LIMPIEZA – DESIFECCIÓN – ESTERILIZACIÓN

MÓDULO: OPERACIONES BÁSICAS DE LABORATORIO Prof.: ANA ISABEL GÓMEZ CALLE

LIMPIEZA – DESINFECCIÓN
ESTERILIZACIÓN

1. PROCEDIMIENTOS DE LIMPIEZA
1.1. LIMPIEZA MANUAL
1.2. LIMPIEZA MECÁNICA
1.3. SECADO DE MATERIAL
2. DESINFECCIÓN
2.1. MÉTODOS FÍSICOS
2.2. MÉTODOS QUÍMICOS
2.3. CUALIDADES DE UN BUEN DESINFECTANTE
2.4. CUADRO DE DESINFECTANTES QUÍMICOS
3. ESTERILIZACIÓN
3.1 MÉTODOS FÍSICOS
3.2 MÉTODOS MECÁNICOS
3.3 MÉTODOS QUÍMICOS
4. CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN

1. PROCEDIMIENTOS DE LIMPIEZA

La limpieza se define como el proceso que se encarga de eliminar la suciedad de los objetos con el objetivo de
reducir el número de microorganismos existentes o que pudieran proliferar sobre los mismos interfiriendo en su
función.
Existen distintos tipos de suciedades que se pueden encontrar habitualmente en los útiles de laboratorio como son:
Capas de grasa, polvo, restos de precipitados, marcas de tapones de goma, costras en el fondo de matraces, películas
en los portaobjetos, etc.
Para llevar a cabo una correcta limpieza de tener en cuenta una serie de consideraciones:
• Es conveniente ir limpiando el material a medida que se vaya utilizando, de esta forma mantendremos libres
los sitios de trabajo y será más fácil lavar los utensilios cuando la suciedad aún está “blanda”
• Deberá realizarse siempre antes de la desinfección

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• En general, hay que limpiar siempre de arriba abajo y de dentro afuera.

• Hay que renovar la solución limpiadora en función del nivel de suciedad y del área a tratar. Con algunos
materiales es conveniente ponerlos en remojo unas horas
• El material metálico no debe dejarse demasiado tiempo en agua.
• Es importante seguir las recomendaciones del fabricante del producto de limpieza.
• Debemos tener los elementos comunes de limpieza como estropajos, bayetas, detergente, alcohol, etc.
• Ha de llevarse a cabo diariamente, aunque dependiendo de las zonas y del material puede establecerse un
calendario.
Puede ser de forma manual o de forma mecánica.
3.1. LIMPIEZA MANUAL
Se lleva a cabo en la zona sucia, y conviene que haya pilas o fregaderos con doble seno, para facilitar el aclarado.
La dosificación correcta del detergente desinfectante tiene una gran importancia, mediante las tablas de dosificación
recomendadas por los fabricantes es fácil preparar la concentración adecuada al volumen de agua existente.
Debemos enjabonar el instrumental para ablandar y disolver la suciedad, y si es de difícil acceso es conveniente
sumergirlo durante unas horas en agua jabonosa fría para facilitar el desprendimiento de la suciedad
Podemos también proceder a limpieza por fricción mediante un cepillo o escobillón utilizando agua tibia con detergente,
si tiene cavidades debemos hacer pasar por ella la solución detergente
El agua debe estar a una TEMPERATURA NO MUY ELEVADA (entre 25-27ºC).
Los preparados en polvo han de ser convenientemente DISUELTOS, antes de introducir el material
Tras la limpieza se ACLARA con abundante agua para eliminar o arrastrar cualquier resto de suciedad y detergente,
podemos ayudarnos incluso de frascos lavadores (agua destilada), para eliminar los restos de cal.
3.2. LIMPIEZA MECÁNICA
Se puede hacer en lavadoras o en cubetas de ultrasonidos
- LAVADORAS: el tratamiento del instrumental se realiza en máquinas lavadoras (LAVAVAJILLAS), con programas
automatizados que incluyen desinfección, secado y acondicionamiento del instrumental metálico o de
vidrio.
- ULTRASONIDOS: es una forma de limpieza mecánica que se emplea para objetos difíciles de limpiar por su
escasa accesibilidad (ejemplo: fresas de odontología). Los objetos que se introducen en la cubeta que contiene
el líquido son bombardeados en toda su superficie por pequeñísimas burbujas de aire que se mueven a toda
velocidad.
Cualquiera que sea el tratamiento de limpieza empleado, todo el instrumental debe quedar PERFECTAMENTE
LIMPIO, ACLARADO Y SECO.
3.3. SECADO DE MATERIAL
Es importante que el material esté completamente seco para evitar la corrosión, además, la humedad favorece la
proliferación de microorganismos.
El secado ha de hacerse inmediatamente después del aclarado.

