CRITERIOS GENERALES PARA RECOLECCION DE LA MUESTRA Y TRANSPORTE.

ANOTAR EL ORIGEN DE LA MUESTRA ROTULACIN: NOMBRE Y APELLIDOS, N HC, SERVICIO Y CAMA RECOGER LA MUESTRA ANTES DE INICIAR AGENTES QUIMIOTERAPEUTICOS (ANTIBITICOS, ANTIVIRALES, ANTIMICTICOS). PREVENIR CONTAMINACION CON FLORA NORMAL CANTIDAD DE MUESTRA SUFICIENTE PARA EL ESTUDIO REQUERIDO ANOTAR EL MTODO DE RECOLECCIN EN LA SOLICITUD

CRITERIOS GENERALES PARA RECOLECCION DE LA MUESTRA CUANDO REPETIR LA MUESTRA? Inadecuada identificacin de la muestra Volumen insuficiente de la muestra Recipiente inadecuado Tiempo excesivo recoleccin entrega Saliva en lugar de esputo baciloscopia COPROCULTIVO La gastroenteritis aguda es un cuadro inflamatorio intestinal de etiologa generalmente infecciosa, manifestado por diarrea, a la que con frecuencia se asocian nauseas, vmitos, dolor abdominal y fiebre. En nios y ancianos, debido a que presenta mayor morbimortalidad, constituye una de las causas ms frecuentes de ingresos hospitalarios. La patognesis de la diarrea involucra a varios microorganismos como agentes causales, pertenecientes en su mayora a la familia Enterobacteriaceae, entre los que destacan: Salmonella, Shigella, Yersinia y Escherichia coli Algunas especies de Campylobacter y Helicobacter se incluyen como causantes de enfermedad en el aparato gastrointestinal, al igual que Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas. Recoleccin de la muestra Las muestras se recolectan directamente en un frasco limpio y de boca ancha con tapa hermtica, al inicio de la enfermedad y preferentemente antes de iniciar tratamiento antimicrobiano.

Cuando se sospecha de la posible recuperacin de Shigella y Campylobacter, es necesario tomar dos hisopos rectales impregnados de materia fecal, los cuales se colocan en medio de transporte Cary-Blair (se pueden usar otros medios de transporte como Stuart o Amies). En lactantes hisopados rectales medios de transportes( Carey-Blair, Amies, Stuar, glicerol salino tamponado, etc) La materia fecal debe ser procesada dentro de 1-2 hs a partir de su emisin. En caso de no ser as, se puede preservar a 4-6 C por 24 hs como mximo. En medio de transporte, puede preservarse por 48 hs a t ambiente o a 4-6 C. Se recomienda no procesar muestras de materia fecal remitidas en paal (al ser absorbentes producen desecacin que puede tener efecto detreo sobre los enteropatgenos) ni muestras contaminadas con orina (su acidez puede afectar la viabilidad de los m.o).

OBSERVACIONES: Carece de sentido el procesamiento dems de una muestra por paciente por da, ya que si se quiere aumentar la probabilidad de aislar el enteropatgeno en cuestin, lo recomendado es tomar 2 o 3 muestras en diferentes das.

PROCESAMIENTO: Examen macroscpico: antes de sembrar la muestra observar si posee

moco pus sangre acuosa pastosa moldeada etc En caso de poseer moco o pus con o sin sangre; es conveniente seleccionar esa porcin de la muestra para la deteccin de Pmns y la realizacin de la siembra. Observacin en fresco y coloracin de azul de metileno: sirve para detectar leucocitos Pmns fecales.

 Ms de 20 Pmns x campo diarrea invasiva en adultos. Ms de 5 Pmns x campo diarrea invasiva en nios. Pueden observarse hemates. SIEMBRA DE LA MUESTRA: La misma se realiza en los medios de cultivo segn el esquema de siembra propuesto por cada laboratorio. Existen mltiples esquemas vlidos, y cada laboratorio debe establecer el suyo teniendo en cuenta una serie de factores ( relacin costo-beneficio, situacin epidemiolgica de la zona, caracterstica de la poblacin que concurre al hospital etc

Segn el esquema a utilizar por cada laboratorio los medios de cultivo a utilizar son: Mac Conkey: selectivo, permite la recuperacin de Shigella spp y Salmonella spp. Agar SS: este medio permite el desarrollo de Salmonella spp, Shigella flexneri y Shigella sonnei.

