Determinacién de la presencia del Virus de la Tristeza de los Citricos (CIV) y Viroides en Citricos del Departamento de Guatemala José Daniel De Paz Gl / pal 8049 @uvg edu, Julio David de Ci Villatro!/ del 8068 @uvg.u gt, Gonaile! mphereraG@uvg ed gt sall828)@uvgcdug, Martha Patricia Herrera " Deparment de Binglnca Andrée Salazar Mérida! / hiologia, Facultad de Ciencias y Humana, Universidad del Valle de Guatemala * Laboratorio de Proteciin Veqsta, Centr de Estudos Agrcoasy Aimentarios, Universidad del Valle de Guatemala, AESINEN Los cutvos de cities pueden verse afeciados lanlo por infecciones viroles como subvirales, causondo una dlsminucién de rendimiento, poo tanto, levando a pércidas econémicas. El estudio fue realizado con el propésito de evoluorla presencia del Virus de Trsieza de ls Circos (CT¥) y vtcides en ctricos dant del depertamento de Guotemal, en los municipios de Ciudod de Guotemalo, Maco, Santa Cotarina Pinu y San Juan Sacotepéquer. Paro ello, se selecconaron hojs inloméicas y osilomdtcas, alas cucles se es aplicé lo prucbo de RT-PCR pora Ia deteccién de viridesuilzando marcadores generles, mientras que en el caso del CI, su detecién se realzé mediante el ensayo de ELISA. De exo se obtvo ve ringuna delos mess presets infoccén por roides, sn embargo laprucb so vio afeada debido a la degradacién que preseniaba el ARN onolado. Por ofro lado, se delerminé lo presencia de CTV en los ‘muestossntomalicos peleneienes alos municipios de Son Juan Sacatepéqver, Ciudad de Guatemala y Maco oi como ora las muestasasintomticas dela Ciudad de Guatemala 1 Maco, indicndo lo presencia de CTV en ies de ls cvatro sitios muesteados. paride lo obinido, se deben realizar prusbas adicionales como secuencicién, pare estobloca la cepa del vis. Adicionalmen, se recomienda evoluor una posible infeccién bacerona yo fingica que puedo dar poso 4 la siniomatolegia observado. Finalmente, pare evitar la propagacién del vu, se recomiendo el uso de hongos entomopatégenos antagonisias del vector transmisor. PAUBEUS CAVE Vices, Virus de la riseza de los cicos (CTV), ELISA, RT-PCR. Determination of the presence of Citrus Tristeza Virus (CTV) and Viroids in Citrus from the Department of Guatemala BRAC The cituscuivations con be afected because o vil ‘and subvial infections, causing 0 decreas ins performance therefore leoding to economic losses. The auraose of ofthis study was fo eveluate the presence of Cis Tistzo Virus (CTY) and cific voids inside the Deparment of Guatemala, in the muncipaliies of Guotemala City, Maco, Santa Coline Pina cand San Jon Sacatepéquer. We seleced symptomatic ond asymptomatic leaves of citrus plants fo which RT-PCR wos performed for the deletion of vroids using general merkers, rile in the case of CTY, its detection was performed by an ISA test. None of he somples presented virids, nevertheless the test wos affected becouse of the degradation represeniad inthe RNA analyzed. On the other hand, it wos confirmed the presence of CTV in he symplomaic samples belonging to he ‘municipalities of San luan Socatepéquez, Guatemala Ciy and Mixco, os wel as for he osymatomaic samples of Guotemala City ond Misco, indicating he presence of CTV in tree of four samgled sis. is recommended fo cary out addtional isis, lke sequenciotion, to establish the virus shain, Futhermore it 5 recommended o evaluate « possible baceral and/or {ng nfecion thot con lead to the observed symptomatology. Final, to avoid the virus propagation, lis recommended the use of antagonist entomopathogenic fungi EY WORDS Vioids, Cus Trstera Virus (CTV), ELISA, RT-PCR, 