Huertas Rios Guillermo Omar

IDENTIFICACION DE VICTIMAS ATRAVEZ DEL AND

Este artículo expone los conceptos básicos de las pruebas de ADN en el contexto
forense. Se describen algunos aspectos históricos de cómo se realizaban en sus
inicios estas pruebas genéticas, los marcadores STRs analizados para formar un
perfil genético, los equipos y los sistemas de identificación humana disponibles
comercialmente y más utilizados en los laboratorios de genética forense .La
identificación humana a través del análisis de ADN de muestras óseas es un
método científico de laboratorio al servicio de la investigación forense en nuestro
entorno que cada día evoluciona gracias a importantes avances en el campo de la
biología molecular y específicamente en su aplicación en el campo de la genética
forense que permite nosotros hoy para abordar y resolver casos cada vez más
complejos, relacionados con la identificación genética de restos humanos, cuyo
proceso tiene pasos como la recolección y el procesamiento de las mejores
muestras para obtener perfiles genéticos en algunas situaciones, es posible que
las normas forenses aplicadas no sean las óptimas. Esto no le resta nivel ético a la
práctica, pero, si las normas para establecer la identificación presunta no son
suficientemente estrictas, en cierto punto del proceso, el potencial daño
representado por los intentos de identificación o por el riesgo de hacer
identificaciones erróneas, supera los potenciales beneficios.
INTRODUCCION los familiares de la persona fallecida
este segundo objetivo ayuda a los
La identificación humana a través del
miembros de la familia, puesto que
análisis del ADN a partir de muestras
esclarece lo que sucedió con la
óseas es un método científico
persona fallecida, y les permite tratar
laboratorial al servicio de la
los restos de una manera
investigación forense, que en nuestro
culturalmente apropiada y realizar el
medio cada día va evolucionando
duelo.
gracias a importantes avances en el
campo de la Biología Molecular y en La identificación se define como “la
concreto en su aplicación en el individualización mediante la
campo de la Genética Forense que atribución de un nombre de
nos permiten en la actualidad abordar nacimiento u otro nombre apropiado a
y resolver casos cada día más los restos humanos”. La identificación
complejos. El primero es recuperar y es un proceso en el que se aplican
examinar los restos con el fin de uno o más de los medios. Este
efectuar investigaciones método consiste en mostrar los restos
criminológicas que permitan a los familiares o a conocidos de las
establecer la causa y la manera del personas desaparecidas. También es
deceso; el segundo es identificar los posible efectuar identificaciones
restos y, si es posible, devolverlos a presuntas sobre la base de
documentos personales o de placas
de identidad, así como mediante la
documentación de los
acontecimientos. Desde el
descubrimiento de regiones
polimórficas en
El ADN que podían ser aplicadas en
el campo forense1; las metodologías
analíticas y los marcadores genéticos
utilizados en el ámbito forense han
evolucionado paulatinamente, sin
embargo, desde
Hace alrededor de dos décadas las
repeticiones cortas en tándem, más
conocidas por sus siglas en inglés
como STRs, se convirtieron en los
marcadores genéticos de elección en
los análisis de ADN con fines
forenses; en estos los alelos y
genotipos se representan por
números.
El laboratorio de Genética Forense
utiliza un protocolo de identificación
humana, en función a una mayor o
menor complejidad de las muestras
cadavéricas que se disponga para
realizar la investigación, así como la
disponibilidad de muestras de
referencia para poder identificar los
restos óseos, estas dos
circunstancias permitirán decidir por
una u otra estrategia de resolución,
que puede clasificarse de acuerdo al
caso primero en función del tipo de
muestra que debemos analizar,
segundo en función del análisis
comparativo y tercero en función del
tipo de caso.
MEDIOS Y OBJETIVOS
Cada uno de los siguientes medios,
que integran el proceso de
recolección de datos ante mortem y
post mortem, permite efectuar una
identificación con alto nivel de
certidumbre, la cual, en la mayoría de
los contextos jurídicos, se
consideraría una identificación fuera
de toda duda razonable.
En la práctica, el investigador puede
tropezar con múltiples limitaciones
que obstaculicen la identificación de
restos humanos en situaciones de
conflicto, como la falta de seguridad
para el personal, la incapacidad de
establecer sistemas que garanticen la
continuidad de las pruebas, la falta de
voluntad y la escasez de recursos.
Esas limitaciones pueden restringir o
incluso imposibilitar la aplicación de
tecnologías más sofisticadas.
