Departamento de Bioanálisis Clínico

Asignatura: Bioquímica Clínica I

Año: III
F.O.E: C.T
Unidad I: Introducción a la Bioquímica Clínica
Objetivos:
1. Describir el concepto de la bioquímica, los conceptos básicos y la relación con las leyes
que rigen la espectrofotometría.
2. Explicar los diferentes métodos, tipos de pruebas y la estructura del sistema internacional
de unidades aplicadas para la dosificación de los análisis químicos en las muestras biológicas
de los pacientes.
3. Explicar las fuentes analíticas y no analíticas que provocan variación en los resultados de
los análisis de las sustancias químicas de interés clínico.
4. Explicar la importancia de aplicar los pasos del control de calidad en el área de bioquímica.

BIOQUÍMICA CLÍNICA

Concepto

La bioquímica o química clínica, es la rama de las ciencias de laboratorio clínico en la que

se utilizan métodos químicos y bioquímicos para el estudio de las enfermedades. Esta
definición abarca todos los estudios en los que se analizan sangre u orina, dada la relativa
facilidad con que se obtienen estas muestras. Sin embargo, también se analizan otros líquidos
biológicos, como, por ejemplo, el aspirado gástrico y el líquido cefalorraquídeo. Las pruebas
de bioquímica clínica constituyen más de una tercera parte del total de estudios de laboratorio
que se realizan en un hospital.

Utilización de las determinaciones bioquímicas

Los resultados de las pruebas bioquímicas pueden ser utilizados con fines diagnósticos o para
el seguimiento de los tratamientos. También sirven para llevar a cabo el cribado de
enfermedades o para establecer el pronóstico una vez realizado el diagnóstico.

Todos los laboratorios de bioquímica realizan las denominadas «determinaciones básicas» y

disponen de una sección para la realización de determinaciones urgentes. El médico solicita
habitualmente agrupaciones específicas de pruebas, de las que el laboratorio de bioquímica
recibe peticiones redactadas en un lenguaje enigmático del tipo «U Y E» (urea y electrólitos),
«PFH» (pruebas de función hepática) o «gases en sangre».

También, los laboratorios de bioquímica cuentan con una serie de secciones especiales,
aunque no todos los laboratorios están equipados para llevar a cabo todas las determinaciones
bioquímicas que existen, sin embargo, los grandes laboratorios funcionan como centros de
referencia en los que se llevan a cabo las determinaciones solicitadas con menos frecuencia.
Las pruebas necesarias para el diagnóstico de ciertas enfermedades raras puede que se
realicen solamente en uno o dos laboratorios en todo un país.

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Gama de pruebas del laboratorio de bioquímica
Determinaciones bioquímicas básicas
• Sodio, potasio y bicarbonato
• Urea y creatinina
• Calcio y fosfato
• Proteínas totales y albúmina
• Bilirrubina y fosfatasa alcalina
• Alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato
aminotransferasa (AST)
• Tiroxina (T4) libre y tirotropina (TSH)
• ɣ -glutamiltranspeptidasa (ɣ-GT)
• Creatina cinasa (CK)
• H+, pCO2, pO2 (gasometría)
• Glucosa
• Amilasa
Determinaciones especiales
• Hormonas
• Proteínas específicas
• Oligoelementos
• Vitaminas
• Fármacos
• Lípidos y lipoproteínas
• Metabolitos intermediarios
El lugar de la bioquímica clínica en la medicina
• Análisis de ADN

Utilidad de la Bioquímica clínica

✓ Diagnóstico
✓ Valoración del pronóstico y del tratamiento
✓ Investigación
✓ Ensayos clínicos de fármacos

Sistema Internacional de Unidades

El Sistema Internacional de Unidades, conocido en el mundo como SI, fue creado con el
principal objetivo de alcanzar una estandarización a escala internacional de las unidades de
medida en las ramas de la ciencia y la tecnología. Este sistema constituye la versión más
moderna del Sistema Métrico y se considera el sustituto de todos los anteriores.

