en forma espiral donde dan ramas y forman varicocidades y terminan realizando sinapsis "en passant" con las fibras aferentes radiales que provienen de las CCIs. No han sido encontradas sinapsis recprocas en las CCIs de ccleas adultas. Esto significa que una misma fibra nerviosa contenga las especializaciones sinpticas aferentes y eferentes. Sin embargo, estas sinapsis si fueron encontradas en cultivos de rganos de Corti (Sobkowicz et al. 1993). 2.2.2. Inervacin de las clulas ciliadas externas Inervacin aferente Las fibras aferentes que inervan las CCEs estn altamente subdivididas terminando cada fibra haciendo sinapsis con pequeos botones sinpticos con varias CCEs. Cada CCE a su vez, hace sinapsis con muchas fibras aferentes diferentes (Smith, 1975; Berglund & Ryugo, 1987; Dannhof & Bruns, 1993). Cada fibra est ramificada de forma tal que una sola fibra puede recibir informacin de entre 6 y 100 CCEs, usualmente de la misma hilera. La mayora de las clulas ganglionares Tipo II harn sinapsis con las CCEs de la primera hilera que son las que a su vez tienen el mayor nmero de contactos sinpticos. Las restantes clulas ganglionares Tipo II son ms ramificadas y hacen contacto con la tercera hilera de CCEs. Las especializaciones sinpticas entre estas terminales y las CCEs son diferentes a las de las CCIs; en la zona activa la CCE presenta una invaginacin que se corresponde a una evaginacin de la fibra terminal. Para salir del rgano de Corti las fibras espirales cruzan la parte baja del tnel de Corti y pasan entre las clulas pilares internas saliendo con las aferentes radiales. Inervacin eferente

Las fibras eferentes que inervan las CCEs cruzan el tnel de Corti radialmente luego de haber pasado entre las clulas pilares internas y luego lo recorren dando ramas que terminan en las CCEs (Engstrm, 1958; Spoendlin, 1968). La mayora de las fibras eferentes terminan en la primera fila de CCEs existiendo adems una graduacin de la base al pex, con el mayor nmero de terminales en la base. Si bien la mayora de las fibras eferentes hace sinapsis en la base de las CCEs, ms de un 25% de las CCEs del pex de la cclea tienen terminales sinpticas por encima del ncleo (Altschuler et al. 1984; Liberman et al. 1990). En algunas especies existen evidencias de sinapsis recprocas sobre las CCEs, es decir una sola terminacin nerviosa posee especializaciones aferentes y eferentes (Nadol, 1983). Varios son los neurotrasmisores implicados en el sistema eferente, siendo la acetilcolina el ms importante. Tambin se ha encontrado GABA -preferentemente distribuda en fibras del pex- encefalinas y dinorfinas (Thompson et al. 1986; Fex & Altschuler, 1986; Eybalin, 1993). No debemos olvidar la inervacin simptica que colabora en el mantenimiento de la homeostasis de la cclea, a la cual ya nos hemos referido. 3. Fisiologa de las Transducciones mecano-elctrica y electro-mecnica clulas ciliadas

Las clulas ciliadas en los mamferos comienzan a elaborar respuestas con una alta sensibilidad, frente a mnimos desplazamientos del extremo apical del haz de cilias, del orden de 0.3 mm (Sellick et al. 1982). Cada receptor tiene un mximo de sensibilidad para determinada direccin del estmulo. Dallos (1996) compara el desplazamiento necesario de una cilia para producir una respuesta umbral al desplazamiento de 5 cm en la punta de la torre Sears de Chicago con una altura aproximada de 500 m. Muchos son los problemas que existen para abordar el mecanismo de transduccin de las clulas ciliadas. La mayora de los trabajos en mamferos son basados en clulas cultivadas, con registros in vitro en donde, por ejemplo, el slo cambio de la temperatura altera dramticamente muchas de las conductancias inicas. Los mayores aportes cientficos acerca de la transduccin y la electrofisiologa de la membrana se han realizado en las clulas ciliadas aisladas de vertebrados no mamferos dado que es muy dificultoso acceder a las clulas ciliadas de la cclea de los mamferos por ser muy pequeas, sensibles a la privacin de flujo sanguneo y estar el odo interno includo en el hueso temporal, extremadamente duro. Hudspeth & Corey (1977) han desarrollado experimentos sobre las clulas ciliadas del odo interno de la rana toro (Rana catesbeiana). Extirpando el sculo y quitando la membrana otoltica realizaron, bajo microscopio, el registro intracelular del receptor mientras se mova el penacho ciliar con una micropipeta. Otros experimentos fueron realizados en mamferos in vivo; Dallos et al. (1982) lograron registros intracelulares de clulas ciliadas de las vueltas apicales de la cclea introduciendo el microelectrodo a travs de una ventana que abrieron en la escala media. Russell & Sellick (1978) registraron clulas ciliadas basales atravesando la membrana basilar desde la escala timpnica.

