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Hypocrea phyllostachydis y su anamorfo Trichoderma, una nueva especie

bambusícola de Francia

Artículo en Mycological Progress - febrero de 2004

DOI: 10.1007/s11557-006-0073-0

CITACIONE LEA
S
317
15

3 autores, entre ellos:

Priscila Chaverri
Universidad Estatal de Bowie
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30 CHAVERRI, CANDOUSSAU & SAMUELS: Hypocrea phyllostachydis sp. nov.

Hypocrea phyllostachydis y su anamorfo Trichoderma, una

nueva especie bambusícola de Francia

Priscila CHAVERRI1,*, Françoise CANDOUSSAU2 y Gary J. SAMUELS3

Hypocrea phyllostachydis se recolectó en la especie de bambú Phyllostachys bambusoides en el suroeste de Francia (Dept.
Pyréneés Atlantiques). Se distingue de otras especies morfológicamente similares por los pequeños conidios subglobosos o
ampliamente elipsoidales y las pequeñas ascosporas. Los conidióforos del estado Trichoderma de H. phyllostachydis no se
ramifican de forma piramidal, como es típico de la mayoría de las especies de Trichoderma. Más bien, tiene un patrón
de ramificación irregular, con un eje central largo y ramas secundarias laterales relativamente cortas. Se presenta una clave
de las especies de Hypocrea con ascosporas verdes de Francia.
Novedad taxonómica: Hypocrea phyllostachydis Chaverri & Candoussau

H
10300 Baltimore Ave, Beltsville, Maryland 20705, USA.
ypocrea Fr. y su anamorfo Trichoderma Pers. * Autor correspondiente: Fax: +1 (301) 504-5810; correo electrónico:
(Hypocreaceae, Hypocreales, Ascomycota) son priscila@nt. ars-grin.gov
hongos comunes en el medio ambiente. Pueden
consultarse en
puede encontrarse en el suelo, sobre madera en
descomposición y otros hongos, pero raramente sobre
hojas o sustratos monocotiledóneos. El teleomorfo suele
ser un estroma carnoso en forma de cojín, de color brillante
o claro, a veces casi negro, que no supera los 5 mm de
diámetro, aunque los estromas de algunas especies
pueden tener varios centímetros de extensión e incluso
forma de garrote. Los peritecios están completamente
inmersos en el estroma. Los ascos son cilíndricos y las
ascosporas son uniseptadas, desarticulándose al principio de
su desarrollo para dar lugar a 16 ascosporas parciales que son
hialinas o verdes, generalmente verrugosas o espinosas. Los
ana- morfos de Hypocrea tienen una morfología muy
variable, pero en general son especies de Trichoderma.
Tienen fiálides hya- línea formadas en conidióforos fértiles
expuestos. Los conidios son generalmente lisos,
raramente ornamentados, típicamente elipsoidales a casi
oblongos, raramente globosos, mayoritariamente verdes o
hialinos, raramente amarillos. Si se forman clamidosporas,
suelen ser de globosas a subglobosas y se forman dentro o
en las puntas de las hifas.