Los componentes biológicos reaccionan in vivo sobre una base molecular. Por lo tanto, el SI
conllevaría a una mejor comprensión de las cantidades relativas de los componentes de los
líquidos corporales, de los procesos biológicos y sus interrelaciones, y favorecería además el
intercambio de la información científica. El mol, la unidad de cantidad de sustancia del SI y
la más importante para los profesionales de los laboratorios de salud, ocupó el lugar que
durante años perteneció al gramo, sus múltiplos y submúltiplos, como unidad de
concentración de masa.

La estructura del Sistema Internacional de Unidades comprende tres tipos de unidades:

1. Unidades de base.
2. Unidades derivadas.
3. Unidades suplementarias.

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Las unidades de base agrupan a las que interesan a los profesionales de la salud. En el
laboratorio clínico, el mol constituye la unidad más importante y se hace acompañar del litro
(L), que, aunque no es una unidad SI, se decidió utilizarlo como nombre especial para el
decímetro cúbico y que fuera la unidad SI para expresar los valores de volumen.

Unidades SI de base

Las unidades derivadas se forman al multiplicar una unidad de base por sí misma o al asociar
dos o más unidades de base por una simple multiplicación o división. De manera que las
unidades SI derivadas constituyen un amplio grupo de unidades.

Unidades SI derivadas simples

Las unidades suplementarias son independientes de las unidades de base. La Conferencia

General de Pesos y Medidas no ha decidido considerarlas como unidades de base o derivadas.
Ninguna de ellas ofrece interés para las profesiones médicos.

El SI prioriza el uso del mol como unidad para la concentración de cantidad de sustancia en
los componentes cuya masa molecular relativa (peso molecular) se conoce. El mol, que se
define como la cantidad de sustancia de un soluto dividida por el volumen de solución
(mol/L), se expresa siempre como tal o en submúltiplos: milimol (mmol), micromol (µmol),
nanomol (nmol). En aquellos casos en que se desconoce la masa molecular relativa o cuando
se trata de proteínas, el SI permite el uso de la unidad de concentración de masa (g) y se
mantiene el litro como unidad de volumen.

Para los componentes enzimáticos, la unidad SI de actividad catalítica es el mol por segundo
(mol/s), aunque la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada aprobó para su uso
provisional el nombre especial de katal (kat) para esta unidad (1 kat = 1 mol/s-1). La
aprobación del katal no se ha efectuado, por lo que no constituye una unidad SI. Mientras
tanto, se autorizó el uso de la unidad por litro (U/L) para expresar la actividad catalítica
(antes, actividad enzimática).

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Los componentes urinarios se expresan en función de la excreción total diaria de orina, y
para ello se emplean unidades de cantidad de sustancia referidas al período durante el cual se
recolectó la muestra (mmol o mmol/24 h).

Las presiones parciales de gases sanguíneos (pO2 y pCO2), según el SI, se expresan en
kilopascales (kPa) y no en milímetros de mercurio (mmHg). Este cambio de unidades en las
presiones parciales, no ha sido aceptado por la mayoría de los países y, como ocurre también
con la presión arterial, se expresan en mmHg.

Automatización en el laboratorio clínico

La automatización en el laboratorio clínico se refiere a los procesos analíticos que son

realizados por equipos, con la menor participación posible del ser humano. Muchas
tecnologías desarrolladas en los últimos 30 años del siglo XX tuvieron como resultado la
aparición de una generación de sistemas analíticos en los cuales el instrumento, su
funcionamiento y los reactivos constituyen una unidad funcional. Las operaciones realizadas
por los analistas pasaron a ser ejecutadas por el sistema. Este desarrollo tecnológico en el
campo del diagnóstico por parte del laboratorio clínico tiene en la actualidad más fuerza que
nunca y tendrá que ser enfrentado por todos los profesionales de esta especialidad, quienes
tienen la responsabilidad de prepararse para ello.