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En el caso de las máquinas lavadoras, ya incluyen el secado.

Si el secado es manual suele hacerse en estufas de calor, con pistolas de aire a presión, o con paños y tejidos
apropiados, que no suelten restos.

4.4. LIMPIEZA DEL MATERIAL DE VIDRIO:

MATERIAL DE VIDRIO POCO SUCIO:
• Agua y jabón.
MATERIAL DE VIDRIO MUY SUCIO.
• JABONES ESPECÍFICOS (agentes tensioactivos en forma de polvo o de disolución. No dejan residuos ni
producen espuma). El material se limpia sumergiendo el material varias horas en una disolución y
seguidamente se enjuaga con agua del grifo primero y con agua destilada en los últimos aclarados.
Utilizados para la limpieza de material de vidrio en general.
• MEZCLA SULFO-CRÓMICA: (disolución de dicromato sódico o potásico en ácido sulfúrico muy
concentrado). Adecuada contra la suciedad persistente de origen orgánico y para el desengrasado del
material de vidrio.
La disolución de dicromato sódico se vierte en el recipiente a limpiar y puede actuar por inmersión
desde 30 minutos hasta 24 horas.
Esta disolución es muy efectiva, pero se adhiere fuertemente a las superficies de vidrio y
porcelana, por lo que es necesario un enjuague exhaustivo del material para separar las últimas
trazas de dicromato que se hubieran adherido a las paredes del recipiente.
Además, la mezcla sulfocrómica tiene el inconveniente de ser potencialmente tóxico y de que el
ácido sulfúrico es corrosivo.

2. DESINFECCIÓN

Se define la desinfección como una técnica que tiene por objeto destruir los microorganismos patógenos. Los
agentes que consiguen esta acción se conocen con el nombre de ANTISÉPTICOS O DESINFECTANTES.
LOS DESINFECTANTES son agentes químicos ó métodos físicos que matan a formas vegetativas,
pero no matan las esporas de gérmenes patógenas.
Se habla de ANTISÉPTICO como la solución desinfectante que se emplea sobre la piel y heridas del
ser humano impidiendo el desarrollo o la acción de los microorganismos bien por destrucción o
inhibiendo su actividad.

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2.1. MÉTODOS FÍSICOS

A. CALENTAMIENTO (MÉTODOS BASADOS EN EL CALOR):

- PASTEURIZACIÓN: consiste en sumergir un objeto en agua a unos 70ºC durante 10 minutos. Este
procedimiento consigue eliminar las bacterias y la mayoría de los virus y los hongos. Es aplicable a vajillas,
utensilios de cocina, muchos alimentos, ropa, e incluso biberones
- EBULLICIÓN: se sumerge el objeto en agua hirviendo (100º C) y se mantiene durante 10 minutos, con lo
que se consigue una desinfección de nivel más elevado que la anterior. Este método lo suelen emplear los
aparatos de LAVADO AUTOMÁTICO.
- PLANCHADO: la ropa se puede desinfectar aplicándole la plancha a 100 – 150ºC durante 15 segundos.

B. RADIACIONES ULTRAVIOLETAS (MÉTODOS QUE UTILIZAN LUZ ULTRAVIOLETA)

Mediante este método se pueden desinfectar objetos si la superficie es lisa, está cerca de la fuente de los
rayos y éstos inciden en ella directamente.
Ej: Se puede usar por ejemplo en el ENVASADO DE MEDICAMENTOS.