1 The Pennsylvania State University, Department of Plant Pathology,

Buckhout Laboratory, University Park, Pennsylvania 16802,
USA. Dirección actual: United States Department of Agriculture,
Agricul- tural Research Service, Systematic Botany and Mycology
Labora- tory, Rm. 304, B-011A, 10300 Baltimore Ave, Beltsville,
Maryland 20705, USA.
2 53, rue Aristide Briand, F-64000 Pau, Francia.
3 United States Department of Agriculture, Agricultural Research Ser-
vice, Systematic Botany and Mycology Laboratory, Rm. 304, B-011A,
© DGfM 2004
Mycological Progress 3(1): 29-36, febrero de 2004
El presente artículo trata de una especie de Hypocrea 29
con ascosporas verdes y estromas parduscos que se
encontró en tallos en descomposición del bambú
Phyllostachys bambusoides Siebold & Zucc. (Poaceae,
Gramineae) en el suroeste de Francia (Dept. Pyrénées
Atlantiques). La mayoría de las especies de Hypocrea/
Trichoderma se encuentran en sustratos leñosos en
descomposición; las especies en sustratos
monocotiledóneos son raras. Entre las especies de
Hypocrea descritas en gramíneas y plantas
monocotiledóneas se encuentran H. bambusella Höhnel,
H. muroiana Hino & Katu- moto, H. placentula W.B.
Grove, H. pilulifera J. Webster & Rifai, H. spinulosa
Fuckel, H. tuberculata Pat., H. saccharalis Racib. y H.
virescentiflava Speg. De estas especies, sólo H. spinulosa,
que se encuentra en gramíneas de regiones alpinas y
boreales, y H. virescentiflava tienen ascosporas verdes. Los
estromas tuberculados amarillentos de H. spinulosa la
distinguen fácilmente de la nueva especie de
Phyllostachys. Hypocrea vires- centiflava se describió en
Brasil y tiene un estroma amarillo pálido. Hypocrea
bambusella, H. muroiana, H. placentula,
H. pilulifera, H. tuberculata y H. saccharalis tienen
ascosporas hialinas.
La mayoría de los estudios recientes sobre
Hypocrea/Trichoderma incluyen caracteres fenotípicos y
basados en el ADN para distinguir las especies. El uso de
herramientas moleculares ha ayudado a confirmar
propuestas taxonómicas basadas en la morfología, como
algunas secciones de Trichoderma de Bis- sett (BISSETT 1984,
1991a, b, c, 1992) o a descubrir nuevas especies crípticas
(CHAVERRI et al. 2003, DODD et al. 2002, KUHLS et al. 1997,
LIECKFELDT et al.
1998, 1999, 2001, SAMUELS et al. 1998, 2002).
Comparación
La comparación de la morfología de la Hypocrea sobre
Phyllostachys con otras especies que se encuentran sobre
sustratos monocotiledóneos y especies filogenéticamente
estrechamente relacionadas indica que no está descrita.
Sobre la base de caracteres fenotípicos, incluyendo

© DGfM 2004
30 CHAVERRI, CANDOUSSAU & SAMUELS: Hypocrea phyllostachydis sp. nov.

En este trabajo se describe la nueva especie de Hypocrea en
Phyllostachys como Hypocrea phyllostachydis. Se presenta
una clave de las especies de Hypocrea con ascosporas
verdes de Francia y se está preparando un trabajo más
amplio que incluye todas las especies de Hy- pocrea con
ascosporas verdes.
Material y métodos
que surgen las fiálides (= metulae = hifa subyacente),
presencia de clamidosporas y anchura de las clamidosporas.
Las mediciones de los caracteres continuos se realizaron a
partir de imágenes utilizando la versión beta 4.0.2 de Scion
Ima- ge (Scion Corporation, Frederick, Maryland). El aspecto
de la colonia se describió a partir de CMD a 20 °C y PDA a
25 °C, incluyendo la formación y la forma de mechones o
pústulas. La ter- minología del color se obtuvo de KORNERUP &
WANSCHER (1978).

Aislados y muestras
Los aislados de la nueva especie, H. phyllostachydis,
utilizados en este estudio son G.J.S. 92-123 (ex
espécimen holotipo BPI 802617) y G.J.S. 92-81 (ex
espécimen BPI 802861). Ambos aislados han sido
depositados en la Colección Americana de Cultivos Tipo
(ATCC), en el Centro de Investigación de Cereales y
Oleaginosas del Este, Ottawa, Canadá (DAOM), y en el
Centraalbureau voor Schimmelcultures (CBS). Los
aislamientos de una sola ascospora a partir de colecciones
frescas de Hypocrea se realizaron en CMD (agar de
harina de maíz Difco + dextrosa al 2 % + agua destilada +
solución antibiótica al 1 % (sulfato de estreptomicina
Sigma al 0,2 % + sulfato de neomicina Sigma al 0,2 % +
agua destilada) con ayuda de un micromanipulador. Estos
cultivos también se mantienen en el BPI en tubos inclinados
de CMA (agar de harina de maíz Difco) a 4 °C y en nitrógeno
líquido en viales con un 10 % de glicerol.

