Actividad 4-Organismos Transgenicos - Grupo 203022 - 13-Finall

ACTIVIDA 4-ESTUDIO DE CASO 4
ORGANISMOS TRANSGENICOS
GRUPO: 203022_13
ESPECIALIZACIÓN EN BIOTECNOLOGÍA AGRARIA
ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL

MEDIO AMBIENTE
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA (UNAD)
2019
Escuela de Ciencias Agrícolas, pecuarias y del medio ambiente
ACTIVIDA 4-ESTUDIO DE CASO 4
JUAN SEBASTIÁN GARCÍA JAIMES

GLORIA RONDÓN Q
JEREMIAS MENDIETA
ROBINSON NEIR RIVERA
MAGDALENA GARCIA BURITICA
GRUPO: 203022_13
DIRECTORA: JULIANA RIVERA
ESPECIALIZACIÓN EN BIOTECNOLOGÍA AGRARIA
ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO

AMBIENTE
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA (UNAD)
2019
OBJETIVOS
Objetivo General
Analizar la importancia de la ingeniería genética, a través de estudio de casos, como la ciencia

que se encarga de la manipulación y transferencia de genes, por lo que hay herramientas
bioquímicas para acceder a estas secuencias.
Objetivos específicos
Analizar la tecnología molecular que puede ser aplicada para obtener plantas
transgénicas.
Determinar si es ético que los investigadores modifiquen genéticamente los
organismos.
Descripción de cada uno de los pasos que se deben llevar a cabo el gen para que sea
correctamente incorporado y expresado por las células de la planta.
Estudiar las metodologías empleadas para la obtención de una planta transgénica.
CONTENIDO
ESTUDIO DE CASO A.
El añublo del arroz es una de las enfermedades más limitantes en la producción de arroz.
Investigadores del sector agrario son llamados a proponer un método de edición genómica
para la obtención de una variedad de arroz (Oryza sativa L. japónica) resistente al ataque por
Magnaporthe oryzae. Los investigadores sugieren abordar el problema mediante la
interrupción del gen OsSEC3A a través de la tecnología CRISPR / Cas9, mediante la
estrategia de transformación de protoplastos con vectores binarios de expresión Cas9 /
gRNA.
Las plantas de arroz OsSEC3A mutantes mostraron signos de inmunidad mejorada, incluido
un mayor contenido de ácido salicílico, una regulación positiva de los genes relacionados
con la respuesta de defensa y una mayor resistencia de la enfermedad contra M. oryzae (Ma
et al., 2018).
Explique:
1. ¿Qué significa el acrónimo CRISPR?
R/: La tecnología CRISPR/Cas9 es una herramienta molecular utilizada para “editar” o

“corregir” el genoma de cualquier célula. Eso incluye, claro está, a las células humanas. Sería
algo así como unas tijeras moleculares que son capaces de cortar cualquier molécula de ADN
haciéndolo además de una manera muy precisa y totalmente controlada. Esa capacidad de
cortar el ADN es lo que permite modificar su secuencia, eliminando o insertando nuevo
ADN.
2. ¿Cuál es la función biológica del sistema CRISPR/Cas en las células
procariotas?
R/: El sistema CRISPR-Cas9 se compone de un ARN guía corto no codificante (ARNg) que
tiene dos componentes moleculares: un ARN CRISPR específico de diana (ARNcr) y un
ARNr transactivador auxiliar (ARNcr). La unidad de ARNg guía la proteína Cas9 a un locus
genómico específico mediante el emparejamiento de bases entre la secuencia de ARNc y la
secuencia diana.
3. ¿Qué es un motivo adyacente de proto espaciador (PAM, del inglés

Protospacer adjacent motif)?
R/: El corte es reparado por los mecanismos de reparación de la célula. Esta reparación puede
darse por distintas vías la unión de extremos sin homología (estrategia seguida, por ejemplo,
cuando se busca interrumpir un gen) o la reparación dirigida por homología (de gran utilidad
a la hora de insertar secuencias en un locus específico)
4. “sgRNA” es la abreviatura que hace referencia a una molécula sintética de

