INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

Problema 1:

1- Un sustrato S se transforma por una enzima, y la velocidad de desaparición se mide

cada 30 seg. durante 3 min. Se preparó en tubos de ensayo una serie de seis tubos con
1.5 µg de enzima (peso mol 30,000) añadiéndose un mismo volumen de disolución de
sustrato a distintas concentraciones. Los resultados están resumidos en la tabla.
¿Cuáles son las velocidades iniciales para cada tubo con distinta concentración de
sustrato?

Tiempo (min) Sustrato transformado (µmol)

0
S 1
S 2
S 3
S 4
S 5
S
0.5 0.0 0.49 0.71 1.10 1.36 1.45
1 0.1 1.05 1.52 2.24 2.74 3.00
1.5 0.2 1.66 2.36 3.48 - -
2.0 0.3 2.23 3.18 - - -
2.5 0.4 2.81 4.00 - - -
3 0.5 3.40 - - - -
Conc. Inicial 0.0 2.32 4.55 12.66 38.50 200.00
(µmoles ml-1)

Solución: Paso 1. Corregir cada lectura sustrayendo el cambio aparente en la disolución

testigo (0S) en el tiempo correspondiente.
1
S 2
S 3
S 4
S 5
S
0.49 0.71 1.1 1.36 1.45
0.95 1.42 2.14 2.64 2.90
1.46 2.16 3.28 - -
1.93 2.88 - - -
2.41 3.6 - - -
2.9 - - - -

Paso 2. Representar moles de sustrato transformado para cada concentración frente al

tiempo (Figura). Trazar la mejor recta para cada serie de puntos.

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

4
S
Sustrato transformado (µmol)

5
S
3
S

2
S

1
S

Tiempo (minutos)

De esta figura determinar la velocidad de sustrato transformado por minuto para cada
concentración de sustrato en el tramo lineal de cada curva. Estos valores serán las pendientes
de las porciones lineales y serán también las velocidades iniciales.

[1S] 2.32 x 10-3 M 1

V= 0.95 µmol min-1
[2S] 4.55 x 10-3 M 2
V= 1.44 µmol min-1
[ S] 12.66
3
x 10-3 M 3
V= 2.31 µmol min-1
[4S] 38.50 x 10-3 M 4
V= 2.64 µmol min-1
[5S] 200.00 x 10-3 M 5
V= 2.90 µmol min-1

Estos valores se representan unos frente a otros

Velocidad inicial (µmol min-1)

Conc. Sustrato (M x 103)

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

Problema 2:

v0 = Vmáx [S]
Km + [S]

Utilizando la ecuación de Micaelis-Menten, calcular el cambio en la [S] necesaria para

aumentar la velocidad de una reacción del 10 al 90 % de la velocidad máxima.

SOLUCIÓN
Poniendo v0 = 0,1 Vmáx

Entonces [S] = 0,1

Km + [S]

[S] = (Km + [S]) . 0,1

[S] = 0,1 Km + 0,1 [S]

[S] - 0,1 [S] = 0,1 Km

0,9 [S] = 0,1 Km

9 [S] = Km

Es decir, [S] = Km / 9

Poniendo v0 = 0,9 Vmax encontramos que [S] = 9 Km,

entonces [S]90% = 9 Km = 81
[S]10% Km/9

Es decir, se debe aumentar la [S] 81 veces.

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

Problema 3:
Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reacción catalizada
por una enzima hipotética son:
[S] (moles/l) V (µmoles/min)
5x10-2 0.25
5x10-3 0.25
5x10-4 0.25
5x10 -5
0.20
5x10-6 0.071
5x10 -7
0.0096

a) ¿Cuál es la velocidad máxima para esta reacción?

b) ¿Por qué la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10-4 M
c) ¿Cuál es la concentración de enzima libre para una [S] de 5x10-4 M?
d) ¿Cuál es la Km de la enzima?
e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10-6
y [S]=1x10-1
f) Calcular la concentración de producto formado en los cinco primeros minutos de reacción
utilizando 10 ml de una disolución de sustrato 2x10-3 M.