Crecimiento y caracterización de colonias

Se realizaron ensayos de crecimiento para determinar la
tasa de crecimiento y la temperatura óptima para el
crecimiento siguiendo el protocolo de SAMUELS et al. (2002)
en PDA (agar Difco patata-dextrosa) y agar sintético bajo en
nutrientes (SNA, NIRENBERG 1976). El radio de co-lonía se
midió a las 24, 48 y 72 h a 15, 20, 25, 30 y 35 °C. Cada
experimento de velocidad de crecimiento se repitió tres
veces. Cada experimento de velocidad de crecimiento se
repitió tres veces y los resultados se promediaron para
cada aislado. También se anotaron el momento de la
primera aparición de conidios verdes, la presencia de
pigmentación amarilla de los conidios jóvenes, la presencia de
pigmento difusor en el agar, el olor y el aspecto de la
colonia.

Observaciones morfológicas
Las observaciones morfológicas del anamorfo se tomaron de
cultivos realizados en CMD en placas Petri de plástico
ventiladas de 9 cm de diámetro en una incubadora a 20 °C,
con 12 h de luz fluorescente y 12 h de oscuridad en un plazo
aproximado de una semana. Se midieron los siguientes
caracteres: anchura de la base de la fiálide, anchura de la
fiálide en el punto más ancho, longitud de la fiálide y relación
longitud/anchura (L/W), longitud del conidio, anchura y
relación longitud/anchura (L/W), anchura de la célula de la
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Mycological Progress 3(1): 29-36, febrero de 2004 29

Los especímenes de herbario de la Hypocrea se Sequencher 4.1 (Gene Codes, Wisconsin). Se utilizó Clustal
rehidrataron brevemente en KOH al 3%. Los estromas X 1.81 (THOMPSON et al. 1997) para alinear las secuencias, y
rehidratados se apoyaron en Tissue-Tek O.C.T. Compound luego se refinó el alineamiento a mano. Las secuencias se
4583 (Miles Inc., Elkhart, In- diana) y se seccionaron a un depositaron en GenBank como AY39198, AY391927, para el
grosor de aprox. 15 µm con un micrótomo de congelación. Se aislado G.J.S. 92-81. Otros aislados de referencia de
evaluaron los siguientes caracteres teleomorfos: diámetro, Hypocrea/ Trichoderma, a saber, H. cf. chlorospora G.J.S.
altura, color y forma del estroma; textura de la superficie 95-203, T. polysporum G.J.S. 90-4 y T. minustisporum
del estroma; forma, longitud y anchura del peritecio;
reacción al 3% de KOH, color y anchura de la pared del
peritecio; longitud del canal ostiolar; reacción del color
de la región externa del estroma al 3% de KOH; forma,
longitud y grosor de la pared de las células de la región
externa, media (inmediatamente por debajo de la región
externa) e interna (por debajo de los peritecios) del estroma;
longitud y anchura del ascus; longitud y anchura de la
parte distal y proximal de la ascospora. Las medidas de
los caracteres continuos también se recogieron utilizando
el programa de captura de imágenes Scion Image beta
4.0.2. Los intervalos de confianza (a=0,05) y los valores
mínimos y máximos de los caracteres morfológicos
anamorfos y teleomorfos medidos se calcularon con Systat
8.0 (SPSS, Inc., Illinois).