C. FILTROS DE FLUJO LAMINAR

Este método se utiliza para evitar el paso de microorganismos del aire. Se hace circular el aire a través de
filtros que tienen los poros más pequeños que las partículas y los gérmenes que transporta el aire, y por
tanto quedan retenidos.
Eliminan el 99% de partículas de un diámetro mayor a 0,3 m, con gérmenes patógenos
Se suelen utilizar EN SALAS DE QUEMADOS, QUIRÓFANOS, Y LABORATORIOS
FARMACIA (ELABORACIÓN DE MEDICAMENTOS DE VÍA PARENTERAL).

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2.2. MÉTODOS QUÍMICOS

Los métodos químicos se basan en la utilización de una amplia gama de productos con poder antimicrobiano,
algunos son bacterioestáticos y otros bactericidas.
La desinfección química se puede APLICAR DE DIVERSAS MANERAS, como son:
- INMERSIÓN: consiste en introducir los objetos a desinfectar en la solución durante un tiempo determinado.
- PULVERIZACIÓN: es la aplicación mediante pulverizadores que proyectan el desinfectante en pequeñas gotas,
sobre superficies y objetos a desinfectar.
- LOCIÓN: se utiliza para paredes y suelos. Se aplica el desinfectante, empapando lo que se vaya a desinfectar
mediante bayetas, esponjas, o cualquier otro método que permita esta aplicación.
- FUMIGACIÓN: consiste en utilizar los desinfectantes en forma de gases, humos o vapores.
- AEROSOLES Y BRUMAS: consisten en la proyección de partículas muy pequeñas mediante aparatos
adecuados. Se utilizan fundamentalmente EN SALAS Y LOCALES.

2.3. CUALIDADES DE UN BUEN DESINFECTANTE

✓ AMPLIO ESPECTRO: es decir, con capacidad para destruir toda la gama de microorganismos que componen
la flora patógena, en un tiempo de actuación relativamente corto.
✓ ESTABLE: de manera que su acción no sea interferida o modificada por las características del medio en el
que actúa.
✓ FÁCILMENTE SOLUBLE: En las concentraciones adecuadas.
✓ COMPATIBLE con otros productos
✓ NO TÓXICO.
✓ NO CORROSIVO.
✓ ECONÓMICO.

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2.4. CUADRO DE DESINFECTANTES QUÍMICOS

GRUPO NOMBRE HABITUAL FORMA DE UTILIZACIÓN OBSERVACIONES

CONCENTRACIONES
ALCOHOLES . Alcohol etílico . Al 70% No son efectivos en las formas
. Alcohol isopropílico . Al 70% esporuladas ni ante muchos
virus.
Se evaporan a temperatura
ambiente.
No son adecuados para
desinfectar heridas abiertas
ALDEHÍDOS . Formaldehído (formol) . Normalmente al 8% Destruye formas vegetativas y
. Glutaraldehído . En solución al 2% (alcalina) virus.
Se potencia su efecto con el
alcohol
El formol es irritante de piel y
mucosas
COMPUESTOS . Hipocloritos Se utilizan en distintas Son bactericidas y viricidas muy
CLORADOS . Lejías comunes concentraciones dependiendo efectivos. Se utilizan para
del uso desinfección de suelos,
superficies y agua.
IODO Tintura de iodo . En solución alcohólica con Son soluciones germicidas. Son
ioduro potásico del 2 al 5% irritantes y tiñen la piel
. Solución acuosa al 2%
YODÓFOROS Povidona yodada Concentraciones entre el 1 y Son activos frente a bacterias y
1,5% formas vegetativas.
Tiene efecto tuberculicida y baja
toxicidad
BIGUANIDAS Clorhexidina Se utiliza en solución acuosa y Es un buen antiséptico. Se utiliza
alcohólica mezclado con de forma tópica en lavado de
detergentes manos, etc.
DERIVADOS Mercurocromo Solución acuosa al 2% Son bacteriostáticos. Se utilizan
METÁLICOS domésticamente. No se utilizan
en hospitales
COLORANTES Violeta de genciana Propiedades bactericidas para
NATURALES gérmenes Gram + y muchos
hongos
AGUA Agua oxigenada Solución al 3% Antiséptico débil. Libera oxígeno
OXIGENADA en los tejidos