SOLUCIÓN
a) Vmax = 0.25 µmol/min, ya que por encima de [S] de 5x10-4 no aumenta.
b) Porque todos los enzimas está ocupados transformando un sustrato.
c) Cero, todos los enzimas ocupados, a esa [S] se da la Vmax.
d) Empleando la ecuación de Michaelis, utilizando la velocidad 0.20, 0.070 ó 0.0096 y sus
correspondientes [S], como sabemos la Vmax, obtenemos una Km 0 1,25 x 10-5 moles/l.
e) Sabiendo la Km y Vmax, aplicamos Michaelis utilizando esas [S], y
obtenemos: V = 0,018 µmol/min y V = 0,25 µmol/min.
f) A [2x10-3] la V = Vmax = 0,25 µmol/min. En 5 min 0,25 x 5 = 1,25 µmol. Tenemos 10 ml
de sustrato, luego 1,25 µmol / 10-2 l = 1,25 x 102 µmol/l

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

Problema 4:
Se estudió la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reacción:
CO(NH2)2+H2O  CO2+2NH2
en función de la concentración de urea, con los resultados siguientes:

Concentración de urea (mmoles dm-3) 30 60 100 150 250 400

V inicial (mmoles urea consumidos min mg enzima ) 3,37
-1 -1
5,53 7,42 8,94 10,70 12,04

¿Cuáles son los valores de Km y Vmáx para esta reacción?

SOLUCIÓN
Los datos se ordenan en la forma adecuada para una gráfica lineal (por ejemplo, 1/V inicial
frente a 1/[S], aunque existen otras formas de linealizar que no son motivo de nuestro
estudio). La gráfica de la doble inversa se indica en la Figura. De la gráfica se puede calcular
que Km es 105 mmoles dm-3 y la Vmáx es 15,2 mmoles urea consumidos mg-1 min-1. Observar
la distribución de los puntos y tener presente cuando se eligen los valores adecuados para la
concentración de sustrato al planificar un experimento.

Ejemplo resuelto de acuerdo con el método de doble inversa o de Lineweaver-Burk.

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

Problema 5:
Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reacción catalizada
enzimáticamente sobre un solo sustrato, obteniéndose los siguientes resultados

Concentración de sustrato Concentración del inhibidor

(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reacción  (mol L -1 min-1)
0.05 0.33 0.20 0.14
0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) ¿De que manera actúa el inhibidor? B) Obténgase los valores para Vmáx, y Km.

SOLUCIÓN
A) La manera más sencilla de deducir cómo actúa un inhibidor es graficar 1/ en función de
1/[S]0 para cada concentración del inhibidor.

7 1

6
min )
-1

5 0.5
-1

[I ] 0 (mmol L-1)
1/n 0 (mmol L

4 [I ] 0,5 (mmol L-1)

[I ] 1,0 (mmol L-1)
Vmáx 0
3

0
-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25
-1 -1
1/[S] 0 [(mmol L ) ]
-1/Km

Gráfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la gráfica se puede observar que la pendiente de las curvas se modifica con los
cambios en la concentración del inhibidor pero no la intersección en el eje 1/Vmax). Por
ello los datos anteriores indican que el inhibidor I está actuando como un inhibidor
competitivo.

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

B) De la intersección en el eje 1/ se puede estimar Vmax= 1(mol L -1 min-1) y de la

intersección con el eje 1/[S]0 los valores de Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor, Km=0,2(mmol
L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y Km=0,3 (mmol L -1) con 1(mmol L-1)

Problema 6:
A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar de que manera está
actuando el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad máxima.
[S] mM µg producto/h µg producto/h
(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313

SOLUCIÓN
Se calculan los inversos de [S] y de v, producto sin inhibidor y producto con inhibidor y se
representa. Sin inhibidor: Vmax = 0,5x103 µg/h y Km = 5 mM. Con inhibidor: Vmax es la
misma y Km=9 mM.