Análisis filogenético molecular

En este estudio se utilizaron las secuencias producidas en
CHAVERRI et al. (2003), incluido G.J.S. 92-123, además de
otro aislado de la nueva especie, G.J.S. 92-81, para
mostrar la relación filogenética con otras especies de
Hypocrea/Trichoderma. Todas las demás secuencias se
obtuvieron de GenBank. Las técnicas de aislamiento de
ADN, cebadores, PCR y secuenciación se describen en
CHAVERRI et al. (2003). La extracción del ADN genómico
se realizó utilizando Puregene™ Genomic DNA
Isolation Kit (Gentra Systems, Minneapolis, Minnesota). Se
amplificaron y secuenciaron dos regiones genéticas
codificantes parciales, a saber, la subunidad ARN polimerasa
II (RPB2) y el factor de elongación de la traducción 1-alfa
(EF- 1a). Los cebadores utilizados para la PCR y la
secuenciación fueron para RPB2: fRPB2-5F (5'-
GA(T/C)GA(T/C)(A/C)G
(A/T)GATCA(T/C)TT(T/C)GG-3') y fRPB2-7cR (5'-CC-
CAT(A/G)GCTTG(T/C)TT(A/G)CCCAT-3') (LIU et al.
1999); y para EF- 1a: EF1-983F (5'-GC(C/T)CC(C/T)GG
(A/C/T)CA(C/T)GGTGA(C/T)TT(C/T)AT-3') (CARBONE &
KOHN 1999) y EF1-2218R (5'-ATGAC(A/G)TG(A/G)GC
(A/G)AC(A/G)GT(C/T)TG-3') (S. A. Rehner, com. pers.).
La purificación de los productos de PCR se realizó utilizando
el kit de purificación de PCR QIAquick® (Qiagen, Inc.,
Valencia, California) y el kit de extracción en gel QIAquick®,
cuando se amplificó más de una banda. La secuenciación fue
realizada por la DNA Sequencing Facility (Center for
Agricultural Biotechonology, University of Maryland,
College Park, Maryland) utilizando Perkin-Elmer big dye
terminators con dITP (Applied Biosystems) y un
secuenciador de ADN Ap- plied Biosystems modelo
3100. Las secuencias se editaron y ensamblaron con
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Mycological Progress 3(1) / 2004 31

CBS 901.72; sus secuencias se depositaron en GenBank distinta de otras especies descritas.
con los números de acceso: AY391993, 391936; 392010,
481589; y 392209, 48158, respectivamente.
Los análisis filogenéticos se realizaron con PAUP* 4.0
Debate
b8 (SWOFFORD 1999) utilizando las secuencias de
CHAVERRI et al. (2003) presentaron una filogenia de varias
Hypomyces stephanomatis C.T. Rogerson & Samuels y
especies de Hypocrea/Trichoderma con alargamientos de
Nectria cinnabarinna (Tode : Fr.) Fr. como grupo externo
conidióforos.
(números de acceso del GenBank AF534633, AF545567,
AF534632, AF545566). Vecino-
Los análisis de unión (NJ) se realizaron utilizando el modelo
Kimura-2-pa- rameter. Los valores Bootstrap se calcularon
a partir de 1.000 réplicas. También se realizó un análisis
de máxima parsimonia (MP) utilizando una búsqueda
heurística, con un árbol inicial obtenido mediante adición
por pasos, con 1000 secuencias de adición aleatoria, árbol-
bi-sección-reconexión como algoritmo de intercambio de
ramas y MULTREES desactivado. Los valores Bootstrap de
1000 réplicas se calcularon utilizando una búsqueda rápida de
adición por pasos. Se calculó un árbol de consenso utilizando
la regla de la mayoría del 50%. Dado que el propósito de este
artículo es describir una nueva especie y mostrar su
relación con otras especies de Hypocrea/Trichoderma, sólo
se presenta un árbol con los datos combinados de RPB2 y
EF-1α.

Resultados

Se analizó un total de 1061 pb, 698 pb de EF-1α y 903 pb

de RPB2. Se realizaron análisis filogenéticos por separado
de ambos genes (RPB2 y EF- 1α) que arrojaron topologías
similares. Por lo tanto, a efectos de este artículo, sólo se
mostrará un análisis combinado. Los análisis de parsimonia
de EF-1α y RPB2 combinados produjeron tres árboles
igualmente parsimoniosos, con 2.494 pasos, 1.013
caracteres constantes, 147 caracteres parsimoniosamente
desinformativos y 441 caracteres parsimoniosamente
informativos. El índice de consistencia (IC) es de 0,35, el
índice de retención (IR) es de 0,54 y el índice de
homoplasia (IH) es de 0,65. El análisis NJ dio mejores
valores bootstrap para las ramas internas, en comparación
con el MP, que tuvo valores bootstrap más bajos. Los
análisis NJ y MP de RPB2 y EF-1α muestran que la
relación de H. phyllostachydis con otras especies de
Hypocrea/Tricho- derma no está respaldada por los valores
bootstrap (Fig. 1). Hypocrea phyllostachydis se encuentra en
un clado (Clado B en CHAVERRI et al. 2003 y KINDERMANN et
al. 1998) que incluye otras especies con anamorfosis tipo
paquibasio y la mayoría de las especies de Hypocrea con
ascosporas verdes. El clado B está apoyado por un 96% de
bootstrap en el árbol NJ pero no está apoyado por bootstrap en
el árbol MP; sin embargo, está presente en el consenso de la
regla de la mayoría del 50%. Los análisis de múltiples
caracteres fenotípicos, incluidos los datos de anamorfismo,
teleomorfismo y crecimiento, y los datos de secuencias de
ADN de dos genes demuestran que H. phyllostachy- dis es
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32 CHAVERRI, CANDOUSSAU & SAMUELS: Hypocrea phyllostachydis sp. nov.