4 de I Urvesided el Vale do Guatenote (2672) 129Introduccién Los citicos son uno de los productos ms comorcilzados en Guatemala; estos se exportan principalmente o Holanda, Inglaterra y Estados Unidos, enerando exporaciones aruales de US$5,729,745 (Agexport, 2021], y creando alrededor do 177,254 emleos en iodo el pois. Sin emborgo, uno de los mayores problemas para la exportacin de citicos son las enfermedades que estos pueden llegar o fener, ya seo por bocteras, hongos, plagaso virus que afecten la colidad a fruto ye rndimienio de produccibn Los planiasafeciados por alguna de estas enfermedades pueden disminuir lo produccién hasta un 35% y los érboles pueden morir en vot afos FAO, 2073) ‘Algunas de lo enfermedades més conocidas que afecon a las plantaciones de citicos son, el virus de lo irstezo de los citicos (CTV porsussilas en inglés para Cir Tristeza Vin Yl wrides. En Guotemola, el CTV fue deteciado en 2003, y he confinuodo su propagacién (Cucul, 2012; Lin, et ol, 2015). EICTV es consderado une de los viess més impoconte y devasiadoro pora este tipo de cultvo a escala mundial Ese se puede ironsmitr de manera seripersstele por algunas especies de éfidos,principalmen'e Toxopteo ciicida. Este vitus ofecia 0 especies de naranjes, loronjas y limones (Choporto eta. 2008). Los principles sintomas que presenia son, decaimient, defliacién, detencién del desorollay en muchos casos muerte (Minsrio de Medio Ambiene y Medio Rurol y Morino, 2015} Por otro lado, los viroides, son eniidades subcelulores de menor comaleidad genética y esructual que son conocidos por representar una forma externa de porositsmo y otacan principolmente o los vegetoles (De Fitopatologia, SE. 2016). Se conoce que los viroides son transmifidos por diseminacién de uno plana o ota, o trovés de propagacién vegetative, contaminacién mecénico, polen o semillas (Gergerich y Doli, 2006}. Estos cousan serios problemas tn las cosechos, preseniando siniomas como la reduccién de fruto yhojas, reduccién del crecimiento del érbol y muerte (Gorzolez, 1995) El propésito de este esudio fue determinar lo presencia del Virus de lo Tristeza de los Citicos (CTV y de viroides en plantas de ciicos Noranja, Mendarina y Limén) en disinios ‘municipios del Departamento de Guotemala Materiales y Métodos Recoleccidn de muestra Se real la recolecci6n de hojos sintométicas de limén (Cit xlimon), norana (Citrus x sinensis y mondarino (Citus reficulata} en diferentes lcaleaciones dentro del departamenio 130 Revista 44s Lo Usivrséad dal Ylle de Ssatonele (2022) de Guotema; especticomente en lo Ciudad de Guoterala, Santa Catarina Pinula, San Juan Sacalepéquer y Mixco. |uago, se preporé en iubos Fppendod un folal de 1S muesios 2 trabajar, en las cuales se incorporaroa las hojas coletados en los puntos de muesiteo de cada depariomento. En total, ‘8 oblvieron cinco muesrs para Kaboja del muriciio de Sania Caiarina Pinulay cinco para el municipio San Juan Sacotepéquer; pra ambos se prepors tres tubos con muesiros sinfomticos,y dos con asifométicns Ene coso del municpio de Mixco, se preporaron tres musstras, dos de ellos sinlométicos, y une osintomdtice. Paro la Ciuded de Guotemal, se prepararon dos muesiras de trabajo, ura sinfomdtico y aoa osiiomdtco. Adicionalmente se incorporé 2 los pruebas la muestr cont, posiva pore wrides, lo cual se obtuvo del invemnadero de la Universidad Del Valle de Guatemala (Campus Central Se eal el registro otogetico a coda muestra, se regisraron los sintomas, y se osigné un cédigo acorde al nimero de muestra y sifio de muesreo: Ciudad de Guotemalo (Ci, Sania