ELISA PerfilPlus 1 Anti-ENA (IgG) Instrucciones del ensayo REFERENCIA | ANTICUERPOS CONTRA | CLASE IG SUSTRATO FORMATO ‘separado: nRNP/Sm, Sm, Poxillos de microtitulacion EA 1590-1208-1G) 55-4 ss-B, Sct70,Jo-1 | "96 _| ‘recubiertos de antigeno | 1% 08 (96) Indicaciones: El presente equipo de ensayo ELISA sirve para la determinacién in vitro semicuantitativa de autoanticuerpos humanos de las clase de inmunoglobulina IgG contra seis antigenos distintos: ARNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70 y Jo-1 en suero o plasma para el diagnéstico del sindrome de Sharp (EMTC), lupus eritematoso sistémico, sindrome de Sjégren, esclerosis sistémica progresiva y polimiositis/dermatomiositis. Importancia: El ELISA PerfilPlus 1 Anti-ENA ofrece la posibilidad de una determinacién paralela de anticuerpos contra 6 antigenos nucleares y citoplasmaticos distintos con procesamiento completamente automatico y evaluacién objetiva de los resultados del ensayo. Estos anticuerpos se relacionan con enfermedades de tipologia reumatica Principios del ensayo: El equipo de ensayo contiene tiras de microplaca, cada una con 8 pocillos de reactivo recubiertos separadamente con estos seis antigenos. En el primer paso del andlisis, se incuban los pocillos de reactivo con muestras de pacientes diluidas. En el caso de muestras positivas, los anticuerpos especificos de la clase IgG (también IgA e IgM) se ligan a los antigenos correspondientes. Para detectar estos anticuerpos, se lleva a cabo una Segunda incubacién usando un anticuerpo anti-IgG humana marcado con una enzima (conjugado enzimatico) que cataliza una reaccién coloreada, Materiales incluidos en este equipo: Denominacion Color Formato ‘Simbolo 1. Pocillos de reactivo recubiertos de antigeno 12 tiras de microplaca en marco de soporte, cada tuna con 8 pocillos de reactivo, listas para usar Ningun antigeno, 2. Antigeno mezctado, 3. i aoe (SIRS) nRNP/Sm, 4. Sm, 5. SS-A, 6. SS-B, 7. Scl-70, 8. Jo-1 2. Calibrador (IgG, humana), listo para usar pole oscuro | 2.0. (cat) 3. Conjugado enzimatico IgG antihumana (conejo) marcada con peroxidasa, | verde 4x12 (CONWUGATE] listo para usar [4 Tampén de muestra ck 1x 100 mi | (SAMPLE BUFFER listo para usar fence x bi ee ee incoloro | 1x 100 ml 6 Solucion de cromégeno/susrato: incoloro [1x 12 mi (SUESTRATE] zap omtucton|de parada) incoloro = [1x 12mi_ | [STOPSOLUTION] 0.5 M de Acido suifirico, lista para usar '&._Instrucciones del ensayo Tolleto 9. Certificado de control de calidad 1 protocolo [LOT] Designacién del lote ce T Temperatura de almacenamiento Diagnéstico in vitro &_ Sin abrir, utilizable hasta Almacenamiento y duracién: El envase de ensayo debe almacenarse a una temperatura de entre +2°C y +8 °C. |No congelar! Sin abrir, todos los componentes del equipo son estables hasta la fecha de caducidad indicada Eliminacién de desechos: Las muestras de pacientes, los calibradores, los controles y las tiras de microplaca incubadas deben manipularse como desechos infecciosos. Todos los reactivos deben desecharse conforme a las normativas legales.Medizinische EUROIMMUN _ t2terdiagnostika — AG Preparacién y estabilidad de los reactivos Aviso: Todos los reactivos deben ser llevados a temperatura ambiente (de +18°C a +25°C) aproximadamente 30 minutos antes de su uso. Una vez abiertos, los reactivos pueden conservarse hasta la fecha de caducidad indicada, siempre y cuando se almacenen a una temperatura de +2 °C a +8°C y se protejan contra cualquier contaminacién, si no se indica expresamente otra cosa en el siguiente texto, - Pocillos de reactivo recubiertos: Listo para usar. Abra el envoltorio protector resellable de la microplaca por las muescas situadas por encima de la costura de cierre. Para evitar que los preparados se humedezcan, no abra el envoltorio protector hasta que el contenido haya alcanzado la temperatura ambiente. Introduzca de nuevo inmediatamente en el envoltorio protector los pocillos de reactivo no utiizados de una microplaca empezada y ciérrelo herméticamente mediante la costura de cierre integrada (no retirar a bolsa estanca). Una vez abierto el envoltorio protector, los pocillos de reactivo recubiertos de