Guía de Laboratorio

Biología Celular e Histología CB102, 2020

Taller: Reconocimiento de tejidos. Epitelios

Objetivos

 Aprender a reconocer distintos tipos de tejidos epiteliales

Introducción
En los animales pluricelulares superiores, podemos observar cómo las células se organizan
en tejidos que conforman órganos. Al conjunto de órganos destinados a una función se le denomina
sistema.La microscopía óptica nos permite visualizar la estructura celular de los órganos y
reconocer sus diferentes tejidos. En este trabajo práctico, reconoceremos la estructura de dos
órganos: intestino y riñón.

Para poder realizar la observación de tejidos animales a nivel microscópico, estos deben ser
tratados de forma especial para mantener sus características morfológicas y permitir su
visualización. A este tipo de espécimen se le conoce como corte histológico.El proceso posee las
siguientes etapas:

1. Extracción del tejido deseado.

2. Fijación del tejido.
3. Inclusión del tejido.
4. Corte del tejido.
5. Montaje y tinción.

2. Fijación del Tejido.

Fijar un tejido permite preservar sus características morfológicas y moleculares lo más

parecidas posibles a su estado vivo. Este proceso es de suma importancia para evitar la
descomposición de las estructuras que queremos estudiar, entregando además una cierta firmeza a
estas, lo que favorece la preparación del corte histológico. Para esto se utiliza una serie de
compuestos químicos. Uno de los fijadores más utilizados es el formaldehído al 10% en una
solución de buffer fosfato salino. El protocolo es muy sencillo; solo hay que sumergir el tejido en
esta solución por un periodo de tiempo, determinado por su tamaño (volumen).

3. Inclusión.

Este proceso otorga firmeza al tejido para que este se pueda cortar en laminas muy
delgadas, apropiadas para ser observadas en el microscopio.Las sustancias más utilizadas para
llevar a cabo este proceso son la gelatina y la parafina.
La inclusión se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión dentro de
la célula, y por ende dentro del tejido. Por lo general, se coloca la muestra de tejido en un recipiente
y se le agrega la parafina fundida a 60º C, colocando la muestra en una estufa entre 30 y 360
minutos, manteniendo la temperatura a 60º C. Debido al calor, el xilol o el benzol se evaporan y los
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espacios anteriormente ocupados por ellos son ahora ocupados por la parafina. Una vez finalizado
el tiempo de inclusión, se coloca la pieza con un poco de parafina fundida en un molde de papel o
metal de forma rectangular y se deja solidificar a temperatura ambiente, formándose un bloque
sólido de parafina con el trozo de tejido incluido, a este bloque se le denomina taco.

4. Corte.

El tejido ahora incluido en parafina (taco) se puede cortar en secciones lo suficientemente

delgadas como para permitir el paso de la luz. La mayor parte de los preparados para microscopia
óptica tienen un grosor entre 3 a 10 micrómetros. Para estos cortes se utiliza un aparato llamado
micrótomo.
El micrótomo, en palabras sencillas, es como un cortador de embutidos de alta tecnología,
donde el embutido en este caso es el taco con la muestra de tejido.

El soporte del taco sube y baja, de forma suave enfrentando el taco con la

ncluido en parafina sólida (taco) y colocado en el soporte para su corte.

Manivela giratoria manual, al rotarla siempre en la misma dirección genera el movimiento ascendente y

Cuchilla y sostenedor de cortes.

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Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019). Atlas de histología vegetal y animal. Técnicas histológicas.
Recuperado 26 junio 2020 de: http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-introduccion.php

5. Montaje y Tinción.

Una vez que se obtienen los cortes, es necesario ponerlos en un soporte firme (portaobjeto)
que facilite su manipulación.Además, dada su naturaleza translucida,los cortes deben ser teñidos; de
lo contrario, la luz del microscopio los atraviesa, lo que no permite visualizar sus estructuras.
Los cortes se colocan sobre portaobjetos previamente tratados con una pequeña cantidad de
albúmina, la cual actúa como adhesivo. En la actualidad existen pegamentos de origen sintético
capaces de generar mucha más adhesión que la albúmina.
La parafina se elimina del corte haciendo uso de solventes orgánicos como el Xilol.A
continuación, la muestra debe ser rehidratada, haciéndola pasar por una serie de graduaciones
decrecientes de alcohol etílico hasta llegar a una solución 100% de agua.
Ya rehidratado el tejido y montado sobre el portaobjeto, se debe teñir. Los colorantes más
utilizados son la hematoxilinay la eosina. Una vez teñido, se deshidrata nuevamente, para fijar de
modo permanente la tinción.Finalmente se usa un cubreobjetos con un medio adecuado para el
montaje (por ejemplo, una gota de Bálsamo de Canadá o similar).

Los colorantes pueden agruparse en 3 clases:

 Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula.

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 Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz

extracelular.
 Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales con
ellos.

Observación del corte histológico de intestino.

