SUSCEPTIBILIDAD DE Fusarium oxysporum ENDÓFITO DE Vanilla planifolia

Jacks A FUNGICIDAS

Nelly Abigail González Oviedo348, Lourdes Iglesias Andreu348, Andrés Rivera Fernández349,
Felipe Roberto Flores de la Rosa350 y Mauricio Luna Rodríguez349*

Resumen

La vainilla es una orquídea de origen mexicano, la cual se aprovecha en diversas

industrias en todo el mundo. Su principal patógeno es Fusarium oxysporum f. sp.
vanillae, el cual puede hacer perder más del 80% de la producción. Actualmente
hay pocas herramientas que impidan la infección de la planta por parte del
patógeno. El objetivo del trabajo fue analizar la susceptibilidad de cepas de
Fusarium oxysporum a distintas dosis de tres fungicidas sistémicos y uno de
contacto (benomilo, carbendazim, tiofanato metílico y clorotalonil). Las pruebas de
susceptibilidad mostraron que las cepas provenientes de Veracruz, Nayarit y
Oaxaca, son altamente resistentes al clorotalonil y al tiofanato metílico, en cambio
son susceptibles a los fungicidas benomilo y carbendazim. Estos resultados son
congruentes con otros estudios en diversas formas especiales, aunque Fusarium
oxysporum f. sp. vanillae ha sido poco tratado con fungidas, al ser la vainilla un
cultivo secundario, esto puede suponer que la resistencia se ha conferido de forma
natural.

Palabras clave: Fusarium oxysporum, benomilo, carbendazim, clorotalonil,

tiofanato metílico, resistencia

348
Instituto de Biotecnología y Ecología Aplicada (INBIOTECA). Universidad Veracruzana.
349
Facultad de Ciencias Agrícolas. Universidad Veracruzana
350
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias C.E. Ixtacuaco
*mluna@uv.mx

1952
Introducción

La vainilla (Vanilla planifolia Jacks) es una orquídea mexicana, cultivada en países

como Australia, Indonesia, Islas Reunión y México (Pinaria et al., 2015), las grandes
extensiones de producción se explican por su amplio uso en distintas industrias
como la cosmética, farmacéutica y en especial la gastronómica. Es un cultivo con
una estrecha variabilidad genética debido a su reproducción asexual (Adame-
García et al., 2015), lo que le impide tener un armamento eficiente para protegerse
de diversos patógenos, ejemplo de esto es el hongo Fusarium oxysporum, el cual es
principal agente causal de la enfermedad pudrición de tallo y raíz (Koyyappurath et
al., 2015). Este padecimiento causa pérdidas de vainillales en todo el mundo (Pinaria
et al., 2010), haciendo indispensable el desarrollo de técnicas capaces de controlar
al patógeno. A pesar de los avances biotecnológicos, el control químico sigue siendo
el modo más eficaz para contrarrestar el ataque de fitopatógenos. En el caso de los
hongos se utilizan fungicidas sistémicos capaces de introducirse en la planta para
atacar al hongo, y fungicidas de contacto que crean condiciones poco aptas fuera
de la planta impidiendo que el hongo se establezca sobre ella. Los fungicidas más
utilizados para F. oxysporum son carbendazim, benomilo y tiofanato metílico, como
fungicidas sistémicos y clorotalonil como fungicida de contacto (Yossen y Conles,
2014). A pesar de la eficiencia de dichos plaguicidas, con el paso del tiempo y su uso
constante, los organismos son capaces de generar resistencia, disminuyendo o
erradicando su efecto (Frac et al., 2016). El objetivo de este trabajo fue estudiar la
susceptibilidad del hongo F. oxysporum patógeno y no patógeno ante tres
diferentes concentraciones de los fungicidas: benomilo, carbendazim, tiofanato
metílico y clorotalonil.