CaldoSelenito: Medio de enriquecimiento. Permite el desarrollo de Salmonella spp, inhibiendo el crecimiento de la flora coliforme intestinal ( por su contenido en selenito )y la flora Gram positiva ( sales biliares ). Se inocula el medio con materia fecal, y se incuba a 35-37 C por 6-24hs al cabo de las cuales se repica a medios diferenciales para Salmonella spp (ej SS XLD)

Otros medios: ABS-campy: agar base selectivo para Campylobacter 42C,48 hs,10%co2 AS-Amp: agar sangre + ampicilina para la recuperacin de Aeromonas spp. MCS Mac Conkey sorbitol: medio indicado para recuperacin de E coli 0157 XLD ( agar xilosa-lisina-desoxicolato) o Levine EMB para diferenciar E coliSalmonella-Shigella. APA: caldo de enriquecimiento para facilitar la recuperacin de Vibrio cholerae. TCBS: agar selectivo para el aislamiento de Vibrio cholerae. Una vez cumplido el tiempo de incubacin correspondiente a cada medio de cultivo, se procede a la observacin de los mismos y la realizacin de las pruebas de sensibilidad e identificacin .

TRACTO GENITOURINARIO I.T.U : Urocultivo

Muestras del tracto genital femenino

Exudados vaginales. Exudados cervicales. Exudados uretrales. Exudados rectales. Muestras del tracto genital masculino

Exudados uretrales. Exudados rectales. RECOLECCION DE LA MUESTRA El mtodo de recoleccin depende de la edad, sexo y la capacidad del paciente para cooperar. En pacientes femeninas se indica que deben lavarse el rea periuretral y la periferia del meato urinario, utilizando una gasa estril humedecida con agua y jabn, con movimientos de adelante hacia atrs. posteriormente se limpiar el rea con una gasa estril humedecida con agua o solucin salina estril. la recoleccin de la orina debe hacerse separando los labios mayores con una mano, la otra mano sostiene el frasco donde se deposita la muestra.

A los pacientes masculinos - Lavado de las manos con agua y jabn.

- Retraer completamente el prepucio, que se mantendr as en todo momento, hasta que se haya recogido la orina. - Limpiar el glande con jabn neutro. - Eliminar los restos de jabn enjuagndolo con agua hervida. En ambos sexos la muestra debe tomarse por el mtodo del Chorro medio, que consiste en que el paciente debe desechar la primera porcin de orina y recolectar la parte media del chorro en un frasco de boca ancha estril. - En nios y nias mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos.

CONSERVACIN Y TRANSPORTE Procesar dentro de las 2 hs de recolectada o Refrigerar a 4-8 C inmediatamente despus de ser recolectada.

Puede conservarse por 24 hs en heladera no congelar!!!!! Si el transporte al laboratorio demora ms de 15 min, debe transportarse dentro de un contenedor con hielo. PROCESAMIENTO Determinacin de pH y densidad Examen microscpico del sedimento Coloracin de Gram Cultivo Identificacin y antibiograma CULTIVO La muestra se siembra sin centrifugar con ansa calibrada, de 0.05 ml. El medio de cultivo ms utilizado es CLDE

( cistena-lactosa-electrolitos deficientes) Tener en cuenta que: Ante un sedimento patolgico sin recuperacin de grmenes o cualquier elemento que sugiera ITU debe promover la siembra de la orina en AS o ACH antes de asumir la muestra como negativa.

ESPUTO Las infecciones del tracto respiratorio inferior son de las ms frecuentes dentro del conjunto de las infecciones, tanto entre las adquiridas en el ambiente comunitario como en el medio nosocomial.

Obtencin de la muestra. Enjuagar la boca con agua estril o solucin salina. Obtener el esputo tras una espectoracin profunda, preferentemente matinal. De no producirse expectoracin espontnea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de suero fisiolgico estril (15 ml) durante 10 minutos. Recolectar en un frasco de boca ancha estril por lo menos 2 ml de la secrecin. Procesar lo antes posible. Si no fuera posible: refrigerar (4-8C) no ms de 24 hs PROCESAMIENTO: Aspecto: purulento, hemopurulento, hemoptoico, mucopurulento, mucoso, salivoso.

Examen microscpico: a) Coloraciones: Gram Ziehl Neelsen Giemsa Kinyoun (optativa) Coloracin de Gram: permite evaluar cantidad y morfologa bacteriana. Resultado: se observan escasos cocos Gram positivos etc (0 a 9 m.o/campo 100x) Se observan frecuentes cocos Gram positivos etc (10 a 15 m.o/campo 100x) Se observan abundantes cocos Gram positivos, etc (>15 m.o/campo 100x) Col. de Ziehl Neelsen (o baciloscopa) No se valora la aptitud de la muestra, SIEMPRE SE REALIZA Permite determinar el num de BAAR por campo 100x IMPORTANTE: EFECTUAR VARIAS EXTENDIDOS PARA COLORACIONES COMPLEMENTARIAS!!!!

