Apunte de Bioquímica: Regulación de la actividad enzimática. Regulación de la velocidad. Codificación de la concentración de enzima. Dependencia de Km.

MECANISMOS MOLECULARES DE LA REGULACION ENZIMATICA Regulación de la actividad enzimática
Controlando la actividad del enzima se controla su velocidad y así se puede obtener el producto final antes o después según convenga. La célula sigue el principio de máxima economía dentro del mayor orden posible, minimizando la cantidad de intermediarios sin utilidad. También se integran la reacciones de manera que no obtendrá energía si no la va a utilizar. Tampoco se regula la actividad de los enzimas porque con regular sólo uno de la ruta de reacciones se controla el resto, En una ruta hay reacciones que están continuamente en equilibrio y otras que no, el punto de control estará siempre estará en las últimas porque el enzima más lento será el paso limitante de la velocidad. Es preferible que el paso limitante esté al principio de la ruta porque así no se acumulan los intermediarios.

Regulación de la velocidad
Una reacción enzimática depende de la concentración de enzima presente, modificándola se varía la velocidad de dos maneras: - Síntesis de la molécula. - Degradación de la molécula. Normalmente son respuestas a largo plazo, se puede dar cuando ------ la fuente de alimentación en las células. Otra posibilidad más rápida es controlar la actividad del enzima ya sintetizado. Esta actividad dependerá de la concentración de enzima, Km y K CAT.

Codificación de la concentración de enzima
La regulación de la síntesis de enzimas se puede hacer a nivel transcripcional o traduccional. Este tipo de regulación existe en eucariotas y en procariotas. En eucariotas es a dos niveles. En procariotas es a nivel transcripcional. La bacteria E. Coli varía los enzimas dependiendo del medio en el que se encuentre. Los enzimas que no varían nunca su concentración en la célula de denominan constitutivos y a los otros inducibles. Operón LAC. Propuesto por Jacob y Monod. La bacteria puede utilizar como fuente de carbono la glucosa, pero si no hay usará lactosa para obtenerla. En el DNA habrá un sitio donde está codificado el enzima que romperá la lactosa en glucosa y galactosa. Cuando no hay lactosa este sitio no se puede leer porque estará bloqueado por delante por una proteína. Si hay lactosa ésta se unirá a esa proteína que ya no podrá bloquear al no poder unirse, consiguiéndose el enzima encargado de la ruptura de la lactosa, la β -galactosidasa. Un operón es un mensajero con información de varios genes. Es frecuente en procariotas y raro en eucariotas. Otra manera de modificarlo es actuando sobre la degradación, a cargo de enzimas proteolíticos llamados proteasas. Al disminuir la degradación aumenta la concentración de enzima. Se puede incidir sobre el mismo enzima o sobre el que lo degrada. Existen señales para marcar a los enzimas que van a ser degradados o no por las proteasas. La velocidad de reacción también se puede regular de otra forma más rápida modificando la actividad del enzima presente. La actividad del enzima dependerá de la concentración de sustrato presente, Km y K CAT. La regulación e la actividad sirve para bloquear o poner en marcha una ruta metabólica en pocos segundos. El caso más sencillo es cuando el enzima es autorregulable: - Si la concentración de sustrato aumenta la actividad del enzima aumenta. - Si la concentración de producto aumenta la actividad del enzima disminuye. Hay enzimas regulados por otros ligandos distintos, moduladores de la actividad del enzima. S unen a un sitio distinto del centro activo llamado centro regulador, que no poseen todos los enzimas. Los que sí tienen se llaman enzimas alostéricos. Saturación del enzima por el sustrato: cuando [S]0,9/[S]0,1 ≈ 80 el cambio en la concentración de sustrato es muy grande y la célula no lo permite. Si el enzima presenta cooperatividad en la unión el cambio es mucho más pequeño ya que será más sensible a los cambios en la concentración de sustrato: [S]0,9/[S]0,1 ≈ 4. Por lo tanto será muy ventajosa la cooperatividad en la unión del sustrato. Cabe pensar que la proteína será oligomérica y tendrá varios sitios activos.

Dependencia de Km.
Si el producto se parece mucho al sustrato puede entrar en el centro activo actuando como un inhibidor competitivo haciendo que Km aumente y K afinidad disminuya. Hay moléculas que se unen a otro sitio regulador distinto del activo haciendo que la velocidad de la reacción disminuya y Km aumente. - Los que hacen que Km suba, bajando la velocidad para la misma concentración de sustrato son inhibidores. - Los que hacen que Km baje, aumentando la velocidad para la misma concentración de sustrato son activadores. Con un activador o un inhibidor modificamos la cooperatividad. Los enzimas reguladores tienen varios centros activos (oligoméricos) con cooperatividad. Feed-back: el producto final de una serie de reacciones suele actuar como inhibidor del primer enzima uniéndose a un centro regulador. Es una inhibición alostérica. Este sistema no es bueno cuando hay una ramificación en la ruta. Ejemplo de enzimas alostéricos: aspartato carbamoilasa.