Los primeros analizadores que aparecieron en el mercado fueron los de flujo continuo. Estos
se mantuvieron durante muchos años como únicos representantes de los nacientes
analizadores y ayudaron a resolver, en parte, los problemas originados por el exceso de
trabajo. En este tipo de analizador, las muestras se desplazaban una detrás de la otra,
separadas por burbujas de aire en el interior de pequeñas mangueras flexibles.

Años más tarde (1975), apareció en el mercado una versión más depurada de los analizadores
químicos. Conocidos como analizadores discontinuos y discretos, desde el punto de vista
metodológico imitan las etapas de los análisis que eran realizados de forma manual. Por
ejemplo, la pipeta de muestras aspira la cantidad de muestra requerida tantas veces como
determinaciones tenga indicadas el paciente, y la deposita en cubetas de reacción
independientes. Ninguna muestra entra en contacto con la siguiente y esto los identifica como
analizadores discretos. Son discontinuos porque las muestras y reactivos no viajan uno detrás
de los otros por el interior de las mangueras.

En la actualidad la mayoría de los laboratorios están informatizados y la utilización de

muestras marcadas con códigos de barras y de métodos de análisis automatizados permite
alcanzar altos niveles de productividad y calidad del servicio. Los enlaces mediante redes
informáticas con las plantas y las consultas hospitalarias proporcionan un acceso directo a
los resultados del médico que los solicita.

Espectrofotómetros

Con un espectrofotómetro se mide la luz transmitida por una disolución para determinar la
concentración de la sustancia que absorbe luz y que está dentro de la disolución.

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Espectrofotómetro de haz único

Dos leyes fundamentales rigen la práctica de la fotometría: la ley de Lambert, que establece
que la disminución del poder radiante de un rayo de luz monocromática que pasa a través de
un medio absorbente, es proporcional al poder radiante del rayo, y la ley de Beer, que
establece que la energía radiante de un rayo de luz monocromática disminuye en proporción
directa con el incremento de la concentración de la sustancia absorbente. El principio básico
de casi todos los métodos basados en la ley de Lambert-Beer, consiste en la comparación de
la absorción o la transmitancia de energía radiante (a una longitud de onda determinada, por
una solución que se ha de investigar).

Ley de Beer
Beer y col describieron la relación que hay entre la luz que absorbe una disolución y la
concentración de esa misma disolución. La ley de Beer establece que la concentración de una
sustancia es directamente proporcional a la cantidad de luz absorbida (absorbancia) o
inversamente proporcional al logaritmo de la luz transmitida (transmitancia). El porcentaje
de transmitancia (% T) y absorbancia (A) son términos fotométricos relacionados.

El porcentaje de transmitancia es la relación de la energía radiante transmitida (T) dividida

entre la energía radiante que incide en la muestra (I) y multiplicada por 100. Es decir, el
porcentaje de transmitancia que miden los espectrofotómetros comerciales es la relación del
rayo que transmite la muestra dividido entre el rayo que transmite el medio de referencia
(blanco).

La absorbancia A es la cantidad de luz que se absorbe. Un espectrofotómetro no la puede

medir en forma directa, sino que se deriva en forma matemática a partir del % T. La
absorbancia se define como:

A = -log (I/I0) = log (100%) – log %T = 2- log % T

De acuerdo con la ley de Beer, la absorbancia es directamente proporcional a la

concentración.

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Muestras

Obtención y preservación: Cuando la sangre se recoge en un tubo simple y se deja coagular,

tras la centrifugación se obtiene una muestra de suero. Este es el tipo de muestra
recomendado para un gran número de análisis bioquímicos. En otros casos, en especial
cuando la sustancia que debe analizarse es inestable y es preciso obtener rápidamente una
muestra que se pueda congelar inmediatamente, la sangre se recoge en un tubo que contenga
un anticoagulante, como, por ejemplo, heparina. Tras la centrifugación, el sobrenadante se
denomina plasma y constituye la porción exenta de células de la sangre junto con el
anticoagulante.

