UNIVERSIDAD ESPÍRITU SANTO

FACULTAD Dr. ENRIQUE ORTEGA MOREIRA

CARRERA DE MEDICINA

NONBRES: Danna Triviño Pinargote

PARALELO: 31

PERIODO ORDINARIO II 2023.

BIOLOGÍA CELULAR LABORATORIO.

PRACTICA N°2

TEMA: MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen y permite la observación de

mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio más simple consistía en lentes

biconvexos y esencialmente ampliaba la imagen. Para observar microorganismos se requiere

de un microscopio compuesto, donde tiene lentes entre el ojo y el objeto. El poder de

resolución del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos

deben estar como mínimo a esa distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la

retina, para captar la información.

La resolución depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espécimen,

la calidad de la fijación y la intensidad de la coloración. Teóricamente la máxima resolución

que se puede alcanzar es de 0,2 um dada por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual

pasa por un filtro (muy sensible por el ojo humano) y con objetos condensadores adecuados. El

ocular aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolución.

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

Fig. El poder de resolución de los instrumentos nos permite detectar objetos cada vez más

pequeños
 SISTEMA ÓPTICO

El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto

de lentes que lo componen. Está formado por lo siguiente:

Oculares: Los oculares están constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un

tubo corto. Los oculares generalmente más utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se

utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos. La potencia del ocular multiplicada por

la potencia objetiva igual a la ampliación total (es decir 10X objetivo 10X del ocular X = 100X.

El espécimen se ha agrandado 100 veces).

Objetivos: Los objetivos producen aumento de las imágenes de muestras y, por tanto, se hallan

cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos

tipos: objetivos secos y objetivos de inmersión.

a.- Objetivos secos: Se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la

preparación. En la cara externa llevan una serie de índices que indican el aumento que

producen, la abertura numérica y otros datos. Así por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos:

plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromático, su aumento 40 y su

abertura numérica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 nm. El número de

objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los

objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 4X(rojo), 1OX(amarillo) y 40X(azul).

b.- Objetivo de inmersión: El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema

de lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de

cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el

aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 1OOX y se distingue por uno o dos

círculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior.

Tabla 1.-Códigos de color en los objetivos microscópicos. Modificado de Davison M, Abramowitz

M. Optical Microscopy.

Condensador: el condensador está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es

concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación, se halla debajo de la platina y

puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que determina su

movimiento ascendente o descendente.

Diafragma: generalmente, el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su

abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a través del condensador.

Foco/Fuente luminosa: dirige los rayos luminosos hacia el condensador

SISTEMA MECÁNICO
Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

Platina: Lugar donde se deposita la preparación.

Carro: Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación con

movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a izquierda.

Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular.

Revólver: Contiene el sistema de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.

Tornillo macrométrico: Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio,

deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten

el enfoque rápido de la preparación.

Tornillo micrométrico: Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el

tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un

tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y

puede medir el espesor de los objetos.

Pinzas: Sirven de sujeción de la preparación sobre la platina.

TRAYECTORIA DEL RAYO DE LUZ A TRAVÉS DEL MICROSCOPIO

La imagen en un microscopio se forma por la transmisió n de los rayos provenientes de una fuente

luminosa a través del objeto. Los rayos luminosos atraviesan el diafragma, que a manera de iris,

delimita el diá metro del haz lumínico que penetra por el condensador. Este ú ltimo, está formado por

un sistema de lentes convergentes que concentra y proyecta el haz lumínico sobre el objeto a

examinar, a través de la abertura de la platina. El objetivo recoge la luz que atravesó el objeto

examinado y proyecta una imagen real, invertida y aumentada que se forma dentro del tubo y que es
recogida por el ocular que es la segunda lente, la cual forma una imagen virtual, invertida y aumentada

del objeto examinado.

Figura 1.-Esquema que muestra un objeto (1) que es atravesado por un haz de rayos luminosos

(2) los cuales son captados por el objetivo (3). Al formarse el cono de luz proveniente del objeto

se determina un ángulo, también llamado de apertura, donde a representa la mitad del

mismo. Tomado de Kapitza H G. Microscopy from the very begining.

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

Poder separador: También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad del

microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden

verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es

menor a una décima de milímetro. En el microscopio óptico, el poder separador máximo

conseguido es de 0,2 décimas de micra, y en el microscopio electrónico, el poder separador

llega hasta 10 ángstrom.

Poder de definición: Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus

contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las

lentes utilizadas.

Aumento del microscopio: En términos generales se define como la relación entre el diámetro

aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto, o sea: Esto quiere decir que si el

microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces

mayor que el tamaño real del objeto. Para calcular el aumento de un microscopio, basta

multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si estamos

utilizando un ocular de 10X y un objetivo de 45X, el aumento a que estamos viendo la

preparación será: 1OX x 45X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está

ampliada 450 veces.