El proceso de transduccin comienza con el desplazamiento relativo de las cilias entre la lmina reticular y la membrana tectoria. Posiblemente el flujo de endolinfa en el estrecho espacio entre las dos superficies que se mueven podra colaborar en la estimulacin de las cilias que no estn unidas a la membrana tectoria. El estmulo excitatorio es la inclinacin de las estereocilias hacia el kinocilio, en caso de las ranas (Hudspeth & Corey, 1977), y hacia las estereocilias de mayor tamao en las clulas de mamferos (Russell & Richardson, 1987). Los movimientos en la direccin opuesta son inhibitorios y los perpendiculares son inefectivos (Figura 5). Las mediciones de corrientes extracelulares indican que los canales involucrados en la respuesta elctrica de la clula estn ubicados cerca del extremo distal de las estereocilias. Por lo tanto, existe la hiptesis de que cerca de la punta de las estereocilias estaran los canales inicos responsables de la transduccin cuya apertura o cierre estaran regulados por los cambios de tensin de los ligamentos descritos con anterioridad (tip-links). Hay una serie de observaciones que sustentan esta teora (Slepecky, 1996): (a) Esta polarizacin morfolgica ocurre en todas las especies de vertebrados examinadas e.g. mamferos (humanos, gatos, cobayos, chinchillas, ratas) pjaros, reptiles, ranas y peces. (b) En todos los animales mencionados anteriormente existen kinocilios en las clulas ciliadas, con la excepcin del mamfero adulto en quienes slo se encuentra el cuerpo basal como un centro organizador de los microtbulos citoplasmticos e indicando la polaridad de la clula. La transduccin no requiere entonces de la presencia de kinocilio. (c) Los relativamente pocos canales inicos envueltos en la tranduccin estn localizados cercanos al extremo de las estereocilias (Hudspeth, 1982; Jaramillo & Hudspeth, 1990; Hackney et al. 1991). (d) Slo pequeos desplazamientos de la punta de un haz alcanzan para lograr la apertura mxima de canales (Russell et al. 1986). (e) La cintica derivada de experimentos electrofisiolgicos sugiere que la fuerza aplicada a los canales transductores es trasmitida por las propiedades elsticas de las conexiones (Corey & Hudspeth, 1983). Se estima que son pocos los canales dependientes de cada estereocilia (Howard & Hudspeth, 1988) y que la oscilacin de la compuerta sera de 4 nm y el tiempo de cierre y apertura sera menor de 50 ms. Los canales de transduccin son poros acuosos no selectivos que permiten el pasaje tanto de cationes mono- como divalentes (Corey & Hudspeth, 1979). Como las cilias estn en contacto con la endolinfa con un potencial positivo y alta concentracin de potasio sera este in el responsable de conducir las corrientes hacia adentro, empujado por un gradiente de concentracin y un gradiente elctrico que es la suma del potencial negativo de reposo de la clula ms el potencial positivo endolinftico. Se estima que en ausencia de estimulacin entre un 5% y un 15% de los canales de transduccin estn abiertos (Hudspeth & Corey, 1977; Crawford & Fettiplace, 1981; Russell et al. 1986). El potencial de reposo en las CCIs in vivo es de -40 a -50 mV (Russell & Sellick, 1978; Dallos, 1985). Asumiendo que la resistencia de entrada de las clulas ciliadas in vivo es de unos 50 MW (Russell & Sellick, 1978) se calcul que el potencial receptorial producido puede ser del orden de 0.1 mV cuando una cilia se desplaza 1 nm.