1953
Materiales y métodos

Aislamientos de Fusarium oxysporum

Se utilizaron nueve aislamientos de Fusarium oxysporum, tres patógenos y uno no
patógeno de cada sitio, provenientes de Veracruz, Nayarit y Oaxaca previamente
identificados morfológica y genéticamente por Adame-García et al. (2015), Casillas-
Isiordia et al. (2017) y Flores-de la Rosa et al. (2017), conservados en el cepario del
Laboratorio de Genética e Interacciones Planta-Microorganismos de la Facultad de
Ciencias Agrícolas de la Universidad Veracruzana. Para activar dichas cepas, se
sembraron de dos a tres replicas por cada aislado en cajas Petri con medio PDA,
además se re-verificó la especie utilizando The Fusarium Laboratory Manual a los
siete días después de la siembra. A los diez días de crecimiento se hicieron
suspensiones de esporas de cada cepa.

Pruebas de susceptibilidad
Se tomaron 100 μL de cada suspensión de esporas, se colocaron al centro de la caja
Petri y se vertió medio PDA por la técnica de caja vaciada. Cuando el medio se
solidificó, y con ayuda de una vara estéril, se removieron 4 círculos equidistantes de
1 cm de diámetro aproximadamente. En uno de los orificios se agregaron 10 μL de
agua, como control, y en los demás se colocaron las diluciones de uno de los
fungicidas ya sea tiofanato metílico, benomilo, carbendazim o clorotalonil; las cuales
fueron 0.5, 1 y 2.5% como tratamientos. Se dejaron crecer en cámaras de incubación
de 4 o 5 días, dependiendo la cepa y se midió el diámetro de inhibición con ayuda
de un vernier digital. Se hicieron cinco repeticiones por cada cepa por cada
fungicida.

Resultados y discusión

Todos los aislados de F. oxysporum provenientes de los tres sitios (Veracruz, Nayarit
y Oaxaca) fueron susceptibles a los fungicidas benomilo y carbendazim a partir de

1954
la menor concentración (Cuadro 1). La efectividad del carbendazim se ha descrito
con anterioridad en F. oxysporum pero en otras formas especiales como
vasinfectum, niveum, liilii, y otras más (Chung et al., 2009, Petkar et. al., 2017). Para
el fungicida tiofanato metílico la cepa JF9, no patógena proveniente de Veracruz,
fue la única susceptible. De igual manera se han reportado en otras formas
especiales la resistencia de F. oxysporum al tiofanato metílico (Petkar et al., 2017,
Chen et. al., 2014, Zhou et. al., 2016). Diversos autores atribuyen esta resistencia a
posibles mutaciones puntuales en el gen β-tubulina, por ejemplo, el cambio de una
fenilalanina por una tirosina en la posición 200 o una asparagina por una tirosina en
la posición 50. En cambio, el fungicida de contacto clorotalonil causó inhibición
solamente en las cepas JF9, Chic 3 y Chic 6, las primeras dos no patógenas.

Cuadro 1. Cuadro de susceptibilidad.

NombreProcedencia Carácter Benomilo Carbendazim Tiofanato Metílico Clorotalonil
H9 Veracruz Patógeno S S R R
JF5 Veracruz Patógeno S S R R
No
JF9 Veracruz S S S S
Patógeno
N12 Nayarit Patógeno S S R R
N3 Nayarit Patógeno S S R R
No
BC1 Nayarit S S R R
Patógeno
Chic 2 Oaxaca Patógeno S S R R
Chic 6 Oaxaca Patógeno S S R S
No
Chic 3 Oaxaca S S R S
Patógeno
S= Susceptible; R= Resistencia.

Conclusiones

Las cepas de F. oxysporum endófitas de Vanilla planifolia Jacks recolectadas

Veracruz, Nayarit y Oaxaca mostraron sensibilidad a los fungicidas carbendazim y
benomilo. Siendo los dos fungicidas altamente efectivos para el control de F.
oxysporum, con la desventaja de no discriminar entre cepas patógenas o no
patógenas. El fungicida tiofanato metílico no es efectivo para el control de la

1955
enfermedad ya que la cepa JF9 proveniente de Veracruz fue la única sensible,
además de que no es patogénica. El fungicida clorotalonil resultó poco efectivo para
el control del hongo, ya que solo causó inhibición en tres de nueve cepas, de las
cuales dos eran no patógenas. Aunque el uso del control químico para la
enfermedad de pudrición de tallo y raíz sea el más utilizado y económico, el estudio
muestra que no todos son altamente efectivos y los que si son podrían provocar un
desequilibrio entre los hongos benéficos, patógenos y neutrales endófitos de la
planta.