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

PROBLEMA 1
Un sustrato S se transforma por una enzima, y la velocidad de desaparición se mide cada 30 seg.
durante 3 min. Se preparó en tubos de ensayo una serie de seis tubos con 1.5 µg de enzima (peso
mol 30,000) añadiéndose un mismo volumen de disolución de sustrato a distintas concentraciones.
Los resultados están resumidos en la tabla. ¿Cuáles son las velocidades iniciales para cada tubo con
distinta concentración de sustrato?

Tiempo (min) Sustrato transformado (µmol)

0
S 1
S 2
S 3
S 4
S 5
S
0.5 0.0 0.49 0.71 1.10 1.36 1.45
1 0.1 1.05 1.52 2.24 2.74 3.00
1.5 0.2 1.66 2.36 3.48 - -
2.0 0.3 2.23 3.18 - - -
2.5 0.4 2.81 4.00 - - -
3 0.5 3.40 - - - -
Conc. Inicial (µmoles ml-1) 0.0 2.32 4.55 12.66 38.50 200.00

PROBLEMA 2
Utilizando la ecuación de Micaelis-Menten, calcular el cambio en la [S] necesaria para aumentar la
velocidad de una reacción del 10 al 90 % de la velocidad máxima.

v0 = Vmáx [S]
Km + [S]

PROBLEMA 3
Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reacción catalizada por una
enzima hipotética son:
[S] (moles/l) V (µmoles/min)
5x10-2 0.25
5x10-3 0.25
5x10-4 0.25
5x10-5 0.20
5x10-6 0.071
5x10-7 0.0096

a) ¿Cuál es la velocidad máxima para esta reacción?

b) ¿Por qué la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10 -4 M
c) ¿Cuál es la concentración de enzima libre para una [S] de 5x10 -4 M?
d) ¿Cuál es la Km de la enzima?
e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10-6
y [S]=1x10-1
f) Calcular la concentración de producto formado en los cinco primeros minutos de reacción utilizando
10 ml de una disolución de sustrato 2x10-3 M.

PROBLEMA 4
Se estudió la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reacción:
CO(NH2)2+H2O --- CO2+2NH2
en función de la concentración de urea, con los resultados siguientes:

Concentración de urea (mmoles dm-3) 30 60 100 150 250 400

V inicial (mmoles urea consumidos min-1 mg enzima-1) 3,37 5,53 7,42 8,94 10,70 12,04

¿Cuáles son los valores de Km y Vmáx para esta reacción?

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PROBLEMARIO 3 (CINÉTICA ENZIMÁTICA)

PROBLEMA 5
Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente
sobre un solo sustrato, obteniéndose los siguientes resultados

Concentración Concentración del inhibidor

de sustrato (mmol L -1)
(mmol L -1) 0 0.5 1.0
Velocidad de reacción  (mol L -1 min-1)
0.05 0.33 0.20 0.14
0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) ¿De qué manera actúa el inhibidor? B) Obténgase los valores para Vmáx, y Km.

PROBLEMA 6
A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar de que manera está actuando
el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad máxima.
[S] mM µg producto/h µg producto/h
(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313

PROBLEMA 7

El silicato inhibe la acción catalítica de la glutamato deshidrogenasa, en las tres primeras columnas
del siguiente cuadro se dan los valores de concentración de sustrato y velocidad. Determine el tipo de
inhibición y constante de inchibición. La concentración de silicato es de 40 nM
S (mM) vSI (mM/min) vI (mM/min)
1 7.7 6.25
1.5 10.275 8
2 13.31 9.25
3 17.25 11.36
5 22.23 13.32
PROBLEMA 8

El calcio inhibe la actividad de una enzima que requiere Mg+2 para funcionar. En el siguiente
cuadro se presentan los datos cinéticos sin inhibidor y con dos concentraciones de inhibidor.
Obtenga la constante de inhibición
S (mM) v (mM/min) vI1 (mM/min) vI2 (mM/min)
0.3 20.40 9.26 5.99
0.5 25.65 12.66 9.47
1.0 33.30 20.00 14.22
2.0 40.00 28.57 22.28