Es importante destacar que todo lo hablado hasta ahora de transduccin en clulas ciliadas fueron experimentos realizados en vertebrados no mamferos. Por lo tanto la extrapolacin a las funciones de las clulas ciliadas de los mamferos debe ser cautelosa. 4. Potencial receptorial en la membrana basolateral Hasta ahora los hallazgos acerca del potencial de membrana basolateral son controvertidos y no permiten generalizaciones fciles (ver revisiones, Dallos, 1996; Kros, 1996). La estimulacin acstica y sus consecuencias mecnicas producen una seal AC (corriente alterna), es decir, la suma de variaciones sinusoidales alrededor de un valor de reposo. Las no-linealidades en algn nivel del procesamiento pueden distorsionar la composicin de las frecuencias de la seal y sumar un componente DC (corriente contnua) debido a rectificacin y asimetras. Siempre que se analice un potencial receptorial debe distinguirse entre los cambios AC, frecuencia dependientes, y los componentes DC unidireccionales. El potencial receptorial es el resultado de mltiples conductancias activas. Si bien existen diferencias de conductancias entre registros en tortugas (Crawford & Fettiplace, 1981) y en mamferos (Kros & Crawford, 1990), un denominador comn es que la influencia de la membrana basolateral, cuya resistencia y capacitancias se encuentran en paralelo, funciona como un filtro pasa-bajos (low-pass filter). En clulas ciliadas de animales no mamferos fueron encontrados canales de Ca2+ voltajedependientes y de K+ Ca2+-dependientes. En estos vertebrados rpidamente se activan corrientes de entrada de Ca2+ que inducen corrientes de salida de K+ Ca2+-dependientes que interactan produciendo las oscilaciones del potencial de membrana (Crawford & Fettiplace, 1981; Lewis & Hudspeth, 1983; Pitchford & Ashmore, 1987; Fuchs & Evans, 1988; Fuchs et al. 1988). En las CCIs las conductancias de la membrana basolateral estn dominadas por dos canales de K+ voltaje-dependientes los cuales estn activos en un rango de potencial de membrana entre -60 y -20 mV, valores que estn de acuerdo con el potencial de reposo de estas clulas. Distintas tcnicas de registro coinciden en los valores de los potenciales de reposo, siendo aproximadamente para las CCIs de -40 mV y para las CCEs de -70 mV. Ninguno de estos canales parece ser dependientes del influjo de Ca2+ (Kros & Crawford, 1990). Las CCEs tienen en sus membranas basolaterales dos tipos de canales de K+ Ca2+-dependientes (Ashmore & Meech, 1986). A bajos niveles de sonido la respuesta AC aumenta en forma proporcional al nivel de la seal no pasando lo mismo con la respuesta DC. Todas las respuestas se saturan a altos niveles de sonido, siendo esto ms evidente en el sentido de la hiperpolarizacin. La saturacin de la respuesta es mayor en valores cercanos a la frecuencia caracterstica siendo ms lineal lejos de sta (Figura 6). Puesto que el potencial receptorial para las altas frecuencias es filtrado en las CCIs ste no puede ser efectivo para estimular la liberacin del neurotrasmisor de la sinapsis. La relacin

del estmulo con la frecuencia de descarga de la fibra aferente debe ser gobernada por el potencial receptorial DC producida como respuesta no lineal de la propia CCI. En anuros, ha sido demostrado que cambios en la temperatura corporal modifican las respuestas del odo interno y, en consecuencia, las respuestas de las fibras del nervio auditivo. Han sido descritos -como efecto de modificacin de la temperatura- cambios en la transferencia de informacin en el sistema auditivo perifrico a travs de cambios en la relacin seal/ruido (Narins et al. 1997); en la precisin de la sintona y el mejor umbral de las fibras del nervio auditivo (Stiebler & Narins, 1990); en las reas de supresin por dos tonos (two tone-suppression, Benedix et al. 1994) y en la frecuencia de resonancia de las clulas ciliadas (Smotherman & Narins, 1995). 