El intestino delgado es parte del aparato digestivo, en donde continúa la digestión mediante
enzimas procedentes de su mucosa y del páncreas. Su principal función es la digestión y absorción
de monosacáridos, aminoácidos, ácidos grasos y monoglicéridos. La absorción de los nutrientes se
ve favorecida por formaciones que aumentan la superficie total de la mucosa. Estas son llamadas
vellosidades intestinales: corresponden a pliegues rodeados de epitelio que en el centro están
formadas por tejido conectivo que contiene una red de capilares. Aumentan en 8 veces el área de la
mucosa.

Desde el lumen del intestino encontramos:

El epitelio que recubre las vellosidades es un epitelio con borde de cepillo (microvellosidades), lo
que aumenta la superficie de la mucosa 30 veces más.
La lámina propia, que es el tejido conjuntivo que nutre al epitelio.
La muscular de la mucosa, que es una delgada capa de músculo liso.
La submucosa, que es un tejido conectivo.
La capa muscular, que posee las dos láminas musculares características y es responsable del
peristaltismo. La capa muscular circular interna y la capa muscular longitudinal externa.
La serosa consiste en un epitelio plano que recubre toda la parte externa del tejido.

Corte transversal de intestino de Ratón

Vellosidad
intestinal

Observación del corte histológico de riñón.

Los riñones son órganos pares, de forma de un guisante.La porción más externa de cada
riñón se denomina corteza, que a simple vista se veLumen
más rojiza que la porción más interna denomina
médula.

El riñón está compuesto por nefrones, su unidad estructural y funcional. Se calculan dos
millones de nefrones en cada riñón. El nefrón presenta varios segmentos morfológicamente
distintos, que poseen una estructura característica y una posición definida en la corteza o en la
médula. Estos segmentos son: glomérulo, túbulo contorneado proximal, asa de Henle (porción
gruesa descendente, porción delgada y porción gruesa ascendente) y túbulo contorneado distal.
Cada nefrón se continúa con un túbulo colector, que se une a un conducto colector.Los túbulos
uriníferos son la unión de un nefrón con su túbulo colector y su conducto colector.
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La corteza renal contiene los glomérulos, los túbulos contorneados proximales y distales y
una parte de los túbulos colectores, así como las porciones gruesas de las asas de Henle. Las
porciones delgadas de las asas de Henle y la mayor parte de los conductos colectores se encuentran
en la médula.

Porta Objeto
de riñón de ratón.
Corte histológico

C = Corteza
T Cubre Objeto M = Medula
T = Túbulos
G = Glomérulo
G

 En la zona de la corteza renal se encuentran los glomérulos, mientras que en la medula, solo
encontraremos túbulos colectores y parte del asa de Henle.

Reconocimiento de tejidos

Nombre Fecha

Espacio a cubrir por el(la) profesor(a)

Puntaje esperado Puntaje obtenido Nota final
100

Para contestar esta ficha, deberá descargar además el archivo PDF que acompaña a esta guía, y
contestar las preguntas según las fotografías ahí señaladas.

1.En la figura 1 observamos un corte de riñón. ¿Cómo se llaman las estructuras que se indican en
la figura nº1, con las letras A y B? 10p

A Zona de la corteza
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B Zona medular

2. ¿Qué zona del riñon es la que se indica con la letra “A” en la figura nº2? ¿Qué estructura se
señala con la letra B? 10p

A corteza
B glomerulo

3. En la figura nº 3, las dos estructuras encerradas en un círculo posiblemente corresponden a

túbulos contorneados proximales, formados por un tejido epitelial. Según lo visto en clase, ¿qué
tipo de epitelio cree que es (cúbico, cilíndrico, o plano)? 10p.

Respuesta: Epitelio cubico simple

4. En la figura nº 4, podemos ver un corte transversal de intestino delgado (íleon). ¿Qué tipo de
estructura y/o tejidos son los indicados con las letras? 10p

A Tejido conectivo
B Musculo liso

5. En la figura nº 5, ¿cómo se llama el tipo de célula indicada con la flecha? 10p.

Respuesta: célula caliciforme

6. Observe el recuadro en la figura nº 5. ¿A qué tipo de epitelio corresponde, y por qué?10p.

Respuesta: Es el epitelio cilíndrico simple porque se puede ver una capa de células alargadas y
juntas

7. En este taller vimos dos epitelios con funciones de filtración (riñón) y de absorción (intestino).
Enumere dos funciones más de los epitelios y señale en qué tejido/órgano se encuentran.20p

Secreción: producen sustancias como por ejemplo enzimas digestivas, sudor, aceites, entre otros;
Se encuentran en la epidermis y glándulas salivales Protección: Su función es proteger y
recubrir la parte externa del cuerpo de factores como daño físico luz solar y microorganismos,
están ubicados en el tejido epitelial.

8.¿Por qué es importante teñir los tejidos cuando estudiamos muestras histológicas? 20p
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Es importante teñir los tejidos cuando estudiamos muestras histológicas ya que al teñir los tejidos
se puede evidenciar por contraste las estructuras y zonas de la muestra, gracias a esto podemos
observar mejor las características que se presentan.