antigeno pueden conservarse hasta 4 meses si se almacenan en seco a entre +2 °C y +8 °C. - Calibrador: Listo para usar. El calibrador debe mezclarse bien antes de su uso. = Conjugado enzimati uso, isto para usar. El conjugado enzimético debe mezclarse bien antes de su - Tampén de muestra: Listo para user. - Tampén de lavado: El tampén de lavado se suministra en una concentracién 10x. En caso de que aparezcan cristales de sal en el tampén concentrado, calentar el tampén a +37 °C y mezclarlo bien antes de diluirlo. Extraiga el volumen requerido del frasco con una pipeta limpia y diliyalo en agua desionizada o destilada (1 parte de reactivo y 9 partes de agua), Ejemplo: Para una tira de microplaca, 5 ml de concentrado y 45 ml de agua. El tampén de lavado diluido listo para usar se conserva 4 semanas si se manipula correctamente y se almacena a entre +2 °C y +8 °C. - Solucién de cromégeno/sustrato: Listo para usar. Cierre el frasco inmediatamente después de su uso, ya que la solucién es sensible a la luz ¥. La solucién de cromégeno/sustrato debe ser transparente; no debe utilizarse si presenta una coloracién azulada ya antes de su uso. = Solucién de parada: Listo para usar. ‘Advertencia: No se han detectado HBsAg ni anticuerpos contra VHC, VIH-1 y VIH-2 en el calibrador de origen humano. Sin embargo, todos los componentes del ensayo deberan ser tratados como potencialmente infecciosos y en consecuencia manipulados con cuidado. Algunos de los reactivos contienen ademas azida de sodio en una concentracién no sujeta a declaracion. Evite el contacto con la piel Preparacion y estabilidad de las muestras 1uero humano asi como plasma con EDTA, heparina o citrato. Por regla general, las muestras de pacientes a analizar pueden conservarse hasta 14 dias a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C. Las muestras diluidas se deben incubar el mismo dia que se preparan. Dilucién de muestras: Las muestras de pacientes para analizar se diluyen con tampén de muestra en la proporcién 1:201. Ejemplo: afiada Sul de muestra a 1,0 ml de tampén de muestra y mezcle bien (vértex). No es conveniente mezclar con la pipeta de muestreo. Aviso: El calibrador estd listo para usar, no se debe diluir 2EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika nares AG Incubacién Realizacién (parcialmente) manual del ensayo Incubacién de muestras: (Ter paso) Lavado: Incubacién del conjugad. (2.er paso) Lavado: Incubacién del sustrato: (Ber paso) Parada: Conforme al esquema de pipeteo, agregar con la pipeta a cada pocillo de reactivo 100 il de tampon de muestra (en blanco), calibrador o muestras de pacientes diluidas. Inoubar durante 30 minutos a temperatura ambiente (+18 °C a +25 °C). Manual: Vaciar los pocillos de reactivo y, a continuacién, lavarlos 3 veces, utiizando cada vez 300 ul de tampén de lavado diluido listo para usar. Automdtico: Lavar 3 veces cada pocillo de reactivo utlizando cada vez 450 jl de tampén de lavado diluido listo para usar (ajuste de! programa: p. ej. TECAN Columbus Washer «Overtlow Mode»). Dejar actuar el tampén de lavado en cada pocillo de reactivo entre 30 y 60 segundos por cada ciclo de lavado y, a continuacién, aspirar o vaciar. Tras el proceso de lavado, tanto en la ejecucién manual como en la automatica, sacudir enérgicamente la microplaca con las aberturas hacia abajo sobre papel absorbente para eliminar por completo los restos de tampén de lavado, Atencién: Los restos de liquido (>10 ul) que permanezcan en Ios pocillos de reactivo tras el proceso de lavado pueden influir en la conversin del sustrato y dar lugar a valores de extincién falsamente bajos, Un lavado insuficiente (p. ej. menos de 3 ciclos de lavado, volumen insuficiente de tampén de lavado o tiempos de accién demasiado cortos) puede dar lugar a valores de extincién falsamente elevados. Afadir 100 ul de conjugado enzimético (IgG antihumana marcada con peroxidasa) en cada pocillo de reactivo. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente (entre +18°C y #25 °C), Vaciar los pocillos. Lavar segtin se ha descrito anteriormente, Afiadir 100 ul de la solucién de cromégeno/sustrato en cada pocillo de reactivo. Incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente (entre +18 °C y #25 °C), proteger de la exposicién directa a la luz solar. Aijadir 100 pl de la solucién de parada en cada pocillo, en el mismo orden y a la misma velocidad con los que se agregé previamente la solucion de cromégeno/sustrato. La medicién fotométrica de la intensidad del color debe realizarse dentro de los 30 primeros minutos después de afiadir la solucién de parada, a una longitud de onda de medicién de 450 nm y una longitud de onda de referencia de entre 620 nm y 650 nm. Antes de realizar la medicién, agitar ligeramente la microplaca para asegurar la distribucién homogénea de la solucién coloranteMedizinische EUROIMMUN Labordiagnostika =e AG Realizacién de! ensayo mediante equipos de analisis totalmente automaticos La dilucién de las muestras y la posterior realizacién del ensayo tienen lugar de forma totalmente automatica mediante un equipo de analisis. Las condiciones de incubacién programadas en el software autorizado por EUROIMMUN pueden diferir ligeramente respecto de las especificaciones contenidas en las instrucciones del ensayo ELISA, pero han sido validadas en combinacién con el Analyzer | 0 el ‘Analyzer |-2P de EUROIMMUN y el presente ELISA de EUROIMMUN. Puede solicitarse una documentacién de validacién Es posible la automalizacién en otros equipos de andlisis abiertos totalmente automaticos, si bien la combinacién debe estar validada por el usuario. Esquema de pipeteo Recubrimiento ae A: ningin antigeno A [ow | ow | ow | ow B: antigeno si ki[x]xlk mezclado elri|ralra| ra C:nRNPISm ofr [rz |es| re D:sm eles |ra|ra| ra E:SS-A Fles|ra|ra| re F:SS-B e[rt|ea|ra| ra G:Sct-70 ult [pa | ra| re El esquema de pipeteo especificado es un ejemplo de anal pacientes (P 1a P 4) EI tampén de muestra (en blanco), el calibrador (C) y las muestras de pacientes diluidas se incuban en la correspondiente posicién en cada tira de microplaca. Las muestras de pacientes se utiizan cada una en una sola determinacién, Interpretacion de los resultados Semicuantitativo: Cuando el fotémetro no realiza ninguna compensacién automatica de valores en blanco, en primer lugar, debe calcularse la extincién media de los valores en blanco y restarse de todos los demas valores medidos. A continuacién, debe calcularse el valor medio de todas las extinciones medidas del calibrador y muttiplicarse por el factor 0,2. Se obtiene el limite superior del rango normal (punto de corte). Los valores de extincién por encima del punto de corte se consideran positivos, mientras que los que estan por debajo, negativos. Ademas de la determinacién cualitativa, el célculo de una proporcién (ratio) permite una evaluacién semicuantitativa del resultado. Para calcular la ratio se aplica la siguiente férmula: Extinciénia pruebade paciente _ Extinciénla prueba de paciente Punto de corte-Extincion Extincién del calibrador x 0,2 =RatioEUROIMMUN __ teordiasnostica =e AG EUROIMMUN recomienda interpretar los resultados de la siguiente manera: Ratio Evaluacion <10 negativo 21.0 hasta 2,0 positive débil 22,0 hasta 5,0 positive Ll 25,0 positive fuerte En paralelo a la deteccién de los anticuerpos contra el nticleo celular mediante técnicas ELISA, deberia llevarse siempre a cabo un ensayo de inmunofluorescencia indirecta: por un lado permite verificar la plausibilidad, por ejemplo para descartar resultados del ELISA falsos positivos y, por otro lado, la inmunofluorescencia con células HEp-2 EUROIMMUN permite detectar, especialmente en combinacién con criosecciones de higado de primate, un espectro mas amplio de anticuerpos contra el nticleo celular, ya que hasta ahora no se encuentran disponibles todos los antigenos del niicleo celular a considerar como sustrato de ELISA, Para el diagnéstico debe tenerse siempre en cuenta, ademas del resultado serolégico, el cuadro clinico del paciente, Caracteristicas del ensayo Calibracién: El ELISA PerfilPlus 1 Anti-ENA (IgG) se calibra con un suero mezclado. Los resultados se indican en forma de ratios que representan una medida relaliva de la concentracién de los anticuerpos en el suero 0 plasma. En cada ensayo, los valores de extincién en blanco, asi como los