5. Las clulas ciliadas externas y su motilidad Las CCEs son capaces de responder a las vibraciones a travs de sus haces de estereocilias mecano-sensibles y de retroalimentar el sistema generando fuerzas mecnicas que mejoran tanto la sensibilidad como la selectividad de las frecuencias. Estas fuerzas mecnicas resultan de la motilidad (contraccin o expansin) de las CCEs en respuesta al sonido. Adems, la inervacin eferente que reciben sera utilizada para modular estas respuestas (Holley, 1996). La complejidad funcional del rgano de Corti -donde las clulas ciliadas son el centro transductor- est adems determinada por un poderoso control central del sistema nervioso. As, el sistema eferente cuyas fibras terminan sobre el receptor y fibras del nervio auditivo, provee una forma de accin directa modulando, a travs de acciones GABArgicas en la protuberancia, la actividad del receptor (Velluti & Pedemonte, 1986). Con esta base antomo-funcional se explican las acciones observadas a nivel perifrico, relacionadas con los cambios del comportamiento, e.g., de vigilia y sueo (Velluti et al. 1989). Se pueden distinguir dos tipos de motilidad: (a) Cambios de longitud del cuerpo de la clula de alta frecuencia que pueden seguir las frecuencias acsticas y que no son directamente dependientes del ATP u otro intermediario qumico. Sin embargo, indirectamente dependen del ATP usado por la estra vascular para mantener los gradientes qumicos y elctricos entre la endolinfa y la perilinfa. Observaciones experimentales sugieren que este mecanismo es lo suficientemente rpido y fuerte como para afinar los desplazamientos mecnicos producidos por el sonido en la membrana basilar. (b) El segundo tipo de contraccin que presentan estas clulas es mucho mayor en longitud pero con un curso temporal mucho ms lento. Esta forma de motilidad depende directamente del ATP y probablemente de otros intermediarios qumicos. Los haces de cilias podran ser capaces de generar sus propias oscilaciones intrnsecas o en otros casos se ha sugerido que en procesos de adaptacin durante la transduccin mecanoelctrica los puentes interciliares pueden arrastrar activamente a las estereocilias adyacentes.

5.1. Cambios de longitud de alta frecuencia en las clulas ciliadas externas Es realmente impresionante la capacidad de estas clulas de generar cambios de longitud a muy altas frecuencias. Este fenmeno fue observado primeramente con clulas estimuladas con electrodos extracelulares ubicados en los extremos del eje mayor de la clula (Brownell et al. 1985; Kachar et al. 1986). Otras mediciones fueron realizadas estimulando elctricamente con electrodos de parche (patch) y registrando los cambios de longitud con un fotodiodo (Ashmore, 1987; Santos-Sacchi & Dilger, 1988). Las CCEs de los cobayos se acortan o se alargan aproximadamente un 5% de su longitud cuando su potencial de membrana es despolarizado o hiperpolarizado, respectivamente. La latencia es menor de 100 ms y las contracciones pueden seguir frecuencias de ms de 10 kHz; cuando la frecuencia es mayor de 100 Hz la magnitud de los cambios de longitud disminuye. Por la rpida evolucin temporal de estos movimientos, estos cambios de longitud no pueden ser mediados por el pasaje de corrientes inicas sino que deben ser producidos directamente por los cambios de voltaje de la membrana plasmtica (Figura 7). Existen evidencias que apoyan la idea de que los canales inicos no estn involucrados con estos movimientos rpidos, por ejemplo, la mayora pueden ser bloqueados por aplicacin de