Los contenedores para muestras de orina pueden incluir conservantes para inhibir el
crecimiento bacteriano o ácidos para estabilizar ciertos metabolitos. Tienen que ser de
tamaño suficiente como para contener una muestra de orina de 24 h. Las muestras aleatorias
de orina se recogen en contenedores «universales» de menor tamaño.

Identificación: Para llevar a cabo un análisis bioquímico es preciso que el laboratorio reciba
una muestra adecuada para la prueba solicitada, así como la información necesaria para
garantizar que la prueba que se lleve a cabo sea la correcta y para que los resultados lleguen
al médico solicitante lo más rápidamente posible. El formulario de solicitud debe incluir
todos los datos necesarios para que tanto el personal del laboratorio como los médicos puedan
interpretar los resultados. La identificación del paciente debe ser correcta, y el formulario ha
de incluir información acerca de la presunta patología. Se deben señalar con claridad las
determinaciones solicitadas.

Todas las muestras procedentes de pacientes con infecciones peligrosas deben ser marcadas
con un adhesivo amarillo de «muestra peligrosa». Otra etiqueta idéntica se debe adherir al
formulario de solicitud. Para el personal de laboratorio resultan especialmente problemáticos
el virus de la hepatitis B y el VIH.

Un laboratorio medio recibe miles de formularios y muestras cada día, por lo que es
importante que todas queden perfectamente identificadas sin que se produzcan
equivocaciones. Todos los procedimientos analíticos están sometidos a controles de la
calidad, y la fiabilidad es la prioridad básica del laboratorio.

Tubos de muestra de sangre para determinadas pruebas bioquímicas.

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Errores de muestreo
Existe una serie de posibles errores que pueden condicionar el éxito o el fracaso del
laboratorio a la hora de responder correctamente a los interrogantes de los médicos. Algunos
de ellos surgen en el momento en que se obtiene la muestra del paciente.

• Técnica de extracción sanguínea. Las dificultades en el momento de la extracción de

sangre pueden provocar hemólisis, con la consiguiente liberación de potasio y de otros
componentes eritrocíticos.

• Estasis prolongada durante la venopunción. El agua que contiene el plasma se difunde

hacia el espacio intersticial, por lo que la muestra de suero o plasma obtenida se
concentrará. Las concentraciones de proteínas y de componentes unidos a proteínas, como
el calcio o la tiroxina, se encontrarán falsamente elevadas.

• Muestra insuficiente. Un volumen pequeño de muestra puede impedir al laboratorio

medir todos los parámetros solicitados.

• Errores temporales. La principal fuente de error al determinar cualquier sustancia en una

muestra de orina de 24 h es un proceso de recolección incorrectamente ejecutado.

• Contenedor de la muestra inadecuado. Muchas determinaciones requieren que la sangre

sea recogida en un contenedor que incluya algún anticoagulante y/o conservante. Por
ejemplo, las muestras de glucosa deben ser recogidas en contenedores especiales con
fluoruro, un inhibidor de la glucólisis; en caso contrario, el tiempo requerido para el
transporte de la muestra al laboratorio puede afectar a los resultados. Si una muestra se ha
recogido en un contenedor equivocado, nunca debe ser transferida a otro. Por ejemplo, la
sangre que ha sido expuesta a EDTA (un anticoagulante utilizado en contenedores para
lípidos), aunque solo haya sido durante un periodo de tiempo muy corto, presentará una
concentración de caldo muy reducida, próxima a cero, así como una falsa elevación de la
concentración de potasio. Esto es debido a que el EDTA forma complejos con el calcio y
se utiliza en forma de sal potásica.