Un elemento clave que deben tener
presente los agentes que intervienen
en esta actividad, incluso el personal
no forense, es la necesidad de
realizar correctamente la
recuperación y el tratamiento tanto de
los restos humanos como de las
pruebas relacionadas con cada caso.
IDENTIFICACION GENERICA
Las pruebas genéticas ya sea en la
identificación humana, casos
criminales o para establecer
parentesco, no indican características
físicas o patológicas de la persona,
ya que se analizan secuencias que
no codifican proteínas, lo que
significa que no tienen una función
específica para el organismo, al
menos obvia4 . Para entender el
origen y lo que significa un perfil
genético, es necesario comprender
las herramientas que ofrece el
genoma para llevar a cabo la
identificación humana, o sea lo que
conocemos como los marcadores
genéticos o moleculares, que son las
partes del genoma que se analizan
para llevar a cabo esta tarea. Se
denominan genéticos por su herencia
mendeliana simple, y moleculares por
localizarse en la molécula del ADN,
El genoma humano, que contiene
3.200 millones de pares de base, se
encuentra físicamente situado en 23
pares de cromosomas 22 pares de
cromosomas autosómicos y un par de
cromosomas sexuales X/Y esos
cromosomas se hallan en el núcleo
de la célula; de allí el término “ADN
nuclear”. Cada célula de una persona
contiene dos copias de cada
cromosoma, salvo los
espermatozoides y los óvulos, que
contienen sólo una copia. Una
excepción a esta regla son los
glóbulos rojos de la sangre, que no
contienen ADN nuclear.
El ADN mitocondrial es una pequeña
cadena circular de ADN que contiene
solamente 16.569 pares de base.
Reside dentro de las organelas
generadoras de energía de la célula,
denominadas mitocondrias. La
ventaja de esta técnica de análisis
radica en que el ADN mitocondrial se
encuentra presente en múltiples
copias dentro de la célula, por lo cual
es más fácil recuperarlo en el caso de
restos que no están adecuadamente
conservados. El ADN mitocondrial se
hereda únicamente de la madre. Esto
significa que los restos de una
persona pueden compararse con
muestras de la madre, la abuela
materna, un hermano, tías o tíos
maternos, o incluso con familiares
más lejanos, siempre que
pertenezcan a la línea de herencia
materna. Si bien esta característica
facilita la adquisición de muestras de
referencia.
Los seres humanos tienen dos tipos
de cromosomas sexuales, el
cromosoma X y el cromosoma Y. Los
hombres normales poseen un
cromosoma X y un cromosoma Y, y
las mujeres normales dos
cromosomas X. Es posible analizar
un panel de STR situado en el
cromosoma Y a fin de comparar los
restos de la persona fallecida con sus
parientes de sexo masculino. Esta
técnica puede ser de utilidad cuando
no hay parientes cercanos, porque
permite utilizar muestras de cualquier
miembro de la línea paterna, con
inclusión de hermanos, tíos y primos
varones por parte de padre, para
realizar la comparación
METODOLOGIA DEL ANALISIS
Tras la muerte, se activan los
procesos autolíticos y de putrefacción
cadavérica destructores de tejido
blando, cuyas enzimas (nucleasas)
producen el mayor daño al ADN; Las
muestras recomendadas para el
estudio genético que resisten mejor a
los fenómenos de destrucción
cadavérica y que conserva su
estructura celular son los huesos y
los dientes, debido a su estructura
histológica que protege a sus
componentes celulares, a nivel de los
restos óseos existe una matriz
orgánica calcificada impregnada de
sales minerales, con una alta
concentración de fibras de colágeno,
que encierran las células óseas
(osteocitos); Las células que
componen el tejido óseo son los
osteoblastos, que al rodearse de la
matriz y madurar se denominan
osteocitos y los osteoclastos; Los
dientes, presentan una estructura
conformado por una capa de esmalte
y el cemento que protegen a la
dentina que a su vez envuelve a la
pulpa dentaria que tiene una alta
concentración celular, la estructura
dentaria también presenta otras
células como los cementoblastos,
cementocitos y odontoblastos.
Estas son las razones por la que se
recomienda realizar procedimientos
de aislamiento de ADN a partir de
restos óseos antiguos y en cadáveres
putrefactos o carbonizados con
muestras obtenidas en tejido óseo
compacto que se halla en diáfisis de
huesos largos y en piezas dentarias
donde se conserva mejor el ADN.
Las técnicas básicas utilizadas por
los genetistas forenses para obtener
un perfil genético, enfatizando las
peculiaridades de estas cuando se
aplican a identificación humana.