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3. TECNICAS ESTERILIZACIÓN

3.1 MÉTODOS FÍSICOS.

3.2 MÉTODOS MECÁNICOS.
3.3 MÉTODOS QUÍMICOS.
4 Controles de esterilización

Son técnicas de saneamiento que tienen por objetivo interrumpir la cadena epidemiológica impidiendo
la propagación de los microorganismos.
LA ESTERILIZACIÓN INCLUYE las técnicas que consiguen la destrucción de los
microorganismos patógenos, saprofitos, esporas, virus, hongos…. y cualquier forma de vida presente
sobre un objeto. No se puede emplear sobre personas.
Decimos que un material está ASÉPTICO O ESTÉRIL cuando se ha destruido cualquier forma de
vida presente en su superficie.
Se dice que un objeto está SÉPTICO cuando la superficie está contaminada.
Palabras de uso común en este campo:
• Saneamiento: es la reducción de la población microbiana a niveles no peligrosos.
• Germicida ó microbicida: mata a formas en desarrollo, pero no forzosamente a las esporas de los
microorganismos.
• Bactericidas: mata a bacterias.
• Funguicidas: mata a hongos.
• Virucidas: mata a vírus.
• Esporicidas: mata a esporas.
• Bactereoéstasis: es la supresión del desarrollo de bacterias. Las sustancias que se utilizan para la
bacterioéstasis, se llama bacteriostático.
• Fungistático: impide el desarrollo de hongos.
• Virostático: impide el desarrollo de virus.
• Agente antimicrobiano: interfiere en la actividad de crecimiento de microorganismos.
• Agentes antibacterianos: interfiere en a la actividad de crecimiento de bacterias.
• Antifúngico: interfiere en la actividad de crecimiento de hongos.

TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN

Para lograr la esterilización se pueden usar 3 técnicas:

1. MÉTODOS FÍSICOS.
2. MÉTODOS MECÁNICOS.
3. MÉTODOS QUÍMICOS.

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MÉTODOS FÍSICOS: existe una diferencia entre la esterilización por calor seco y calor húmedo.
EL CALOR SECO mata a los microorganismos por oxidación de los componentes celulares y si es
CALOR HÚMEDO matará los microorganismos por coagulación de moléculas grandes como son
proteínas, lípidos, etc.
LA FORMA VEGETATIVA ES MÁS SENSIBLE AL CALOR QUE LA ESPORULADA.

3.1 MÉTODOS FÍSICOS.

3.1.1 CALOR HÚMEDO

• AUTOCLAVE: es esterilización por vapor a presión. Es una estufa de vapor de agua. En el interior
lleva una rejilla sobre la que se coloca el material. La tapa del sistema cierra herméticamente. En el
exterior se observa un manómetro, una llave de purga, que permite eliminar el aire contenido en
el interior para que solo quede vapor cuando se va calentando el aparato y una válvula de
seguridad. Tras introducir el material se cierra la tapa y se conecta la fuente de calor hasta que por
la llave de purga sale un chorro continuo de vapor, en ese momento cerramos la llave para que
se eleve la presión en la autoclave que controlamos con el manómetro. Una vez transcurrido el
tiempo para la esterilización se desconecta la fuente de calor y se espera a que la presión interior
se iguale con la exterior (el manómetro indicará cero atmósferas). Por este método se esterilizan
los objetos de goma o caucho, medios de cultivo, tejidos, gasas, instrumental metálico (acero
inoxidable), etc., ALTERNATIVA PARA LOS OBJETOS QUE NO SOPORTAN LAS ALTAS
TEMPERATURAS DE LAS ESTUFAS.
Los objetos de tela deben estar 10 minutos a 135ºC a 2 atmósferas.
Los objetos de goma 20 minutos a 121ºC y a 1 atmósfera.
VENTAJAS: eficacia, facilidad de manejo y bajo coste, es decir el método de elección
en los hospitales.
INCONVENIENTES: son su elevada temperatura y las alteraciones que producen en
los materiales de goma o caucho.
Es el método más utilizado y uno de los más eficaces, cómodo y barato.
El agua a temperatura elevada mata a los microorganismos ya que desnaturaliza y coagula
sus proteínas. El tiempo que se necesita depende de la naturaleza del microorganismo, el medio,
cantidad... Lo calculado es unos 121º durante 20 minutos para que la esterilización sea eficaz y
para conseguir esta temperatura hay que aumentar la presión que suele estar alrededor de una
atmósfera de presión.