y conidios verdes, basándose en las genealogías RPB2 y anamorfo de H. lixii/T. harzianum se describieron y
EF-1α. Una de las secuencias de referencia utilizadas en redescribieron en CHAVERRI & SAMUELS (2002) y SAMUELS et
ese estudio fue un aislado de H. phyllostachydis G.J.S. al. (2002), respectivamente. Trichoderma aggressivum se
92-123, identificado como H. cf. dichromospora Doi describe en SAMUELS et al. (2002), pero su teleomorfo no
(véase la Tabla 1 y las Figuras 2-7 en CHAVERRI et al. 2003). descrito se ha encontrado recientemente sobre madera en
Hypocrea dichromospora se describió en Ja- pan con descomposición y otros hongos. La descripción
estromas patelados de color marrón amarillento pálido, morfológica de H. phyllostachydis se detalla en la sección
ascosporas verdes y un anamorfo similar a un paquibasio siguiente.
(DOI 1968). Aunque no se dispone de especímenes y
cultivos de H. dichromospora para su comparación, la
descripción de la especie dada por DOI (1968) sugiere una
similitud entre H. dichromospo- ra y la especie de
Phyllostachys. Las principales diferencias entre ellas son
el color del estroma y el tamaño de los conidios y las
ascosporas. CHAVERRI et al. (2003) obtuvieron pruebas
débiles de una estrecha relación filogenética entre el
aislado
G.J.S. 92-123 y T. spirale Bissett; sin embargo, estas
especies son morfológicamente distintas.
La combinación de múltiples caracteres morfológicos y
moleculares es útil para el reconocimiento de especies dentro
de Hypo- crea/Trichoderma. El examen de los especímenes
de Hypocrea/Trichoderma y los análisis de fenotipo y
genotipo muestran que aunque H. phyllostachydis es
similar a H. li- xii/T. harzianum, T. aggressivum y H.
dichromospora, no deja de ser distinta. La morfología del
estroma de H. phyllostachydis se parece a la de Hypocrea
lixii Pat./T. har- zianum Rifai y a la del teleomorfo no
descrito de Hypocrea de
T. aggressivum Samuels & W. Gams. Los teleomorfos de
H. lixii/T. harzianum, el teleomorfo de T. aggressivum y la
nueva especie de Hypocrea difieren en el tamaño de las
ascosporas y el aspecto del estroma. Los teleomorfos de H.
lixii/T. harzianum y T. aggressivum tienen ascosporas más
grandes y estromas más oscuros y opacos que los de H.
phyllostachydis. El anamorfo de la nueva especie de
Hypocrea también es similar al de T. aggressivum y H.
lixii/T. harzianum. Los anamorfos de H. lixii/T. harzianum
y T. aggressivum son casi indistinguibles desde el punto de
vista filogenético y están estrechamente relacionados
desde el punto de vista filogenético (SAMU- ELS et al.
2002). Hypocrea lixii/T. harzianum y T. aggresivum tienen
conidióforos que se ramifican en forma piramidal, con un
eje principal relativamente corto y ramas la- terales apiñadas
y a menudo emparejadas. Las fiálides suelen estar en
verticilos de 2-4 y se mantienen en ángulo recto con
respecto a las hifas de las que surgen (métulas, hifas
subtendentes). Los conidios de estas dos especies son de
subglobosos a ovoides, lisos, verdes, de 2,7-3,5 x 2,5-3,2
µm, y con una relación longitud/anchura de 1,0-1,5.
Además, a 25 °C después de 3 días en PDA, el radio de
la colonia es de aproximadamente 50-60 mm. Hypocrea
phyllostachydis tiene un patrón de ramificación más
irregular, con un eje central largo con ramas laterales
relativamente cortas, y tasas de crecimiento más lentas
que las de T. harzianum y T. aggressivum. El teleomorfo y el
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Mycological Progress 3(1) / 2004 33