Por lo tanto el ATP actúa de activador. Esto se consigue sometiendo a regulación coordinada. Está regulada por los niveles de ATP y CTP que son moduladores alostéricos ya que no se parecen a la Asp. Los grupos que se pueden fosforilar son normalmente los OH (Ser. Todos los enzimas intestinales siguen este modelo. Tyr). esta modificación es reversible. La eliminación la produce una reacción hidrolítica. El CTP es un inhibidor porque es el producto final de la ruta metabólica e inhibe al primer enzima de la ruta de manera alostérica y Km aumenta. Hay otra modificación covalente pero irreversible. El aumento de la velocidad de reacción puede ser mucho mayor que variando Km. Normalmente sufren una transferencia de grupo. El ATP es una muestra de que hay mucha energía. Los enzimas que fosforilan a expensas del ATP son las quinasas y los que hidrolizan el fosfato fosfatasas. lo que implica la ruptura de uno o varios enlaces peptídicos. 10 moléculas de E1 se transforman en 10 de E*1. v0 = K CAT.cuanto mayor es ésta mayor es la velocidad. Las dos formas se diferencian en su K CAT. Para regular la velocidad de la reacción por modificación covalente es imprescindible que sólo se dé una de las dos. Modificar covalentemente es cambiar las cadenas laterales de los enzimas. El enzima que actúa es la aspartato carbamoilasa que tiene 12 subunidades de las cuales 6 son catalíticas (organizadas en 2 dímeros) y 6 reguladoras (3 dímeros). que E1 y E2 nunca sean activos al mismo tiempo en las condiciones celulares. En la regulación de la actividad enzimática puede conseguirse una amplificación muy grande de la señal utilizando cascadas enzimáticas. y así se controla el lugar y el momento de la activación. Se la conoce como modificación covalente y es muy efectivo para aumentar la velocidad de la reacción. una serie de enzimas cuya actividad está regulada por modificación covalente y que actúan secuencialmente. siendo uno mayor que el otro. como también podemos transformar 10 moléculas de E2tendremos finalmente 100 moléculas activas de E*2 y 1000 de E*3. siendo la más común la de grupos fosfato (fosforilación).[ES] Otra manera de modificar la acción del enzima es variar el valor de K CAT. Para fosforilar se requiere ATP que es el dador de grupos fosfato. Presenta cooperatividad respecto al sustrato (Asp). Una de las formas es siempre activa y la otra inactiva. Suponemos que cuando E0 actúa. Dependencia de K CAT. por lo que se podrán sintetizar muchos ácidos nucleicos y la ruta puede funcionar. Cuantos más pasos demos el factor de amplificación será mejor y sólo tendremos una señal. pudiendo existir en dos formas: enzima libre y enzima modificado. Las reacciones que catalizan E1 y E2 son irreversibles y sólo se dan en el sentido que indica el esquema. Ocurre en proteínas que se sintetizan en forma de precursores inactivos que se transforman en proteínas activas más cortas. aunque los enzimas son diferentes. esto es. Thr. Para modificar K CAT hay que cambiar la constante cinética de la reacción. Amplificación de señales. Como E1 y E2 son enzimas alostéricos el mismo modulador activa a uno e inhibe al otro.Cataliza la adición: Asp + Carbamoil-P ↔ Asp-carbamoil + P Es la primera reacción de una ruta metabólica. La forma activa podrá ser las fosforilada o la otra. Siempre se requiere la presencia de otro enzima para pasar de libre a modificado o viceversa. .