ARN guía de cadena sencilla. ¿Cuál es la función de sgRNA en el Sistema
CRISPR/Cas? Por favor apóyese de imágenes para explicar dicha función tal
claramente como le sea posible.
R/: -sgRNA” es la abreviatura que hace referencia a una molécula sintética de ARN guía de
cadena sencilla. ¿Cuál es la función de sgRNA en el Sistema CRISPR/Cas? Por favor apóyese
de imágenes para explicar dicha función tal claramente como le sea posible.
5. OsSEC3A, una subunidad importante del complejo de exocisto en el arroz.
¿Cuál es la función del complejo de exocisto a nivel celular?
R/: La función del complejo de exocisto a nivel celular es el alargamiento del vello radicular.
Acción, embriogénesis y germinación de polen (Elías y col.,2003; Wen y col. 2005; Zhang
y col. 2013; Bloch y col., 2016).
6. Escriba la secuencia PAM utilizada por los investigadores para lograr la

interrupción del gen OsSEC3A.
R/: Secuencia PAM para lograr la interrupción del gen OsSEC3A utilizado por los
investigadores
Actividad objetivo del gen. Cas9 tiene 50-NGG-30 PAM secuencia (barras azules) y
Cpf1 tiene una secuencia 50-TTTV-30 PAM (barras verdes).
7. Escriba la secuencia objetivo de edición ubicada en la vecindad del PAM.
R/:
8 Mencione 2 características fenotípicas presentes en las plantas de arroz
OsSEC3A mutantes. ¿puede cada una de estas características favorecer o
desfavorecer la producción de arroz? ¿sí o no? y, ¿por qué?
R/: Características fenotípicas en las plantas de arroz OsSEC3A mutantes
1. Defensas mejoradas, como se muestra por niveles de transcripción regulados por

aumento de genes relacionados con la síntesis de patogénesis y ácido salicílico.
2. Aumento de los niveles de Sali ácido cíclico y mayor resistencia al patógeno fúngico
Magnaporthe oryzae.
Si pueden favorecer la producción de arroz, porque resisten al estallido del arroz, a través del
extremo C y unido a los lípidos de fosfatidilinositol, particularmente fosfato de
fosfatidilinositol-3, a través de su extremo N-terminal.
9 Mencione 3 razones, por las que la tecnología CRISPR/Cas9 fue preferida por
los investigadores con respecto a las tecnologías de recombinación genética y
mutagénesis convencional. Estas razones deben tener soporte documental
científico. Para ello, refiérase a la base de datos Science Direct desde la página
de la biblioteca de la UNAD (enlace para ingresar al recurso de la biblioteca:
https://stadium.unad.edu.co/) y al buscador académico (enlace para ingresar al
buscador: https://scholar.google.es/) y garantice la selección de 3 documentos
relacionados con CRISPR/Cas9 y sus ventajas competitivas. Lea y extraiga las 3
razones para usted, más importantes. Por favor tenga adherencia a las normas
APA para las citaciones correspondientes.
R/: Tecnología CRISPR/Cas9
1. Permite degradar los ácidos nucleicos exógenos impidiendo su replicación en el

interior de las bacterias.
2. Permite editar o corregir una región del genoma de cualquier célula con una gran
precisión y exactitud.
3. Sistema de defensa de las bacterias frente a virus, siendo este sistema heredable a las
sucesivas generaciones de bacterias.
10 ¿Para qué sirve la herramienta web CRISPR-P 2?0?