Fig. 1: Árbol de vecindad de los datos combinados de las secuencias EF-1α y RPB2. Los asteriscos (*) representan nodos
que también estaban presentes en el análisis de Máxima Parsimonia y apoyados por valores bootstrap > 50 %. Todos los
clados estaban presentes en el árbol de consenso de la regla de la mayoría del 50 %. Los valores bootstrap proceden de
1000 réplicas. Las flechas grises indican las especies de Hypo- crea/Trichoderma con ascosporas verdes que se han
encontrado en Francia. La nueva especie se indica en negrita
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34 CHAVERRI, CANDOUSSAU & SAMUELS: Hypocrea phyllostachydis sp. nov.

Figs. 2-10: Teleomorfo y anamorfo de Hypocrea phyllostachydis. 2, 3. Estroma. 4. Sección longitudinal del estroma. 5.
Tejido de la superficie del estroma. 6. Tejido del estroma por debajo de los peritecios. 7. Ascos y ascosporas. 8, 9.
Conidióforos en CMD a 20 °C. 10. Colonia sobre PDA a 25 °C después de 2 semanas. Figs. 2-4, 8-10. Holotipo, BPI 802617
(aislado G.J.S. 92-123). Figs. 5-7. BPI 802861 (iso-
último G.J.S. 98-21). Barras: 2, 3 = 1 mm; 4 = 100 µm; 5-9 = 10 µm

Taxonomía (3,5) x (2,0) 2,3-2,5 (3,0) µm, longitudo/crassitudo (0,9) 1,2-1,3

Hypocrea phyllostachydis Chaverri et Candoussau, sp.
nov. Figs. 2-13
Stromata rufobrunnea, (0,5) 0,9-1,0 (1,5) mm. Ascosporae bicellu-
lares, verruculosae, ad septum disarticulatae, atrovirentes, parte dis-
tali globosa vel subglobosa, (3,0) 3,5-4,0 (4,5) x (3,0) 3,5-4,0 (4,5)
µm, parte proximali oblonga vel cuneiformi, (3,0) 4,0 (5,0) x (2,5)
3,0-3,5 (4,0) µm. Anamorfo Trichoderma sp. Phialide (4,5) 6,5-7,0
(12,0) x (2,5) 3,0-3,5 (4,0) µm, longitudo/crassitudo (1,5) 2,0-2,2
(3.4). Conidios subglobosa vel ellipsoidea, viridia, glabra, (2.3) 3.0
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(1,8). Incrementum radii in agaro dicto 'PDA' post 72 h 15 °C =
10-16 mm, 20 °C = 22-25 mm, 25 °C = 28-34 mm, 30 °C = 12-21
mm, 35 °C = 0-1 mm. Holotipo: BPI 802617.
Anamorfo: Trichoderma sp.
Estromas dispersos, solitarios, pulvinados, de contorno
circular a irregular, (0,5) 0,9-1,0 (1,5) mm de diámetro (n =
27), 0,5-0,7 (0,8) mm de altura (n = 15), ampliamente
adheridos, superficie lisa, algo gelatinosa, cerosa y translúcida,
con pequeños
Mycological pro- peritoneales.
Progress 3(1) / 2004 35

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36 CHAVERRI, CANDOUSSAU & SAMUELS: Hypocrea phyllostachydis sp. nov.

