UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE QUIMICA
LABORATORIO DE INSTRUMENTAL ANALITICO

DETERMINACIÓN DE VALSARTAN – HCT EN TABLETAS

OBJETIVOS
General
Determinar el contenido de Valsartán y Hidroclorotiazida (HCT) en una tableta empleando la técnica
de cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC)

Específicos
 Adiestramiento en el manejo de equipos de cromatografía liquida de alta eficiencia.
 Aplicar el tratamiento adecuado de los solventes y muestra: filtración y desgasificación de los
mismos.
 Ajustar los parámetros instrumentales para la determinación de valsartán y HCT.
 Determinar cuantitativamente el contenido de valsartán y HCT en una tableta por medio de la
curva de calibración externa.

PARTE EXPERIMENTAL
 Condiciones Cromatográficas
Volumen de inyección: 10 µL
Longitud de onda: 254 nm
Flujo: a optimizar (se recomienda 0,6mL/min donde la Presión < 300 psi)
Solvente: Buffer fosfato pH 5,5: MeOH (90:10)
Fase móvil: a optimizar (se recomienda Buffer fosfato pH 5,5: MeOH 40:60)
Tiempo de corrida: a optimizar (se recomienda 8 minutos.)

 Preparación de Soluciones
1. Preparación de Buffer Fosfato pH 5,5
Pesar aproximadamente 5g de fosfato dibásico de sodio (Na2HPO4) y 4g de fosfato monobásico de
Sodio (NaH2PO4), disolver en 1000 mL de agua destilada y desionizada. Ajustar el pH a 5,5 empleando
las sales antes mencionadas. Filtrar con membrana acuosa 0,45µm. (NOTA: Buscar alternativas de
preparación)
2. Preparación Solvente:
Buffer fosfato pH 5,5: MeOH 90:10
Agregar 900mL de Buffer fosfato pH 5,5 y 100 mL MeOH en un cilindro de 1000 mL. Mezclar
homogéneamente.
NOTA: Prepare el volumen adecuado, tomando en cuenta que los estándares en la curva de calibración
y dilución de la muestra serán preparados en balones de 25mL).

3. Preparación Fase Móvil:

Condiciones óptimas:
 Efecto de la composición de la fase móvil sobre la separación:
Fase Móvil % Buffer pH 5,5 Metanol
1 60 40
2 50 50
3 40 60
Preparar 100mL de cada Fase móvil para escoger la composición apropiada para su análisis.
  Efecto del flujo sobre la separación:
Evalué el efecto de la separación realizando corridas a un flujo de 0,4 mL/min, 0,6mL/min y 0,8mL/min

Nota: emplee el multipatrón de su preferencia (se recomienda utilizar el multipatrón #3).

 Preparación de la Curva de calibración

- Preparar solución madre de 500 mg L-1 de Valsartán, para ello, disuelver la cantidad necesaria del
estándar de Valsartán, transferir cuantitativamente a un balón en 50 mL, agregar una porción de
solvente, colocar en ultrasonido por 10min, dejar enfriar a temperatura ambiente. Llevar a volumen
con solvente y homogenizar.
- Preparar solución madre de 1000 mg L-1 de HCT, para ello, disuelver la cantidad necesaria del
estándar de HCT, transferir cuantitativamente a un balón en 25 mL, agregar una porción de solvente,
colocar en ultrasonido por 10min, dejar enfriar a temperatura ambiente. Llevar a volumen con
solvente y homogenizar.
- Preparar multipatrones de los estándares de Valsartan y HCT de la curva de calibración tomando en
cuenta el intervalo lineal de 15mg L-1 a 35mg L-1 para el valsartán (estándares de 15, 20, 25, 30, 35
ppm) y el intervalo lineal de 15mg L-1 a 35mg L-1 para el HCT (estándares de 30, 40, 50,60, 70 ppm)
en balones de 25mL. Diluir con solvente. Filtrar los patrones con membrana acuosa de 0,45µm.
- Inyectar en el HPLC bajo las condiciones óptimas.
- Grafique el área obtenida de los estándares de valsartán y los estándares de HCT en función de su
concentración.

 Preparación de Muestra.
- Pesar 4 tabletas de Valsartán- HCT y calcule el peso promedio.
- Pesar por triplicado el equivalente a 1 peso promedio.
- Transferir cuantitativamente a un balón de 50mL y agregar una porción de solvente, colocar 15min
en ultrasonido, dejar enfriar a temperatura ambiente y llevar a volumen con solvente.
- Realizar el factor de dilución correspondiente de tal manera que su concentración esté dentro de la
curva de calibración externa.