• Lugar de toma de muestra inadecuado. Las punciones para la obtención de muestras de

sangre no deben realizarse «corriente abajo» de un punto en el que se esté llevando a cabo
una perfusión intravenosa. No es infrecuente recibir en los laboratorios muestras obtenidas
mediante punción en el mismo brazo en el que se está perfundiendo glucosa al 5%.
Generalmente los resultados son bioquímicamente inverosímiles, pero siempre es posible
que den lugar a algún tipo de toma de decisiones que puede tener consecuencias
desastrosas para el paciente.

• Almacenamiento incorrecto. Una muestra que permanezca almacenada durante toda una
noche antes de ser remitida al laboratorio presentará concentraciones anómalamente
elevadas de potasio, de fosfato y de enzimas eritrocíticas, como lactato deshidrogenasa,
debido a la difusión de estos compuestos hacia el espacio extracelular.

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Diagrama de procesos del laboratorio de bioquímica clínica.

Variabilidad metrológica

Las medidas bioquímicas varían debido a dos razones. Se denominan «variabilidad analítica»
y «variabilidad biológica». La variabilidad analítica depende del rendimiento analítico; la
biológica es debida a los cambios reales que se producen en los líquidos biológicos de los
pacientes a lo largo del tiempo.

Rendimiento analítico del laboratorio

Los resultados bioquímicos pueden ser descritos mediante los siguientes parámetros:
▪ Precisión y Exactitud
▪ Sensibilidad y Especificidad
▪ Control de la Calidad
▪ Intervalos de Referencia.

Precisión y exactitud: La precisión mide la reproducibilidad de un método analítico. La

exactitud se refiere a la proximidad existente entre el valor medido y el verdadero. El objetivo
es que todo método bioquímico presente una precisión y una sensibilidad aceptables. La
automatización de los sistemas analíticos ha supuesto una mejora de la precisión en la
mayoría de los casos.

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Precisión y Exactitud

Sensibilidad y especificidad analíticas: La sensibilidad analítica de un método indica la

cantidad más pequeña de sustancia que dicho método es capaz de detectar La especificidad
analítica de un método mide la bondad de dicho método para distinguir entre la sustancia
analizada y otras que puedan producir interferencias.

Especificidad y sensibilidad de una prueba: La especificidad de una prueba mide la

frecuencia de resultados negativos en personas que no padecen una enfermedad. La
sensibilidad mide la incidencia de resultados positivos en pacientes que sí padecen una
enfermedad. La prueba diagnóstica ideal tendría una sensibilidad del 100%, mostrando un
resultado positivo en todos aquellos individuos enfermos, y una especificidad del 100%,
siendo negativo el resultado para todos los pacientes que no padecen la enfermedad.

Control de la calidad: El personal de laboratorio monitoriza constantemente el

comportamiento de los métodos analíticos mediante el uso de muestras de control de la
calidad, para garantizar que los resultados que se obtengan con las muestras de pacientes sean
correctos. Las muestras de control de la calidad interno son analizadas a intervalos regulares.
Los valores esperados son conocidos, y su comparación con los obtenidos permite constatar
el buen funcionamiento del método. En los controles de la calidad externos se distribuyen
muestras idénticas entre distintos laboratorios y se comparan los resultados obtenidos por
cada uno de ellos.

Intervalos de referencia: Los resultados de las determinaciones bioquímicas se suelen

comparar con un intervalo de referencia escogido arbitrariamente y en el que quedan
incluidos el 95% de los valores hallados en individuos voluntarios sanos. Esto quiere decir
que, por definición, el 5% de los individuos de cualquier población presentarán resultados
fuera del intervalo de referencia. En la práctica no existen unos límites inamovibles que
marquen la diferencia entre la población enferma y la sana; sin embargo, cuanto más alejado
de los límites del intervalo de referencia se encuentre un resultado, más probable será que
exista una patología asociada.

Un resultado anómalo en un paciente en el que más tarde se demuestra que no padece la

enfermedad se denomina «falso positivo». Un «resultado normal» en un paciente que padece
la enfermedad es un «falso negativo».