Figs. 11-13: Hypocrea phyllostachydis anamorfa. 11, 12. Conidióforos. 13. Conidios. Fig. 11. Aislado G.J.S. 92-81. Figs. 12,
13. Aislado G.J.S. 92-123 (holotipo). Barras = 10 µm

dimórficas, parte distal globosa a subglobosa (3,0) 3,5-4,0

Tubérculos de color marrón rojizo pálido a oscuro, más (4,5) x (3,0) 3,5-4,0 (4,5) µm, parte proximal generalmente
oscuro en KOH, aberturas ostiolares evidentes debido a las oblonga a cuneiforme, (3,0) 4,0 (5,0) x (2,5) 3,0-3,5 (4,0)
ascosporas verdes. Capa más externa del estroma compuesta µm (n = 60).
por células angulares de paredes ligeramente gruesas, (4,0)
7,0-7,5 (11,5) µm diam (n = 60), paredes
(0,5) 1,0-1,5 (2,0) µm de espesor (n = 50). Tejido entre la
peri- tecia y debajo de la capa más externa compuesto por
células hialinas, que se vuelven marrón rojizo claro en
KOH, de textura an- gularis, células (3,5) 6,0-6,5 (10,0) µm
diam (n = 65), paredes (0,3) 0,5-0,7 (1,0) µm de grosor (n =
55). Tejido interno debajo de la peri-tecia de textura
angularis, hialino, volviéndose marrón rojizo claro en
KOH, (4,5) 10,5-12,5 (23,5) µm diam (n = 62),
paredes (0,4) 0,5-0,6 (0,9) µm de espesor (n = 56).
Peritecios completamente inmersos en el estroma,
generalmente muy juntos o ligeramente separados,
subglobosos, 101-121 (127) x (60) 61-84
(99) µm (n = 10), pared compuesta de células compactadas,
color ligeramente cambiante en KOH, (8,5) 13,5-16,5 (21,0)
µm de espesor (n = 20), canal ostiolar (25) 28-37 (40) µm de
largo (n = 10). Ascos cy-
líndricas, uniseriadas, (57,0) 69-73,0 (90,0) x (3,0) 4,0-4,5
(6,0) µm (n = 50). Ascosporas parciales verdes, verrugosas,
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Colonias en CMD a 20 °C después de
aproximadamente una semana, planas, con pocos penachos
discretos, pulvinados y compactos de 1-2 mm de diámetro
que se forman en los bordes o los lados de la placa, conidios
producidos después de aproximadamente 2 semanas, masas
conidiales de color verde grisáceo; sin olor
característico; sin pigmentación del agar. Patrón de
ramificación del conidióforo irregular, con ramas
secundarias cortas, generalmente no emparejadas, y con
fiálides que surgen de hifas subyacentes, raramente so-
litarias; fiálides intercalares no observadas; hifas
subyacentes (métulas) cilíndricas; elongaciones estériles del
conidióforo raramente presentes. Fialides cortas, en forma de
petaca, formadas en verticilos de 2-4, (4,5) 6,5-7,0 (12,0)
µm de largo, (2,5) 3,0-3,5 (4,0) µm
en el punto más ancho, (1,7) 2,3-2,5 (3,3) µm en la base,
L/W (1,5) 2,0-2,2 (3,4) (n = 60). Conidios verdes, lisos,
subglo-
bosa a ampliamente elipsoidal, (2,3) 3,0 (3,5) x (2,0) 2,3-2,5
(3,0)
µm, L/W (0,9) 1,2-1,3 (1,8) (n = 65). No se observaron
clamidosporas.
Colonias en PDA a 25 °C después de aproximadamente
una semana con abundante micelio aéreo, con matas sueltas a
compactas dispersas por toda la placa, pero típicamente más
abundantes hacia el borde de la placa; conidios no formados
antes de aproximadamente dos semanas, máscaras
conidiales gris verdosas; sin pigmentación del agar; sin
olor característico. Radio de la colonia en PDA tras 3 d a
15 °C: 10-16 mm, 20 °C: 22-25 mm, 25 °C: 28-34 mm, 30
°C: 12-21 mm, y

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38 CHAVERRI, CANDOUSSAU & SAMUELS: Hypocrea phyllostachydis sp. nov.