(http://crispr.hzau.edu.cn/CRISPR2/)
R/: Herramienta web CRISPR-P 2.0
Sirve para el diseño de sgRNA para 49 genomas de plantas y se proporcionan ARNg

para 49 especies de plantas con la última versión del genoma y anotación.
Sirve para la puntuación modificado para calificar el potencial de desviación y la
eficiencia de desviación de sgRNAs para Streptococcus pyogenes Cas9, que es el
sistema CRISPR-Cas9 más amplio. El sistema de puntuación en CRISPR-P 2.0 se
basa en el conocimiento actualizado sobre la edición del genoma SpCas9.
Sirve para varios sistemas CRISPR-Cas. Admite el diseño de secuencias de guía para
varios sistemas CRISPR-Cas como Cpf1 (Zetsche et al., 2015) y varias endonucleasas
Cas9.
Sirve para un análisis exhaustivo de la secuencia de guía, que incluye: contenido de
GC, sitio de endonucleasa de restricción, secuencia de micro homología que flanquea
el sitio de orientación (puntaje de micro homología) y la estructura secundaria de
sgRNA.
Sirve para la identificación de sgRNA a partir de secuencias personalizadas. Si el
genoma / secuencia del usuario no figura en los genomas seleccionables, permite a
los usuarios cargar secuencias personalizadas e identificar sgRNA.
11 ¿Cuál es el flujo de trabajo que debe aplicarse para emplear la herramienta web
CRISPR-P 2?0? Escriba los 6 pasos.
R/:
1. Actualizaremos continuamente esta web herramienta para incluir genomas de alta calidad
de más especies de plantas Cuando esté disponible.
2. CRISPR-P 2.0 utiliza una puntuación modificada sistema para calificar el potencial de
desviación y la desviación eficiencia de sgRNAs para Streptococcus pyogenes Cas9, que es
la proteína CAS9 más utilizada hasta la fecha. La puntuación sistema en CRISPR-P 2.0 se
basa en los últimos estudios sobreSpCas9 especificidad y eficiencia en la edición del genoma.
3. Admite el diseño de secuencias de guía para varios CRISPR-Sistemas Cas, incluido Cpf1
(Zetsche et al., 2015) Y variosCas9 endonucleasas.
4. Un análisis exhaustivo de la secuencia de guía se proporciona en CRISPR-P 2.0, que

incluye El contenido de GC, sitio de endonucleasa de restricción, micro homología secuencia
que flanquea el sitio de orientación (puntaje de micro homología) y la estructura secundaria
de sgRNA.
Ma, J., Chen, J., Wang, M., Ren, Y., Wang, S., Lei, C., … Sodmergen (2018). Disruption of
OsSEC3A increases the content of salicylic acid and induces plant defense responses in
rice. Journal of experimental botany, 69(5), 1051–1064. https://doi:10.1093/jxb/erx458
Borrelli, V., Brambilla, V., Rogowsky, P., Marocco, A., & Lanubile, A. (2018). The
Enhancement of Plant Disease Resistance Using CRISPR/Cas9 Technology. Frontiers in
plant science, 9, 1245. https://doi:10.3389/fpls.2018.01245
Hao Liu, Yuduan Ding, Yanqing Zhou, Wenqi Jin, Kabin Xie, Ling-Ling Chen. CRISPR-P
2.0: An Improved CRISPR-Cas9 Tool for Genome Editing in Plants. Molecular Plant.
Volume 10, Issue 3, 2017. Pages 530-532. ISSN 1674-2052.
https://doi.org/10.1016/j.molp.2017.01.003.
ESTUDIO DE CASO B
Científicos de una empresa japonesa, crearon la primera rosa del mundo con pigmento para
color azul. Anteriormente, rosas de coloración azul ya eran producidas a través de cruces
selectivos, pero no eran consideradas azules verdaderas. La técnica utilizada consistió en
extraer el gen de la enzima que produce el pigmento azul de una flor llamada “pensamiento”
e incorporarlo al genoma de la rosa para que produzca el color azul.
Explique:
1. ¿Cuáles fueron las especies de flores que utilizaron los investigadores para
aislar el gen que participa en la biosíntesis del color azul?
R/:El equipo modificó una cepa de la bacteria Agrobacterium tumefaciens para llevar los dos
genes productores de pigmento, que se originan de una especie diferente de bacteria
el color violeta a blanco en una flor japonesa silenciando un solo gen con la técnica de edición
conocida como CRISPR. Esta nueva técnica permitiría no solo facilitar el desarrollo de
nuevos colores en flores, sino también evitar la regulación excesiva que enfrentan las plantas
mejoradas con técnicas anteriores de ingeniería genética, como ocurre con los famosos
cultivos transgénicos.
2. ¿Cuál es el gen encargado en participar en la biosíntesis del color azul? ¿Qué
proteína se traduce a partir de este gen?
R/:Los investigadores hicieron un círculo de ADN, conocido como plásmido, que incluía dos
genes bacterianos implicados en la síntesis de la indigoidina. En conjunto, las dos enzimas
producidas por estos genes convierten la L-glutamina, un aminoácido abundante en los
pétalos de rosa, en el pigmento azul.
3. ¿Para desarrollar esta rosa transgénica fue necesario recurrir al