Campo del microscopio: Se denomina "campo del microscopio" al círculo visible que se observa

a través del microscopio. También podemos definirlo como la porción del plano visible

observado a través del microscopio. Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere

decir que el campo es inversamente proporcional al aumento del microscopio.

OBJETIVOS. -

- Conocer e identificar las partes de un microscopio y sus funciones.

- Adquirir la habilidad en la utilización eficiente del microscopio.

- Adquirir el conocimiento técnico para el manejo correcto del microscopio

- Comprender la utilidad que tiene el microscopio.

FUNDAMENTO. -

El microscopio es un instrumento que se usa para observar muestras de cualquier tejido o

sustancia, que no pueden ser vistos a simple vista. Así, este equipo dará una imagen aumentada

de la muestra, que dependerá de la fuente de iluminación, el sistema óptico y el objeto a

estudiar.

MATERIALES Y EQUIPOS. -

Porta objetos

Cubre objetos

Recorte de la letra e

Microscopio óptico compuesto

Papel de limpieza de objetivos

Agua destilada

Guantes

Mascarillas

PROCEDIMIENTO:
PARTE A: MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina

completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar

en esas condiciones.

2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10

aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo

macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se

corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o

ambos.

b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la

preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el

micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente

con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se

perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir

la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y

por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se

descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una

preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.

6. Empleo del objetivo de inmersión:

a. Bajar totalmente la platina.

b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona

que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de

x40.

d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.

e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.

f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota

de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de

inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de

accidente es muy grande.

h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a

usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar

otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.

i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo

de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de

la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.

j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.

Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

PARTE B: HACER LAS OBSERVACIONES DE LAS SIGUIENTES PREPARACIONES

Preparación # 1: En un portaobjeto, coloque un pedazo de papel que tenga impresa una letra e,

agregue una gota de agua destilada y coloque el cubre objeto.

Ponga la preparación sobre la platina y súbala con el tornillo macrométrico, hasta observar el

objeto a través del lente ocular, utilice objetivo 4X, 10X y 40X.

Afine la imagen utilizando el tornillo micrométrico ajuste la intensidad de luz, abriendo y

cerrando el diafragma, hasta lograr una visión clara.

Esquematice y anote sus observaciones correspondientes.

Preparación # 2: Repita los procedimientos a partir del inciso 1 al 4 pero con un recorte de hoja

milimetrada, como muestra a observar.

Preparación # 3: Repita los procedimientos a partir del inciso 1 al 4 pero con algodón en el

portaobjeto limpio, agregando agua destilada y coloque el cubre objeto, elimine el exceso de

agua con el papel absorbente.

Utilice a objetivo seco 4X, 10X, 40X, observe y esquematice.

Al terminar retire la preparación.

Apague la fuente de luz.

Limpie el ocular y los objetivos con papel limpia lentes.

Gire el revólver y deje el microscopio en objetivo seco (4X).

Descienda la platina.

Desconecte el microscopio.

Ponga la funda correspondiente.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de

observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la

misma y dejarlo cubierto con su funda.

2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda

para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe

guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente

con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el

objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En

cualquier caso, se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha

llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona

(7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes

en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,

platina, revólver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la

preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo

agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,

secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y,

al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

RESULTADOS:

4X 10X 40X

LETRA e
CONCLUSIONES:

En conclusión el estudio meticuloso de los objetivos establecidos ha otorgado una

comprensión holística y profunda del funcionamiento y manejo del microscopio. Este proceso

de aprendizaje ha facilitado la adquisición de un conocimiento minucioso acerca de las

diversas partes y sus respectivas funciones, lo que a su vez ha posibilitado una utilización

sumamente eficaz de este instrumento. Además, se ha cultivado una destreza técnica que

resulta crucial para operar el microscopio de manera precisa y efectiva. Esta capacitación ha

desvelado la trascendental relevancia y utilidad que ostenta el microscopio en una amplia

gama de campos científicos y de investigación, subrayando su papel esencial en el progreso del

saber y el desciframiento de estructuras y organismos a escala microscópica.

BIBLIOGRAFIA

Johnson TR, Case CL. Use and Care of the microscope. Laboratory Experiments in Microbiology.

10th ed. Pearson Education; 2013.

Mendía Eyda. El microscopio óptico compuesto. 2005. Disponible en:

https://microinmuno.files.wordpress.com/2011/01/prc3a1ctica-02-uso-adecuado-del-

microscopio.pdf

http://www.educacion.gob.es/exterior/centros/severoochoa/es/departamentos/biologia/

PRACTICA_1_microscopio.pdf.

http://docplayer.es/2774574-Microscopio-bases-y-aplicaciones.html