• TINDALIZACIÓN: esteriliza por medio de vapor fluente. Es una ESTERILIZACIÓN

FRACCIONADA (AUTOCLAVE DE ARNOLD). Consiste en 3 calentamientos discontinuos. En el

primer calentamiento matamos todas las formas vegetativas y no esporuladas.
Después de este calentamiento las esporas pasan a formas vegetativas y en el segundo
calentamiento mataríamos las esporas que pasaron a formas vegetativas. El tercer

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calentamiento es por seguridad. Ejemplo: es para esterilizar un suero o medio de cultivo. Subimos
la temperatura hasta 90-100º y después se incuba para que las formas vegetativas crezcan y se
vuelve a poner el calor a 90 -100º para que mueran todas las formas adultas, se para y se vuelve a
poner a 90-100º.

• PASTEURIZACIÓN: es una forma también de esterilización con calentamientos inferiores a 100º

(durante 30 minutos, a 60-70º) o (a 75º durante 15 minutos).

• EBULLICIÓN O HERVIDO: consiste en sumergir en agua hirviendo al menos durante 20 minutos

objetos como jeringas, agujas, bateas, etc. consigue destruir la mayor parte de los gérmenes
patógenos, pero no todos. y menos las formas resistentes.

3.1.2 CALOR SECO:

• INCINERACIÓN: se utiliza calor seco. Se realiza mediante hornos crematorios en los que los
desperdicios se destruyen por cremación.

• FLAMEADO: con el mechero Bunsen y con asas de platino resistentes a las altas

temperaturas. El inconveniente es que produce aerosoles y al trabajar con él nos podemos quemar.
Hay que tener cuidado con las muestras de esputo porque desprenden aerosoles.
o Se debe seguir trabajando siempre alrededor de la llama para crear un campo estéril de
trabajo.
o No poner la mano delante para evitar salpicaduras de los aerosoles.
o Utilizar asas desechables.
o LO MÁS ACTUAL es trabajar con CABINAS DE FLUJO LAMINAR.

• ESTUFAS Ó HORNOS DE CALOR SECO PASTEUR Ó POUPINEL:

Se emplean para esterilizar objetos de vidrio o porcelana, material de laboratorio (pipetas,
matraces,) y algunos instrumentos de metal (como instrumentos de disección, agujas de
punción...).
El material para esterilizar debe introducirse limpio, seco y protegido mediante bolsas de
papel sellado o en cajas metálicas. Es un sistema de resistencias eléctricas y termostato que una
vez alcanzado una temperatura adecuada la mantiene durante el tiempo necesario. Mediante el
termómetro puede comprobarse la temperatura que existe el interior.
Permite alcanzar temperatura de hasta 200ºC. Se emplea durante 1 hora a 170ºC para materiales
de vidrio y porcelana o durante 2 horas a 160 ºC para agujas y otros materiales metálicos.

VENTAJAS: sencillo de utilizar y bajo coste.

INCONVENIENTES: lentitud, limitación de espacio y las altas temperaturas que
requieren no soportables por todos los materiales.

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3.2.- METODOS MECÁNICOS

• ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN la filtración se utiliza para ESTERILIZAR LÍQUIDOS