1.-Extracción de ADN.
En general, todas las técnicas de
biología molecular comienzan
obteniendo el ADN molde. Sin
embargo, lo excepcional en genética
forense respecto a otras áreas como
la biomedicina –y que se puede
considerar un arte– es que los
forenses obtienen ADN de una
infinidad de fuentes biológicas
muchas veces no imaginadas, como
chicle, manchas, pintalabios, una
tasa, una botella con agua, un
pasamontaña, restos calcinados, un
rastrillo, cepillo de dientes, etc. El
objetivo y el espacio del artículo no
permiten detallar las diferentes
metodologías, pero si
mencionaremos los pasos principales
de una extracción de ADN estándar.
2.-Cuantificación de ADN.
Una de las técnicas más sencillas es
la espectrofotometría, la cual se
puede realizar con cantidades
mínimas de muestra (1 L). Además
de la concentración, se estima la
pureza del ADN en cuanto a la
presencia de sales o proteínas que
pudieran interferir posteriormente
para obtener un perfil genético para
los genetistas forenses esta técnica
puede no ser suficiente ya que
además del contexto criminal del que
se trate, hay que considerar que
pueden ser mínimas lo que limita los
ensayos o repeticiones que se
pueden hacer. Por ese motivo, las
muestras forenses suelen
cuantificarse por medio de PCR en
tiempo real.
3.-Amplificación por PCR.
El objetivo de la reacción en cadena
de la polimerasa, más bien conocida
por sus siglas en inglés como PCR
(del inglés, polimerase chain
reaction), consiste en amplificar o
generar millones de copias
secuencias del genoma, en este caso
STRs lo que genera el perfil
genético.7 La PCR consiste en 25-30
ciclos en los que suceden los
siguientes tres pasos en cada ciclo:5
1) desnaturalización, por calor se
desnaturalizan (separan) las cadenas
de ADN, 2) alineamiento de los
iniciadores o primers que se unen por
complementariedad de bases y
delimitan las regiones que se van a
replicar, y 3) extensión, en cada ciclo
de PCR se duplica la secuencia
blanco (STRs), por lo que en 25 a 30
ciclos teóricamente habrá millones de
copias, facilitando su análisis
Actualmente la técnica de PCR en
genética forense ha sido mejorada ya
que incluye varios pares de primers
para amplificar de 15 a 24
marcadores simultáneamente, en la
llamada PCR múltiplex, la química de
amplificación de los kits comerciales
para perfiles genéticos ha mejorado
de forma importante, haciéndolos
más resistentes a los inhibidores que
suelen contener las muestras
biológicas de casos forenses, propios
del suelo, sangre coagulada.
4.-Electroforesis Capilar (EC).
Los alelos STRs se diferencian por el
número de veces que se repite una
secuencia corta, esto significa que el
tamaño va a ser diferente entre un
alelo y otro. Para ver estas
diferencias se emplea la EC, donde el
producto de PCR de cada muestra se biológica encontrada en la escena de
separa a través de un capilar relleno un crimen.
de polímero por acción de un campo
El planteamiento general para
eléctrico, proceso que dura alrededor
interpretar los casos criminales es el
de 30 minutos por muestra. Como
siguiente. Digamos que, en Jalisco,
parte de la EC, también se detectan
México, un desconocido ha cometido
los productos para ofrecernos una
un crimen y deja una evidencia
representación gráfica de la corrida
biológica en el lugar de los hechos,
llamada electroferograma. La ventaja
por ejemplo sangre, semen, saliva,
de la EC es que por su relación
etc. Después se detiene a un
área/volumen, los capilares dispersan
sospechoso que se cree está
eficientemente el calor, lo que permite
relacionado con el crimen. Se
aplicar voltajes elevados y separar de
obtienen los perfiles genéticos de la
forma rápida y precisa los fragmentos
evidencia y el sospechoso y se
amplificados.
comparan. Si no coinciden,
RESULTADOS categóricamente se dice que el
sospechoso no es la fuente de la
Una vez obtenidos los perfiles
evidencia; esta conclusión –con raras
genéticos, estos deben ser sometidos
excepciones– es incuestionable. El
a un riguroso proceso de revisión e
juez, analizando la información de
interpretación. Inicialmente destaca la
caso–tanto genética como no
revisión de controles negativos (sin
genética– podría exonerar al
ADN) y positivos (ADN conocido),
inculpado de su participación en el
para detectar una posible
crimen. Por el contrario, cuando
contaminación y para confirmar que
coinciden los perfiles de la evidencia
la amplificación por PCR fue correcta.