Wyman y Changeaux. los protómeros contiguos van presentando una afinidad creciente o decreciente hacia el ligando. Lo mismo sucedería con un efector positivo. el cambio conformacional en un protómero induce parcialmente un cambio conformacional en el adyacente. La coagulación de la sangre sigue este modelo. Esto es lo que sucede si un efector negativo actúa. la señal inicial es la ruptura de un tejido y el precursor será el fibrinógeno. Se unen al protómero catalítico provocando un cambio conformacional capaz de modular la actividad enzimática. rompe el enlace peptídico entre Arg 15 e Ile 16. Debe tenerse en cuenta que el control de los procesos metabólicos es complejo. Otro punto característico de control es el primer paso de una ramificación en una ruta que conduce a un producto alternativo. hay que señalar que existen algunos enzimas importantes que tienen una subunidad reguladora distinta. En enzimas alostéricos oligoméricos. El cambio conformacional en el protómero causa un cambio igual en el resto de subunidades del enzima. Se trata de la influencia que tiene la fijación de un ligando a un protómero sobre la fijación del ligando a un segundo protómero de una proteína oligomérica. El zimógeno inactivo quimotripsinógeno se activa en varios pasos. tanto la cooperatividad negativa como la positiva se pueden adaptar a este. A diferencia de lo que sucedía con el anterior modelo. Recuerde que las enzimas alostéricas habitualmente están formadas por varios protómeros cuyas propiedades están afectadas por moléculas efectoras. Se ha observado que en algunas circunstancias se requiere el aumento de la síntesis de todas las enzimas de una ruta para lograr un aumento sustancial de la formación del producto. Según este modelo solo existen dos estados. • Si utilizaste el contenido de esta página no olvides citar la fuente "Fisicanet" Regulación alostéríca En cada ruta bioquímica hay una o varias enzimas cuya actividad catalítica puede modularse en respuesta a las necesidades celulares.Existen cascadas de modificación covalente irreversible formadas únicamente por proteasas. Estos estados dan lugar tanto a la cooperatividad como a las gráficas sigmoideas de la velocidad inicial respecto a la concentración de sustrato. Este último caso es el que se da en la hemoglobina. Subunidad reguladora Por último. Tipos de alosterismo Las interacciones heterotrópicas se definen como el efecto de un ligando sobre la fijación de un ligando diferente. en la que se une al sustrato. tenso y relajado. El alosterismo homotrópico (interacciones homotrópicas) es conocido como cooperatividad. Las células utilizan la regulación alostérica para responder de forma eficaz a determinadas variaciones de las condiciones intracelulares. Modelo concertado y secuencial Las curvas de saturación de ligando que se han observado experimentalmente han sido descritas matemáticamente por varios modelos. Así pues. La unión de un efector a una enzima Ouimotripsinógeno F"IGURA 6 -21 mckee Activación del quimotripsinógeno. El cambio conformacional puede ser inducido por un efector alostérico o por el sustrato. Tras su secreción al intestino delgado. . al fijarse. sobre la fijación del sustrato. El protómero al que se une el efector cambia su conformación. El modelo concertado se debe a Monod. Normalmente han fracasado los intentos para aumentar la marcha de rutas como la glucólisis en bacterias modificadas mediante un incremento de las concentraciones de las enzimas reguladoras específicas. El modelo secuencial se debe a Koshland. Nèmethy y Filmer. de los cuales destacan el modelo concertado y el del encaje inducido secuencial. no hay estados intermedios. No existen reglas sencillas que expliquen todos los aspectos de la regulación de las rutas metabólicas. el efecto en una subunidad modificaría el sitio de unión del sustrato en el resto. intermedios. la quimotripsina rompe otros enlaces peptídicos y diversos cambios conformacionales dan lugar a la formación de a-quimotripsina. Existen dos estrategias principales para controlar las enzimas reguladoras: la modificación covalente y la regulación alostérica. modificando su afinidad hacia el ligando efetor o hacia un segundo ligando. otra enzima proteolítica. Posteriormente. Estos dos estados se encuentran en equilibrio. Los inhibidores lo desplazan al estado T. Estas enzimas reguladoras normalmente catalizan el primer paso de la ruta. Los activadores y sustratos desplazan el equilibrio hacia la conformación R. y esto causa el cambio de conformación del protómero adyacente. el quimotripsinógeno se convierte en n-quimotripsina cuando la tripsina. Así. de los enzimas. Este modelo no puede explicar la cooperatividad negativa y es muy restrictivo. En este modelo existen gran cantidad de estados híbridos. En este modelo.

R es la forma más activa porque se une al sustrato con más afinidad.mx/Programa/regulaci%C3%B3n_de_la_actividad_enzim.mayo.uson.MODULACIÓN ALOSTÉRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==> T (Figura inferior): Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. Las moléculas que favorecen la forma R pero que actúan sobre una región del enzima distinta del centro activo son los activadores alostéricos (Figura inferior izquierda). El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Activador alostérico: favorece la unión del sustrato Inhibidor alostérico: impide la unión del sustrato Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimática son los moduladores negativos. Si estos moduladores actúan en lugares distintos del centro activo del enzima se llaman inhibidores alostéricos (Figura superior derecha) .htm . http://payala.

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