del calibrador, deben situarse dentro de las tolerancias especificadas para cada lote, Se incluye un certificado de control de calidad que contiene estos datos. Si no se cumplen estos requisitos, los resultados del ensayo pueden ser imprecisos y deberd repetirse el ensayo. Tanto el comportamiento de enlace de los anticuerpos como la actividad de la enzima usada dependen de la temperatura, y por consiguiente es recomendable utlizar un termostato para los tres pasos de incubacién. Cuanto mayor sea la temperatura ambiente durante las incubaciones, mayores serdn también los valores de extincién. Estas variaciones también afectan a los tiempos de incubacién. Sin ‘embargo, el calibrador esté sometido también a las mismas influencias y, por tanto, estas variaciones se ‘compensan al final en el calculo de los resultados, Antigenos: Los pocillos de reactivo utilizados en este ELISA estén recubiertos separadamente con el siguiente antigeno: nRNP/Sm: U1-nRNP purificada mediante cromatografia de afinidad, aislada a partir de timo de temera, U1-nRNP contiene proteinas especificas de RNP 70K, Ay C, asi como proteinas especificas de Sm B, B,D, E,FyG. ‘Sm: Antigeno Sm purificado por cromatografia de afinidad, aislado a partir de timo de temera, Los antigenos nRNP y Sm son un grupo de pequefias ribonucleoproteinas (snRNP, small nuclear ribonucleoproteins), que se componen de ARN de bajo peso molecular con alto contenido en uridina {U-ARN) y diversas proteinas (pesos moleculares de 9 kDa a 70 kDa). La proporcién de ARN se indica como U1 a U6 en funcién del comportamiento cromatogréfico. Las particulas RNP U-n(nucleares)presentan, ademas del correspondiente ARN, seis diversas proteinas del nucleo (B, 8’, D, E, F, G), U1-nRNP contiene ademas protefnas especificas de particulas (70K, A, C). Autoanticuerpos contra U1-nRNP se dirigen exclusivamente contra una o varias de las proteinas especificas de particulas 70K, A y C, En cambio, los anticuerpos contra Sm pueden incluir una o varias de las proteinas del nucleo. Las particulas U-nRNP deshilachan el preARNm (ARN premensajero) — cortan las secuencias de ARNm no codificadoras (intrones) y combinan de nuevo las secuencias de ARNm codificadoras (exones) con el ARN mensajero.Medizinische EUROIMMUN Labordiagnostika =e AG SS-A/Ro: Antigeno SS-A/Ro purificado por cromatografia de afinidad, aislado a partir de timo de ternera EI antigeno SS-A/Ro esta situado en el nticleo celular y contribuye al procesamiento del mARN a molécula activa transferible. Es una pequefia ribonucleoproteina compuesta de una molécula de ARN (ARN Y1, Y2, Y3, ¥4 0 Y5; longitud: de 80 a 112 bases) y una proteina de 60 kDa, que representa el antigeno diana para los autoanticuerpos contra SS-A/Ro. Con este complejo hay asociada una proteina de 52kDa (Ro-52). Los sueros de pacientes positives para anticuerpos contra SS-A contienen anticuerpos contra SS-A nativo (proteina de 60 kDa) y pueden reaccionar de forma adicional con la proteina Ro-82. Los anticuerpos contra la proteina Ro-52 por si solos generalmente se interpretan como inespecificos, 'SS-B: Antigeno SS-B purificado por cromatografia de afinidad, aistado a partir de timo de temnera El antigeno de SS-B es una fosfoproteina con un peso molecular de 48 kDa. En el nticleo celular SS-B actiia como una proteina auxiliar del ARN polimerasa It Scl-70: Antigeno Scl-70 (ADN topoisomerasa I), aislado a partir de timo de terera purificado por cromatografia de afinidad, Se identificé la enzima topoisomerasa | de ADN como antigeno Scl-70 El peso molecular de la enzima nativa es de 100 kDa. Originalmente solo se habla encontrado un producto de fisién de 70 kDa en el Westem-Blot. La topoisomerasa | de ADN se localiza en el nucleoplasma y, en concentracién particularmente alta, en el nucléolo. La enzima participa en la replicacién y transcripcién de la doble hélice del ADN. Jo-1: Antigeno Jo-1 (histidil ARNt sintetasa), aislado a partir de timo de temera purificado por cromatografia de afinidad, El antigeno Jo-1 es idéntico al histidil ARNt sintetasa, una fosfoproteina citoplasmética con un peso molecular de 50 kDa. Acopla los aminodcidos histidina en el citoplasma a