Agradecimientos

El primer autor agradece al Instituto de Biotecnología y Ecología Aplicada y al

CONACYT por su apoyo en sus estudios de posgrado, así como al Laboratorio de
Genética e Interacciones Planta-Microorganismos de la Facultad de Ciencias
Agrícolas de la Universidad Veracruzana por permitirle realizar gran parte de los
experimentos.

Literatura citada

Adame-García, J., R. Rodríguez-Guerra, L. Iglesias-Andreu, J. Ramos-Prado y M. Luna-

Rodríguez. 2015. Molecular identification and pathogenic variation of
Fusarium species isolated from Vanilla planifolia in Papantla Mexico.
Botanical Sciences 93(3):669-678.
Chen, Z., T. Gao, S. Liang, K. Liu, M. Zhou y C. Chen. 2014. Molecular mechanism of
resistance of Fusarium fujikuroi to benzimidazole fungicides. FEMS
Microbiology Letters, 77-84.
Chung, W. H., W. C. Chung, P. F. Ting, C.C. Ru, H.C. Huang, y J.W. Huang. 2009. Nature
of Resistance to Methyl Benzimidazole Carbamate Fungicides in Fusarium
oxysporum f. sp. lilii and F. oxysporum f. sp. gladioli in Taiwan. J Phytopathol.
157:742-747.

1956
Flores-de la Rosa, F. R., E. De Luna, J. Adama-García, L.G. Iglesias-Andreu y M. Luna-
Rodríguez. 2017. Phylogenetic position and nucleotide diversity of Fusarium
oxysporum f. sp. vanillae worldwide based on translation elongation factor 1α
sequences. Plant Pathol.
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/ppa.12847. [Consultado el 15 de
junio de 2017].
Frac M., A. Gryta, K. Oszust y N. Kotowicz. 2016. Fast and Accurate Microplate Method
(Biolog MT2) for Detection of Fusarium Fungicides Resistance/Sensitivity.
Front. Microbiol 7:489.
Koyyappurath S., T. Atuahiva, R. Le Guen, H. Batina, S. Le Squin, N. Gautheron, et al.
2015. Fusarium oxysporum f. sp. radicis-vanillae is the causal agent of root and
stem rot of vanilla. Plant Pathol. 65(4):612-625.
Petkar, A., D. B. Langston, J. W. Buck, K. L. Stevenson y P. Ji. 2017. Sensitivity of
Fusarium oxysporum f. sp. niveum to prothioconazole and thiofanate-methyl
and gene mutation conferring resistance to thiophanate-methyl. Plant
Disesase, 366-371.
Pinaria A. G., E. C. Y. Liew y L. W. Burgess. 2010. Fusarium species associated with
vanilla stem rot in Indonesia. Australas. Plan Pathol. 39:176-183.
Pinaria A. G., M. H., L. W. Burgess y E. C. Y. Liew. 2015. Phylogeny and origin of
Fusarium oxysporum f. sp. vanillae in Indonesia. Plant Pathol 64(6):1358-1365.
Yossen, V. E. y M. Y. Conles. 2014. Eficacia de fungicidas in vitro para el control de
Fusarium oxysporum y F. proliferatum, agentes causales de marchitamiento
en el cultivo de orégano en la Argentina. Rev. Ind. y Agríc. de Tucumá. 91 (1): 19-
25.
Zhou, Y., J. Xu, Y. Zhu, Y. Duan y M. Zhou. 2016. Mechanism of action of the
benzimidazole fungicide on Fusarium graminearum: interfering with
polymerization of monomeric tubulin but not polymerized microtubule.
Phytopathology, 807-813.

1957