Cultivos Siembra en ASC-ACH En los cuatro cuadrantes ( o estras) para evaluar la densidad del desarrollo en cruces o grados.

Incubacin: 72 hs 3-10% CO2 Lquido Cefalorraqudeo LCR El lquido cefalorraqudeo (LCR) es la muestra clnica representativa cuando hay sospecha de meningitis sptica. Los agentes infecciosos ms comunmente identificados incluyen meningitidis, S. pneumoniae , H. influenzae, S. agalactiae N.

Otros agentes menos frecuentes son: Enterobacterias, C. neoformans, C. albicans, algunos BGNF, S. aureus entre otros.

Obtencin de la muestra: Se obtendr antes de instaurar cualquier terapetica antibitica. Puncin lumbar: Mdico entrenado Neurlogo Neurocirujano Infectlogo

Realizar un buen procedimiento de antisepcia. Puncin lumbar entre la 4ta y 5ta vert lumbar

 Obtencin de la muestra 1 tubo estudio bioqumico 2 tubo estudio microbiolgico 3 tubo estudio citoqumico (este suele ser ms transparente aunque la puncin haya sido traumtica)

Nunca deber refrigerarse pues se puede afectar la viabilidad de N meningitidis y Hi Observaciones!!! Como la meningitis suele sugerir por un proceso bacterimico se solicitan simultneamente HC

Es muy importante para la orientacin diagnstica conocer el estudio fsico-qumico del LCR. Normal M.Viral M.Bacteriana

Caracterstica

Aspecto

lmpido

Claro o lig opalescente

Turbio o purulento

Protenas

15-30mg%

Normal o lig

altas

Glucosa

50-60% de glucemia

normal

baja

Cl.Predominio

<6/mm3
100% linfocitos

monomo fornucleares

Pmns

0-1%

neutrofilos

Procesamiento bacteriolgico Examen directo C Gram: tiene indiscutible valor diagnstico porque la muestra proviene de una zona normalmente estril, sirviendo adems de orientacin al mdico para el tratamiento emprico. Cultivo: Agar chocolate-agar sangre carnero. Caldo Tioglicolato Microaeroflia Si se sospecha de TBC menngea sembrar en medio Lowestein-Jensen

HEMOCULTIVO El estudio bacteriolgico de la sangre debe realizarse principalmente en pacientes con neumona, meningitis o fiebre de origen desconocido, entre otros sndromes.

OBTENCION DE LA MUESTRA La sangre para hemocultivos debe obtenerse por puncin venosa o arterial. Cada una de las muestras de sangre se obtendr de punciones venosas diferentes.

HEMOCULTIVOS
MUESTRA METODO DE RECOLECCION COMENTARIOS

HEMOCULTIVOS

Preparar el sitio de puncin con alcohol al 70% y luego con tintura de yodo Limpiar la tapa de las botellas o tubos con alcohol al 70% No cambiar de aguja para inocular

Enviar inmediatamente para iniciar el proceso de incubacin.

HEMOCULTIVOS
MUESTRA METODO DE RECOLECCION COMENTARIOS

HEMOCULTIVOS BACTERIAS DE RUTINA

20-30 ml /adultos 1-3 ml /nios en cada toma. 3 cultivos por da mximo.

Un volumen adecuado de sangre es necesario para mejorar la sensibilidad. Paciente adulto 2 0 3 muestras de 10 ml c/u con un intervalo de 20 a 30 min.

OTROS

Anaerobios Brucella Leptospira Hongos Micobacterias

TRANSPORTE Y CONSERVACION DE LA MUESTRA Enviar al laboratorio de microbiologa

Incubar en estufa de cultivo a 35-37 C, sino se dispone de sta dejar a T ambiente Nunca deben conservarse en la heladera!!!! Otros mtodos:

Mtodo semicuantitativos (Lisis -centrifugacin) Se realiza la extraccin de sangre en un tubo sistema vacutainer con saponina que rompe las cl sanguineas. La sangre se centrifuga y el sedimento se siembra en las placas con medios de cultivo enriquecidos o selectivos de acuerdo al m.o. Micobacterias o Legionella spp

Mtodos automatizados: La lectura del desarrollo de los m.o, es realizado por un aparato dentro del cual se colocan los hemocultivos recin extrados. Este pone en evidencia el desarrollo de grmenes mediante la deteccin de la produccin de CO2 a travs de mtodos como : radiometra, fluorimetra, espectrometra de infrarojos, cambios de pH