Clave de las especies de Hypocrea con ascosporas verdes presentes en Francia

1 Estroma de color claro, de amarillo pálido a marrón pálido; sobre madera u otros hongos..................................................2
2 Estroma amarillo brillante, más tarde anaranjado a marrón pálido, gelatinoso; anamorfo gliocladio con conidios
retenidos en gotas de líquido; conocido de Europa; sobre madera... H. gelatinosa (Tode: Fr.) Fr.
2 Estroma amarillo pálido a amarillo más oscuro; gelatinoso o no; anamorfo típico Trichoderma....................................3
3 Estroma amarillo pálido, algo ceroso o transparente; ascosporas parciales monomorfas globosas a subglobosas;
conidióforos frecuente e irregularmente ramificados y formando un retículo; conidios 4,5-4,8 x 4,0 µm, L/P 1,2;
sobre madera descorticada; cosmopolita . H. chlorospora Berk. & Curtis
3 Estroma amarillo pálido a amarillo grisáceo, opaco; parte de las ascosporas dimórfica, parte distal globosa a
subglobosa, parte pro- ximal en forma de cuña; conidióforos rectos y ramificados uniformemente, ramas a
menudo emparejadas, típicamente con elongaciones estériles o fértiles; conidios 4,5-4,7 x 3,5-3,7 µm, L/W 1,3;
sobre madera y otros hongos; conocido de Norteamérica y Europa (anamorfo T. strictipile Bissett) H.
strictipilosa Chaverri & Samuels
1 Estroma de color oscuro, marrón oscuro a casi negro; sobre madera, bambú u otros hongos..............................................4
4 Estroma marrón muy oscuro o verde, casi negro; conidióforos ramificados en forma piramidal regular; conidios
globosos a subglobosos, 3,0-3,2 x 2,7-3,0 µm, L/W 1,0-1.2; radio de la colonia en PDA después de 3 d a 25 °C
50-60 mm; sobre madera y otros hongos; cosmopolita (anamorfo T. harzianum Rifai). H. lixii Pat.
4 Estroma de marrón pálido a marrón rojizo oscuro; anamorfo con conidióforos ramificados irregularmente; conidios
subglobosos a anchamente elipsoidales, ca 3,0 x 2,3-2,5 µm, L/W 1,2-1,3; radio de la colonia en PDA después de 3
d a 25 °C 28-34 mm; en tallos de la especie de bambú Phyllostachys bambusoides; conocida del suroeste de Francia
........................................................................................................................................................H. phyllostachydis
PEET 9712308 a la Pennsylvania State University, Dept. of
Plant Pathology "Monographic Studies of Hypocrealean
Fungi: Hypocrea e Hypomyces". Agradecemos a la Dra.
Amy Y. Rossman sus comentarios sobre el artículo.
35 °C: 0-1 mm (n = 6). Radio de la colonia en SNA
después de 3 d a 15 °C: 4-13 mm, 20 °C: 15-21 mm, 25 °C:
34-37 mm, 30 °C:
12-23 mm, y 35 °C: 0 mm (n = 6).
Hábitat: Culmos en descomposición de Phyllostachys
bambusoides.
Distribución conocida: Francia.

Material examinado: FRANCIA. PYRÉNÉES

ATLANTIQUES: Parc du Château D'Uhart-Mixe, 20 km S de
Sauveterre, cerca de la frontera española; sobre Phyllostachys
bambusoides; 26 sep 1992; F. Candoussau (FC 250) & J.P.
Chaumeton (BPI 802617 holotipo; cul- ture: G.J.S. 92-123 = ATCC
MYA-3066 = CBS 814071 = DAOM
232101). - Osserain, Sauveterre, Bambous d'Osserain; sobre
Phyl- lostachys bambusoides; 23 ago 1992; J.P. Chaumeton (FC 249)
(BPI 802861; cultivo: G.J.S. 92-81).

Notas: Esta especie se reconoce por el estroma ceroso,

algo transparente, que se vuelve más oscuro y rojizo en
KOH, y por las ascosporas relativamente pequeñas. El
anamorfo se distingue de otros anamorfos similares (por
ejemplo, T. harzianum y T. aggressivum) por la ramificación
irregular del conidióforo, los pequeños conidios
subglobosos y el crecimiento más lento en PDA y SNA.
Además, pocas especies con ascosporas verdes crecen en
huéspedes monocotiledóneos, como Phyllostachys.

Agradecimientos

Este estudio ha sido financiado en parte por la beca NSF-

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Mycological Progress 3(1) / 2004 39

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