Silenciamiento genético, la recombinación genética o ambos? Explique su
respuesta.
R/: Recurrieron para la obtención de la rosa Azul al silenciamiento génico en plantas (ARNI),
en este sentido de acuerdo con Bey (2014) consiste en:
Los términos “Silenciamiento génico” y “Silenciamiento génico mediado por ARN” son
utilizados habitualmente para describir el “apagado” de un determinado gen, y es un
mecanismo general que ocurre durante la regulación de la expresión génica. La expresión
génica puede ser regulada tanto a nivel transcripcional como post transcripcional. El
silenciamiento génico transcripcional (en inglés, Transcripcional Gene Silencing o TGS) es
el resultado de la modificación del ADN o de las histonas presentes en la cromatina. Estas
modificaciones crean un ambiente de heterocromatina alrededor de un cierto gen, que impide
el acceso de la maquinaria transcripcional (factores de transcripción, ARN polimerasas, etc.)
reprimiendo la expresión de dicho gen.
4. ¿Cuál fue el método de transformación que emplearon para la obtención de

esta planta transgénica?
R/:
5. En este experimento existió́ un gen marcador de selección. ¿por qué es
necesario utilizar un gen marcador de selección? y ¿cuál es el gen marcador
de selección que se utilizó para la producción de la rosa “Applause”?
R/: Método de transformación
1. El plásmido se elimina de la bacteria y el ADN-T se corta con una enzima de

restricción.
2. El ADN extraño es cortado por la misma enzima.
3. El ADN extraño se inserta en el ADN-T del plásmido.
4. El plásmido se reinserta en una bacteria
5. La bacteria se usa para insertar el ADN-T que transporta el gen anterior en el

cromosoma de una célula vegetal.
6. Las células vegetales crecen en cultivo.
7. Una planta se genera a partir de un clon celular. Todas sus células poseen el gen
extraño y pueden expresarlo como un nuevo rasgo.
6. ¿Sería posible que esta rosa transgénica sea obtenida mediante la tecnología
CRISPR/Cas9? Explique el porqué de su respuesta.
R/: Si es posible, CRISPR/Cas9, permite a los científicos no solamente estudiar los genes de
los organismos, sino también alterarlos de manera precisa y dirigida. Dos moléculas de ARN
guía pueden alterar una secuencia de ADN; la enzima Cas9, guiada por los ARN guía, corta
la cadena de ADN objetivo en un lugar preciso. De esta manera el ADN se puede agregar o
quitar con “precisión láser”.
7. ¿Es ético que los investigadores modifiquen genéticamente los organismos?
R/:/: Los investigadores pueden modificar genéticamente los organismos y generar en ellos
cambios o mejoras que considere necesario.
La ética en la modificación de las plantas se da cuando va comercializar el producto