O SUSPENSIONES FORMADAS POR SUSTANCIAS TERMOLÁBILES (sensibles al calor) (por

ejemplo: suero) las cuales se hacen pasar a través de unos filtros en lo que se quedan retenidos
los microorganismos, la eficacia de estos sistemas depende del tamaño del poro del filtro o bien
de su carga eléctrica; a pH óptimo la mayoría de las bacterias tienen una carga de superficie negativa
por lo que la filtración será más eficaz cuando más positiva sea la carga del filtro.
Estos filtros suelen estar hechos con membranas de Nitrato o Acetato de celulosa que suelen
tener poros de unos 0,45 m de diámetro, y por este tamaño hay gérmenes que pasan (p.ej.
Pseudomonas, Serratia...) por eso a veces se recomiendo la utilización de filtros con poros más
pequeños de 0,22 m de diámetro, pero tienen más dificultad de filtración.
Son filtros con los que se hace una presión para que el filtrado sea más rápido con un matraz
quitasato con una bomba de agua.
Existen muy diversos tipos de filtros en el mercado entre los que cabe destacar:
o Filtro Chamberland: son cilindros de porcelana sin barnizar.
o Filtro Berkefeld: son filtros a base de tierra de diatomeas.
o Filtro Seitz: discos a base de amianto.
o Filtro de vidrio poroso.
o Filtro de membrana: están construidos a base de membranas de ésteres
de celulosa.
o Ultra-filtros: suelen construirse a base de celofán

• SEDIMENTACIÓN: es una técnica muy lenta que se emplea fundamentalmente en las centrales
depuradoras de agua y se basan en que las bacterias pesan ligeramente más y tiene una densidad
levemente mayor que el agua con lo que tienden a depositarse en el fondo.
Este proceso de sedimentación puede acelerarse añadiendo al agua partículas pesadas a las
que se adhieren los microorganismos.
En el laboratorio se puede llevar a cabo una variante de este método de sedimentación que es la
CENTRIFUGACIÓN considerándose estéril, el sobrenadante.

• CABINA Ó FILTROS DE FLUJOS LAMINAR: constituyen un sistema de filtrado de aire

que retienen las partículas que transportan este (aire) pudiendo considerarse que queda estéril.
Se emplea en salas de quemados, quirófanos y cabinas de trabajo como es en el servicio de
laboratorio y en farmacia. Eliminan el 99% de partículas de un diámetro mayor a 0,3 m, con
gérmenes patógenos, las cabinas utilizan FLUJO LAMINAR HORIZONTAL EMPUJANDO EL AIRE
HACIA EL EXTERIOR.
En un laboratorio de microbiología se utilizan CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR COMO SISTEMA
DE ESTERILIZACIÓN DEL AIRE CON FILTROS HEPA que filtran partículas con un diámetro menor
a 0,3 m.
Campanas de flujo laminar que proyecta una cortina vertical de aire estéril,

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eliminando gérmenes patógenos que empujan el aire hacia el exterior y evitan la

contaminación ambiental de las muestras.

"High Efficiency Particle Arresting", o "recogedor de partículas de alta eficiencia")

Los filtros HEPA están compuestos por una malla de fibras dispuestas al azar. Las fibras típicamente
están compuestas por fibra de vidrio y con diámetros entre 0.5 y 2 μm. Los factores más importantes
a tener en cuenta en un filtro HEPA son el diámetro de las fibras, el espesor del filtro y la velocidad
de las partículas. El espacio entre las fibras es mucho mayor de 0.3 μm, pero eso no significa que las
partículas con un diámetro menor puedan pasar. A diferencia de los filtros de membrana los filtros
HEPA están preparados para retener contaminantes y partículas mucho más pequeñas.

• RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA:

Todas ellas (, , , Rx, UV) pueden matar microorganismos y todas ellas también se
dividen en dos grupos:
Según las longitudes de onda () de los mismos:
1. Rad. Ionizantes (rayos Rx y rayos  ).  : 0,01 – 100 nm

2. Rad. NO Ionizantes. (U.V).  : 136 – 400 nm

• RADIACIONES IONIZANTES.
Tienen suficiente energía para ionizar las moléculas produciendo radicales hidróxilos [OH-] que
son muy reactivos, y así destruyen el ADN, proteínas y matan a las células (microbios).
Tienen un gran poder de penetración lo que permite que se puedan utilizar para la esterilización
de productos después de que éstos estén embalados.

1. LOS RAYOS X. Radio-esterilización o esterilización en frío: las

radiaciones actúan alterando los sistemas enzimáticos bacterianos y provocan la muerte de
los microorganismos. Todos los rayos X son letales para microorganismos y seres vivos.
La capacidad de penetración de los rayos X es dependiente de la energía con la que se emite.
Son difíciles de manejar, peligrosos, costosos y poco precisos. Su utilización
para esterilizar está restringida.

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2.- LOS R son más penetrantes.