y el sospechoso, comienza un
Es conveniente revisar la posible
proceso de interpretación que
ganancia de alelos (drop-in) o pérdida
inicialmente responde a la pregunta:
alélica (drop-out), los cuales son más
¿Cuál es la probabilidad de encontrar
frecuentes en muestras degradadas o
ese perfil genético en la población
con cantidades mínimas de ADN, lo
general?, con lo que se puede
que ocasiona resultados estocásticos
estimar la probabilidad de involucrar a
o azarosos que no son reproducibles
un inocente en el crimen. La
y no representan el verdadero perfil
respuesta requiere aplicar conceptos
genético. Una vez verificada la
de genética poblacional, ya que para
rigurosa observancia de los procesos
la estimación se deben conocer las
de gestión de calidad a los que todos
frecuencias alélicas de los STRs
los laboratorios de genética forense
empleados en la prueba de ADN para
deben apegarse se realiza una
la población donde ha ocurrido el
comparación para verificar la
crimen; en el ejemplo, Jalisco,
concordancia entre perfiles genéticos,
México. Además, es necesario
y establecer si un individuo inculpado
determinar algunos parámetros
es la fuente u origen de una evidencia
estadísticos de interés forense en la
población donde se aplican los STRs
para identificación humana.
CONCLUCIONES
En restos antiguos el ADN presenta
diferentes grados de alteración por
degradación, contaminación o de extracción pueden repercutir
modificación, determinando durante
su análisis cantidades pequeñas de
ADN, asi mismo los marcadores
genéticos de mayor tamaño se
amplificarán con menor eficiencia que
los más pequeños, produciendo
fenómenos de pérdidas de alelos que
condicionar la fiabilidad de los
resultados en estos marcadores y en
las técnicas de amplificación génica
Existen diferentes agentes que
alteran al ADN como los medios
físicos (radiación) entre ellas la
radiación UV, los agentes oxidantes,
la temperatura, humedad, el pH, los
procesos
mecánicos y las enzimas que pueden
provenir del propio cadáver o de la
flora bacteriana, los fenómenos de
hidrólisis y las oxidaciones provocan
roturas de enlaces, que conducen a
la fragmentación de la cadena
nucleotídica y por tanto a la
degradación del ADN. Un problema
frecuente es la contaminación con
ADN exógeno, humano o el
procedente de la flora bacteriana que
puede presentarse durante
procesamiento de restos humanos
antiguos, para ellos se sugiere.
tomar todas las previsiones de
bioseguridad durante el muestreo,
traslado de las muestras y el análisis
en laboratorio separando las áreas de
trabajo dedicadas a: toma y
preparación de muestras, extracción
de ADN, amplificación génica y
detección de los productos de
amplificación. La presencia de
inhibidores de la polimerasa que no
se consiguió eliminar en el proceso
negativamente en la obtención de
resultados de amplificación; durante
la extracción de ADN en muestras de
restos antiguos es frecuente la
extracción paralela de inhibidores que
acompaña al ADN buscado,
considerando que el colágeno tipo I,
los residuos de porfirinas, algunos
componentes del suelo (ácido húmico
y fórmico) actúan como inhibidores de
la polimerasa.
La inhibición puede controlarse con
ensayos preliminares con el fin de
descubrir al inhibidor y dirigir medidas
para descartarlas como: el aumento
de la cantidad de polimerasa en la
reacción de amplificación, volver a
extraer la muestra cambiando el
método de extracción, o diluir el
extracto de ADN para disolver el
inhibidor sin modificar a la
polimerasa.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
PERSONAS DESAPARECIDAS,
ANÁLISIS FORENSE DE ADN E
IDENTIFICACIÓN DE RESTOS
HUMANOS Guía sobre prácticas
idóneas en caso de conflicto
armado y de otras situaciones de
violencia armada Segunda edición,
2009
Villalobos-Rangel H. Rev. cienc.
forenses Honduras. 2017; 3(2): 28-
38.
Análisis de DNA en restos óseos
antiguos Rev Mex Med Forense,
2016, 1(1): 12-17
Genética Forense M. en C.
GUILLERMO EDUARDO CUÉLLAR
NEVÁREZ MEXICAN POPULATION
DATA ON FIFTEEN STR LOCI
(IDENTIFILER KIT) IN A
CHIHUAHUA (NORTH CENTRAL
MEXICO) SAMPLE. J. FORENSIC
SCI, 2005, VOL 50, NO.1.