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Factores biológicos que afectan a la interpretación de los resultados

La discriminación entre valores normales y anómalos se ve afectada por diversos factores

fisiológicos que deben ser tomados en cuenta a la hora de interpretar cualquier resultado.
Entre ellos se hallan:

• Sexo. Los intervalos de referencia para algunos parámetros como la creatinina sérica son
diferentes para hombres y mujeres.

• Edad. Los intervalos de referencia pueden ser diferentes para neonatos, niños, adultos y
ancianos.

• Dieta. La muestra puede ser inadecuada si se obtiene cuando el paciente está en ayunas o
acaba de comer.

• Hora. Puede existir variabilidad a lo largo del día y de la noche.

• Estrés y ansiedad. Pueden afectar a la sustancia que se pretende analizar.

• Postura del paciente. Los resultados pueden verse afectados por la redistribución de líquido
corporal.

• Efectos del ejercicio. Los ejercicios extenuantes pueden liberar enzimas tisulares.

• Historia clínica. Las infecciones y/o las lesiones tisulares pueden influir en los resultados
bioquímicos, con independencia del proceso patológico que se esté investigando.

• Embarazo. Algunos valores de referencia se ven alterados.

• Ciclo menstrual. Las concentraciones hormonales varían a lo largo del ciclo menstrual.

• Ingesta de fármacos. Los fármacos pueden inducir efectos específicos sobre la

concentración plasmática de algunas sustancias.

Importancia de mantener un control de calidad

El propósito del sistema de control de calidad es monitorear procesos analíticos, detectar

errores analíticos durante el análisis y evitar informar valores incorrectos del paciente. Los
métodos analíticos se monitorean de forma normal al medir materiales de control estables y
comparar después los valores medidos con su valor esperado. El compromiso momentáneo
es importante a fin de asegurar un sistema adecuado para el monitoreo y mejoramiento del
desempeño del laboratorio.

Los materiales de control de calidad se deben comportar como muestras reales, estar
disponibles en cantidad suficiente para durar por lo menos un año, ser estables durante ese
período, estar disponibles en volúmenes de viales convenientes y tener una variación mínima

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en concentración y composición de un vial a otro. El material de control debe parecerse
mucho a la muestra que está simulando tanto en el aspecto físico como químico. El material
de control se debe probar de la misma manera que las muestras de pacientes. Los materiales
de control deben abarcar el alcance clínicamente importante de las concentraciones de
analitos. Los niveles de control deben estar en los niveles de decisión apropiados; por
ejemplo, para el sodio, podrían estar en 130 y 150 mmol/L, niveles que definen hiponatremia
e hipernatremia. Para control de calidad de química general, suelen emplearse dos niveles de
control (uno que abarque un rango normal y uno que abarque un rango patológico).

Casi todos los materiales de control preparados de forma comercial son liofilizados y
requieren reconstitución antes de usarse. En la reconstitución, el diluyente se debe agregar
con cuidado y mezclar. El mezclado incompleto produce una partición del líquido
sobrenadante y el sedimento subyacente, y dará como resultado valores de control
incorrectos. Con frecuencia, el material reconstituido será más turbio que la muestra real del
paciente.

Tarea
1. Realice un dibujo de los componentes del espectrofotómetro y describa la función de
cada uno.
2. Mencione los tipos de métodos analíticos en bioquímica clínica.
3. Describa los tipos de:
- Blancos
- Estándares
- Sueros controles aplicados a la determinación de los análisis de los diferentes
parámetros bioquímicos.

Bibliografía
1. Bishop M. Química Clínica. Principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edición.
Ed, Mc Graw Hill.
2. Gaw A., Murphy M., Srivastava R., Cowan R., & O’ Reilly D. Bioquímica Clínica. Texto
y atlas en color. Quinta edición. Ed, Elsevier.
3. Suardíaz J., Cruz C. & Colina A. (2004). Laboratorio clínico. La Habana, Cuba. Ed,
Ciencias Médicas. Pag, 42-75.

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