Se emplean bastante con materiales de plástico embalados.
Son los más utilizados ya que tienen mayor capacidad de penetración.
La más utilizada es el cobalto 60. Se utiliza con material de un solo uso como agujas,
jeringas, sondas,bisturís, y gasas, etc.
Se emplean en la producción industrial.
Se paran con el plomo (Pb).

• RADIACIONES NO IONIZANTES.
Radiación ultra-violeta: son un tipo de radiaciones con poder germicida que se
incluye entre las radiaciones solares, el mismo efecto importante para mantener el ambiente de
locales cerrados se consigue colocando lámparas UVA que emiten este tipo de radiaciones se
emplean en quirófanos, salas de infecciosos, prematuros, etc.
Como los UV, es una radiación absorbida por los compuestos intracelulares
produciendo la excitación de los electrones de las moléculas y modificando
su actividad.
La estructura celular más afectada es el ADN y esto puede matar a la célula y mutarla.
Las radiaciones esterilizantes como los rayos UV de unos 260 nm (), son los más efectivos.
Un inconveniente respecto a la esterilización es que tienen muy poco poder de penetración,
sólo son utilizables contra gérmenes que se encuentran sobre las superficies de objetos,
esterilizar estancias, aire de zonas estériles, etc.

También son radiaciones que se van acumulando en las células del organismo como las
ionizantes y por ello hay que trabajar con métodos de aislamiento y protección para evitar
contaminación.

3.3 - MÉTODOS QUÍMICOS DE ESTERILIZACIÓN.

La esterilización química se utiliza mucho para instrumental médico que no se puede someter
a las altas temperaturas del autoclave, y para zonas cerradas donde sea necesario la ausencia
de microorganismos como p.ej. un quirófano.
El laboratorio de microbiología en un hospital está muy relacionado con el laboratorio de
epidemiología y son responsables del estado de esterilización de los quirófanos y de las
contaminaciones e infecciones hospitalarias.
Las esterilizaciones por gases se llevan a cabo CUANDO EL PRODUCTO QUE QUEREMOS
ESTERILIZAR NO AGUANTA TEMPERATURAS ELEVADAS.

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LOS MÉTODOS QUÍMICOS UTILIZADOS SON:

1. ÓXIDO DE ETILENO.
Gas, líquido a temperatura inferior a 10, 8º C por encima son gases, el inconveniente es que es
muy tóxico e irritante y muy inflamable incluso aunque se use a muy baja concentración, se suele
usar mezclado con CO2, no merma la capacidad microbicida.
Tiene una importante capacidad de penetración, puede atravesar paquetes de ropa, embalajes e
incluso algunos plásticos.
El inconveniente es que se necesitan varias horas de exposición porque su acción es muy lenta y
se necesita también bastante tiempo de aireación. Para esterilizar con óxido de etileno se utilizan
una especie de autoclaves que controlan la concentración del gas, la temperatura y la humedad.
Su mecanismo de acción es inactivando enzimas mediante una reacción de los grupos
sulfidrilos.
También es el método más caro.

2. - PROPIOLACTONA.
Líquido incoloro a temperatura ambiente, no es inflamable, pero produce irritación ocular y
ampollas por contacto con la piel.
Presenta capacidad funguicida y viricida a parte de bactericida y esporicida. No es inflamable.
En la actualidad se usa poco porque presenta capacidad cancerígena y produce daño en la
piel y lagrimeo de ojos por eso, aunque es más rápido que el anterior se utiliza poco.

3. GLUTARALDEHIDO.
Glutaraldehido al 2% en forma de líquido.
Esta concentración tiene un espectro muy amplio de actividad antimicrobiana. Se utiliza en
óptica y en instrumentos urológicos.

4. FORMALDEHIDO.
Gas estable a elevada concentración y temperatura. Es muy tóxico y sus vapores son muy
irritantes para las mucosas. Se usa para esterilizar algunos instrumentos y en forma de gas se
utiliza para esterilizar zonas cerradas.
Uno de sus inconvenientes es su escaso poder de penetración y su actividad depende mucho
de la temperatura y humedad.
Su capacidad microbicida es debida a su capacidad de inactivar componentes celulares como
proteínas y ácidos nucleicos.