Catarine Pinula (C5), San Juan Secoiepéquer (5!) y Mixco [Ma]. También se asigné un cédigo acorde al tso de ciico muestreado:limén (, naranja(N}, mandorina (M). Un ejemplo represenativo de los mismas se muestra en la figura 1 Deteccién de CTV mediante el ensayo de ELISA Se realizé lo detecci6n del CTV en las muestras por medio del ensayo por inmunoabsorcién ligado o enrimas (ELISA) Se kabaié acorde ol proocolo esiblecido por Agdia (2021) para la deteccién serolégica por el ki ELISA Reagent Set for irs iristezo virus. Se reali lo lectura de la placa pasado Feo, Mot eds tia oo Sp12 horas de incubocin en oscuridad, obteniendo en total dos lecuras de densidad éplic, Para evalua os resullados, se consideré como positive para el virus, sila leciua de densidad éptica de la muesira era mayor que el doble dela media del control sano. Extraccién de ARN Lo exraccién de ARN para las muesras oberidos fue reazada ‘omando en consideracon el protocol establecido por Local ¥ coloboradores (2003) con modificaciones del Laboratorio de Proeccién Vegetal [LPY) de la Universidad del Valle de Guotemala (Campus Ceriral Para iodo el proceso, las ceninflugaciones fueron realizedas a 13,000 rpm a tiempo ‘oriodo. Las modicacions fueron ls siguientes: las muesas fueron incubodas en fro durente 20 minutos, para ego maceror el igdo vegetal. Durante el proceso se adicionaron 200 ul de fenol y 200 yl de cloroformo:olcohalisoomiico (24:1), con cenfugacin de 8 minuos. El precipitodo final obienido se secé al aire por 30 minuos, y fue resuspendido en 25 ul de agua ubropura. Se evalué el estado del material genéico extroido medianie geles de inregridod, de los cles, se esperaba visualizr las subunidades rbosomales 18s y 28s del ARN. Deteccin de virodes por REPCR de transcripcionreversa Se reali lo detccion de vrides en os muesossntométicos medianie el ensayo de RT-PCR convencional lo ranscripciba reverso se fue realizado acorde al pro‘ocolo indicado por Promego (2018) pora el kit GoScrot™ Reverse Transcription System, Pora lo pruebo de PCR, se preparé lo mercla de reacci6n uizando la ensima GoTaq® DNA Polymerase de Promega” en la siguiente reaccién: Buffer Sx, MgCl, 25 mM, dNTPs 2.5 mM, primers forward y reverse 5 uM, Toq polimerasa 5 Ufuly ejustando el volumen final 25 ul con ‘agua lore de nudeasas. Se emp el uso de primes goneraes, pare viroides. Tras preparar la mezcla de reaccién se cargé el ADNc objenido de la reoccién de RTLPCR. Se configuré 1317-132) ps del og .1094/PO8.2008 87.11.1317 Misti de Medio Arties y Maio Rly Warn 2018] Potgenos de ono dese nEsaraEspare: MAPA Moreno, P, Anis, Albiock Mo MR, Gro J et, 208] Cis ‘tea vino pathogen hat chorged the cows of he cts idusty Moleculer Pls! Patbology 9 (2, 251-268, dos10.1111/, 1364 3703 200700485 Crgantocdn de los Navons Unidos pare Amani yo Agricul. [FAO) 2013} Guatnale pepo plan corva lo enfarmedod de cicos Agronoticios Recuperade. ae- hips://www 09, 0rg/in aSenvoyronctcoyeale/tS 12458) Fedil?sf0, CA, Din Dope, Warne. Colac, E, Bacerau, LA, ‘Garcon, C. [2008] Ecorse de dds ruceces en gle de ageroraAlaiereycrocarmctn slectolrsice de ONA ples [Spone: Uierdod ao Cérdoba Felner, M., redgar, 2021) Asesirg RNA Quoi, TechNote Fads Unie: themo Fhe Scant Fremege 2018) GaSe Rowse Tonecipton Stem Techical Marl Reciperde de: i movie rrag com eouce roca hc ‘ronvol01/gprrstronasansrson pe. protocall SENASICA 2019), Pugin Col dee Cinco Tort cid ido SenicisNecinald Sarde, bocided y Cao Aayolmersara, Mio: Dracién Gowelde Senda Vege. ReyenadsVelence Ferien Floronto. 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