cadmio, bario, tetraetilamonio en el medio extracelular o poniendo cesio a travs del electrodo de parche, y estos tratamientos no inhiben la motilidad (Ashmore, 1987; Santos-Sacchi & Dilger, 1988; Dallos et al. 1991). Las CCEs estn casi completamente elongadas a -70 mV de potencial de membrana, el potencial de reposo in vivo, pero el acortamiento es ms lineal en la direccin de despolarizacin cercana a los +20 mV (Santos-Sacchi, 1989). La relacin entre potencial de membrana y longitud celular tambin fue estudiada por la tcnica de microcmara (microchamber) que consiste en que la punta de una micropipeta puede sellarse alrededor de cualquier punto de la longitud de la CCE y esto permite estudiar dos porciones de la misma clula en forma independiente (Dallos et al. 1991; Evans et al. 1991). Con esta tcnica se mostr que la sensibilidad de la respuesta mecnica aumenta cuando la clula es despolarizada. As, una clula tiene menos sensibilidad al campo elctrico externo (5 nm/mV) cuando su potencial de membrana es -50 mV que cuando est despolarizada a +17 mV (25 nm/mV). Este comportamiento no lineal podra introducir cambios significativos en la funcionalidad de la cclea (Evans et al. 1991). Con esta tcnica se pudo reproducir lo que acontece in vivo, en donde la superficie apical est baada en endolinfa rica en potasio y la basal en perilinfa rica en sodio. Tambin permiti, a una misma clula, hiperpolarizar un extremo mientras se despolarizaba el otro. De esta forma se observ que las unidades motoras funcionaban como una serie de anillos que podan ser activados independientemente a lo largo del eje celular mayor. Estos experimentos sugieren que el sensor para la transduccin electromecnica debe estar ligado a la membrana plasmtica, probablemente, para ser eficiente, dentro de la bicapa lipdica. La estructura encontrada en la pared lateral de las CCEs est constituda por tres capas: (a) una cisterna lateral formada por capas ordenadas en lnea en la superficie de la membrana plasmtica; (b) el citoesqueleto proteico con propiedades elsticas y (c) la membrana plasmtica lateral (Figura 8).

Se postulan elementos motores que deberan estar acoplados a los sensores de cambio de voltaje de membrana. El ltimo modelo planteado son motores moleculares dentro de la membrana plasmtica que cambian su configuracin espacial en respuesta a un cambio de potencial de membrana (Kalinec & Kachar, 1995) Clculos basados en la energa disponible en el sistema sugieren que las CCEs pueden producir suficiente fuerza para desplazar a la membrana basilar in vivo (Ashmore, 1992; Iwasa & Chadwick, 1992). Actualmente, las principales investigaciones estn volcadas en caracterizar al amplificador coclear en su anatoma y funcin de mejorar la resolucin espectral del sistema auditivo. 5.2. Motilidad somtica lenta en las clulas ciliadas externas Esta motilidad es mucho ms difcil de caracterizar. Datos experimentales sugieren que la respuesta no depende del calcio dado que no se observan inhibiciones luego de remover el calcio extracelular (Zenner et al. 1985; Dulon et al. 1988). A pesar de las teoras que decan que las bandas longitudinales asociadas con microtbulos, vesculas de membrana y mitocondrias, entre la placa cuticular y el ncleo, podra ser responsable del lento acortamiento de las CCEs, esta hiptesis fue descartada porque esta estructura no se encuentra en todas las clulas que tienen motilidad (Carlisle et al. 1988; Slepecky, 1989). La motilidad lenta somtica podra tener efectos sobre la geometra del rgano de Corti. Podra funcionar modulando la sensibilidad de las CCIs: frente a sonidos de baja intensidad las CCEs acercaran -mediante estas contracciones lentas- la membrana tectoria a la