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4. CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN
LA ESTERILIZACIÓN ES EFICAZ cuando realizamos unos controles de esterilización que pueden
ser químicos, físicos o mecánicos y biológicos.
Podemos clasificarlos también en internos o externos según su colocación:

1. QUÍMICOS.
Son de varios tipos:

• CINTAS ADHESIVAS.
Es un método eficaz que se utiliza tanto en calor seco, húmedo, como en óxido de etileno y que
su función puede ser además de control de esterilización al cambiar de color, pero también tiene la
función de poder precintar el paquete y poner la fecha, personal responsable que ha realizado la
esterilización y lote para saber quién ha llevado a cabo el ciclo.
Los controles ya indican para qué sistemas de esterilización son válidos.
No son verdaderos controles ya que solo informan sobre las condiciones del ciclo.
NO NOS ASEGURAN QUE HAYAN PROVOCADO ESTERILIZACIÓN.

• EN LAS MISMAS BOLSAS DE ESTERILIZACIÓN.

Son bolsas de esterilización donde se introduce el material a esterilizar y que poseen en su cara
posterior unas marcas donde se indica el color al cual tiene que virar si el ciclo ha sido correcto. Observar
siempre la fecha de caducidad y el tipo de esterilización con el que se puede utilizar.

• LÁMINAS Y ETIQUETAS.
Pueden ser sueltas o adhesivas, se archivan los datos para su control. Puede tener el dibujo de
una flecha o un rectángulo que es donde se produce el cambio de color.
• Existe un sistema que en vez de rectángulos o flechas que cambian de color tiene varias zonas que
cambian de color por motivos diferentes (presión, temperatura, tiempo...) y son más específicos ya
que indican las diferentes fases de los procesos de esterilización, con la ventaja (sobre TODOS los
métodos anteriores) de que son más fáciles, cómodos e indican si las distintas fases de esterilización se
han llevado a cabo de una forma correcta.

• Tubos de Brown: contienen una sustancia indicadora que cambia de color según la temperatura
y el tiempo de esterilización.

• Otros indicadores: son sustancias químicas cuyo punto de fusión es igual a la Tª alcanzada
Ej. Anhídrido succínico (P. F. 119,6ºC) no controlas el tiempo solo la Tª alcanzada.

2. MECÁNICOS O FÍSICOS.
El mismo aparato conectado informáticamente hace el control de fallos en el proceso de esterilización.
Pero también se utilizan unos relojes o gráficas que se colocan en el esterilizador donde indican los
problemas que pueden haber ocurrido y también se guardan como información.

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LIMPIEZA – DESIFECCIÓN – ESTERILIZACIÓN
MÓDULO: OPERACIONES BÁSICAS DE LABORATORIO Prof.: ANA ISABEL GÓMEZ CALLE

El inconveniente es que te indican el tiempo, presión y temperatura con el que se han llevado a cabo,
pero NO SE SABE SI HA SIDO EFECTIVO EN TODAS LAS ZONAS DEL AUTOCLAVE, si ha llegado a
todos los lugares. Por eso, para mayor seguridad, se suelen combinar con otros métodos de control
de esterilización.

3. CONTROLES BIOLÓGICOS.
No se utilizan en todos los ciclos sino en controles de calidad de vez en cuando. Consisten en
introducir en el esterilizador ESPORAS VIVAS (Bacillus Stearothermophilus), y comprobar una vez
terminado el ciclo de esterilización si éstas han sido destruidas. Las esporas normalmente van
introducidas en ampollas con un caldo de cultivo que contienen un indicador de pH que cambia de
color cuando los gérmenes crecen.
Los encontramos de diversas formas, en:
- Tiras de papel con las esporas inoculadas (en envases individuales)

- Ampollas

-Existen Pruebas de lectura rápida; porque lo que se pretende acortar el tiempo de

comprobación y lectura.
Se trata de un sustrato peculiar, ya que al detectar una enzima activa derivada de
esporas de m.o, pasa a ser fluorescente indicando error en la esterilización.

Los métodos de control de

esterilización se usan todos juntos:
Los Físicos son obligatorios, los
Químicos se usan siempre por norma y
los Biológicos también en controles de
calidad.

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