manipulado, la ética se refiere al hecho de informar o no al consumidor de que se trata de
productos manipulados genéticamente, de no hacerlo incurre en una falta ética.
CONCLUSIONES
Como conclusión, podemos concluir que la técnica CRISPR/Cas9, permite a los científicos
no solamente estudiar los genes de los organismos, sino también alterarlos de manera precisa
y dirigida. Dos moléculas de ARN guía pueden alterar una secuencia de ADN; la enzima
Cas9, guiada por los ARN guía, corta la cadena de ADN objetivo en un lugar preciso. De
esta manera el ADN se puede agregar o quitar con “precisión láser”.
La Ingeniería genética, debe ser responsable y no caer en problemas antiéticos, marcados por
los posibles riesgos que puede tomar o generar nuevas especies, que es lo que ocurre cuando
se modifican organismos, la creación de nuevos organismos. Durante todos los tiempos, las
especies animales y vegetales han tendido a la evolución y a la diversidad. Por esto, los
posibles efectos que pueda tener una tendencia a la uniformidad genética son desconocidos
y temidos. Además, con la manipulación genética de estos seres vivos se crean nuevas
especies. En el caso de los microorganismos se podrían estar construyendo nuevos patógenos
y con ello nuevas enfermedades. Con esto, los beneficios que traen las nuevas tecnologías
genéticas quedan anulados.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍCAS
Natalia Lamprea Bermúdez, Oscar Lizarazo-Cortés, Tecnología CRISPR/CAS9 presente y

futuro en biotecnología, y controversias de sus patentes, Recuperado de:
https://propintel.uexternado.edu.co/tecnologia-crisprcas9-presente-y-futuro-en-
biotecnologia-y-controversias-de-sus-patentes/
Amador García Ruiz de Gordejuela, CUESTIONES ÉTICAS EN LA MANIPULACIÓN

GENÉTICA, Recuperado de:
http://www.oc.lm.ehu.es/cupv/univ98/Comunicaciones/Comun04.html
Descripción del sistema CRISPR-Cas y diseño de sgRNAs (" single guide RNAs") para
edición de ADN genómico en levaduras.
M Pardo Piñón - 2017 - ruc.udc.es… natural de acción de CRISPR-Cas, en los procesos de

edición genética (los cuales trataremos más … Tras la escisión de la secuencia del ADN
diana por Cas9 la cual ha generado un … de modificación altamente precisa (ya que es el
propio investigador el que decide cuál será la …

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JUAN SEBASTIÁN GARCÍA JAIMES

DIRECTORA: JULIANA RIVERA

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1. ¿Qué significa el acrónimo CRISPR?

R/: La tecnología CRISPR/Cas9 es una herramienta molecular utilizada para “editar” o

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4. “sgRNA” es la abreviatura que hace referencia a una molécula sintética de

6. Escriba la secuencia PAM utilizada por los investigadores para lograr la

7. Escriba la secuencia objetivo de edición ubicada en la vecindad del PAM.

R/: Características fenotípicas en las plantas de arroz OsSEC3A mutantes

1. Defensas mejoradas, como se muestra por niveles de transcripción regulados por

R/: Tecnología CRISPR/Cas9

1. Permite degradar los ácidos nucleicos exógenos impidiendo su replicación en el

10 ¿Para qué sirve la herramienta web CRISPR-P 2?0?

R/: Herramienta web CRISPR-P 2.0

Sirve para el diseño de sgRNA para 49 genomas de plantas y se proporcionan ARNg

4. Un análisis exhaustivo de la secuencia de guía se proporciona en CRISPR-P 2.0, que

3. ¿Para desarrollar esta rosa transgénica fue necesario recurrir al

4. ¿Cuál fue el método de transformación que emplearon para la obtención de

R/: Método de transformación

1. El plásmido se elimina de la bacteria y el ADN-T se corta con una enzima de

2. El ADN extraño es cortado por la misma enzima.

3. El ADN extraño se inserta en el ADN-T del plásmido.

4. El plásmido se reinserta en una bacteria

5. La bacteria se usa para insertar el ADN-T que transporta el gen anterior en el

6. Las células vegetales crecen en cultivo.

La ética en la modificación de las plantas se da cuando va comercializar el producto

Natalia Lamprea Bermúdez, Oscar Lizarazo-Cortés, Tecnología CRISPR/CAS9 presente y

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