membrana basilar, aumentando la sensibilidad de las CCIs. Lo opuesto ocurrira en respuesta a sonidos de alto nivel. Luego de traumas reversibles por sonido, fue observada la reduccin en la distancia entre la membrana basilar y la lmina reticular (Harding et al. 1992). Si bien fueron muchos los adelantos en estos ltimos aos, aun son ms las preguntas que las respuestas acerca del complejo mecanismo que interrelaciona los estmulos sonoros, los cambios de potencial y la actividad motora de las CCEs; para progresar en el conocimiento se requerir de estudios multidisciplinarios como la biologa molecular y la fisiologa in vivo. 5.3. Las emisiones otoacsticas Desde hace dos dcadas es conocido que pueden ser detectados sonidos de baja intensidad producidos por el odo durante y despus de un estmulo sonoro (Kemp, 1978). Este sonido, llamado Eco de Kemp, es ms que una simple reflexin pasiva del sonido en el canal auditivo, la membrana timpnica y la cavidad area del odo medio, siendo el resultado de una respuesta activa de la cclea que involucra un aporte adicional de energa que se suma a la energa proveniente del sonido estimulante. Adems de la secuencia normal de conversin de energa sonora a movimiento debemos considerar entonces esta secuencia revertida, en donde configuraciones de movimientos creados en la estructura intracoclear causan desplazamientos de la cadena de huesecillos y la membrana timpnica, que son registrados en el conducto auditivo externo, como emisiones de energa acstica

provenientes de la cclea a las que globalmente se denominan emisiones otoacsticas, que se observan tanto en forma espontnea (Dijk et al. 1996) como provocada. Si bien el origen de estas emisiones es an desconocido, actualmente se tiende a piensar que las clulas ciliadas externas, como elementos mecnicos activos y con una poderosa inervacin eferente que contribuye a la regulacin de la sensibilidad y la seleccin de las frecuencias en la cclea, podran ser las responsables de la generacin de dichas emisiones (Ryan & Dallos, 1975, Dallos & Harris, 1978). Referencias Altschuler, R.A., Parakkal, M.H., Rubio, J.A., Hoffman, D.W., Fex, J. (1984) Enkephalin-like immunoreactivity in the guinea pig organ of Corti: ultrastructural and lesion studies. Hear Res. 16: 17-31. Ashmore, J.F. (1987) A fast motile response in guinea pig outer hair cells: the cellular basis of the cochlear amplifier. J Physiol. 388: 323-347. Ashmore, J.F. (1992) Mammalian hearing and the cellular mechanisms of the cochlear amplifier. En: Sensory Transduction. Corey DP, Roper SD. (Eds) New York, Rockefeller University Press. pp. 396-412. Ashmore, J.F., Meech, R.W. (1986) Ionic basis of the resting potential in outer hair cells isolated from the guinea pig cochlea. Nature 322: 368-371. Assad, J.A., Corey, D. P. (1992) An active motor mediates adaptation by vertebrates hair cells. J Neurosci. 12: 3291-3309. Benedix, J.H. Jr., Pedemonte, M., Velluti, R.A., Narins, P.M. (1994) Temperature dependence of two-tone suppression in the auditory nerve of the frog. J Acoust Soc Am. 96: 2738-2745. Berglund, A.M., Ryugo, D.K. (1987) Hair cell innervation by spiral ganglion neurones in the mouse. J Comp Neurol. 255: 560-571. Brechtelsbauer, P.B., Prazma, J., Garrett, C.G., Carrasco, V.N., Pillsbury, H.C. (1990) Catecholaminergic innervation of the inner ear. Otolaryngol Head Neck Surg. 103: 566-574. Brown, J.N., Nuttall, A.L. (1994) Autoregulation of cochlear blood flow in the guinea pig. Am J Physiol. 266: 458-467. Brownell, W.E., Bader, C.R., Bertrand, D., de Ribaupierre, Y. (1985) Evoked mechanical responses of isolated cochlear hair cells. Science 227: 194-196.

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