sus correspondientes ARNt. Sensibilidad de detecci6n: El limite de deteccién inferior se define como el promedio de una muestra libre de analitos mds el triple de la desviacién estandar, e indica el titulo més bajo de anticuerpos detectable inequivocamente. El limite de deteccién inferior del ELISA PerfiPlus 1 Anti-ENA (IgG) del antigeno utilizado se sitiia en la ratio 0,1 Reactividad cruzada: Para este ELISA no se conoce ninguna reactividad cruzada. Interferencias: Las muestras hemoliticas, lipémicas e ictéricas no revelaron interferencias en este ensayo ELISA hasta una concentracién de 10 mg/ml para hemoglobina, 20 mg/ml para triglicéridos y 0,4 mg/ml para bilirrubina Reproducibilidad: Para comprobar la reproducibilidad, se determinaron los coeficientes de variacién intraensayo e interensayo utilizando 3 muestras. Los coeficientes de variacién intraensayo estén basados en 20 determinaciones, y los coeficientes de variacién entre ensayos en 4 determinaciones realizadas en 6 ensayos diferentes. Los coeficientes de variacién promedio son: Variacion intraensayo, n= 20 Variacion interensayo, n= 4x6 cv(%) Antigeno cv (%) ‘ARNPISM 36 ARNPISM 43 sm 2.3 ‘Sm 35 ‘SSA 3.0 SSA 34 SSB 38 SSB 5a ‘Sol-70 44 Soh-70 46 Jot 27 Jot 32EUROIMMUN _ tsbordiasnosuke aes he La reacvdad del corespondienteanigeno del ELISA PeriPWs 1 AnI-ENA (gG) se ajuss valores estandarizados con los sueros de referencia humanos CDC-ANA #1 a #10 del «Center for Disease Contob (Atlanta, EE" UU), La sigulente tala resume os valores sorespondienes de los sueros CDG en el ELISA PerfilPlus 1 Anti-ENA (IgG) de EUROIMMUN: coc’ ebe2 DCS coca cpcs CDC cDCT CDC’ GDS cDC-0 Antigeno |RomOgEn MEGA! moteado RNP Sm nucleolar SSA MOM Sct Jot nRNPISm | +(11) neg. +(7A) +160) 40410) neg neg neg ~=~SCneG Se sm +(14) neg. #041) neg. #18.8) neg. eg. nega. ssa neg. +(43)-+(8.5) neg. neg.nag. +49) neg, eg, neg ssa neg. $049) #(.7) neg. neg. neg. eg. neg. neg. neg, sc-70 | neg. neg. neg. neg. neg. neg. reg. neg. #(8,0) neg, sot neg. neg. __neg.__neg neg. neg. rege neg. neg. +48) eg. (egatva) + (positive): Valor de erineton de la musstta “1x panto de core Valor de extncién de la muestra >1 x punto de corte (el valor entre paréntesis indica el mitiplo del punto de corte) La especificidad de estos sueros fue determinada por el Center for Disease Control a raiz de su muestra de fluorescencia (sustrato: células HEp-2 e higado de primate), que obtuvo los resultados en la prueba de inmunodifusién doble 0 electroforesis cruzada (la tabla aclara que los sueros no siempre reaccionan monoespecificamente), Rango de referencia: Se determinaron los niveles de anticuerpos contra ENA (IgG) en 206 donantes de sangre sanos, Con un punto de corte situado en la ratio 1,0, se determinaron las siguientes prevalencias: (Anticuerpos contra | Prevalencia ARNP/Sm 0% ‘Sm 0% SSA 0%. SSB 0% Sck-70 0.5% Jo-4 0% Significacién clinica Los autoanticuerpos (aAc) contra antigenos nucleares (ANA) se dirigen contra diversas componentes del nucleo celular. Entre los principales antigenos nucleares (Incluidos los anticuerpos citoplasmaticos) se cuentan nRNP/Sm, Sm, SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70, PM-Scl, Jo-1, centrémeros, PCNA, ADNdc, nucleosomas, histonas y proteinas P ribosomales. Normaimente se trata de componentes de particulas del niicleo celular funcionales o estén unidos a Acidos nucleicos. Desempefian funciones en el ciclo celular, por ejemplo durante la transcripcién o la traduccién. La deteccién de ANA con diferenciacién adicional en el espectro de anticuerpos ANA (y en el espectro ENA) contribuye al diagnéstico, especialmente en las siguientes enfermedades reumdticas: - lupus eritematoso sistémico (LES), indrome de Sharp (enfermedad mixta del tejido conjuntivo = EMTC, colagenosis mixta), = sindrome de Sjagren (SS), = esclerosis sistémica (SSc), = polimiositis/dermatomiositis (PM/DM), El sindrome de Sharp (enfermedad mixta del tejido conjuntivo, EMTC) es una enfermedad mixta del tejido conjuntivo con una gran cantidad de sintomas muy diferentes. Pueden identificarse los sintomas clinicos de una artritis reumatoide, un LES, una esclerosis sistémica, un sindrome de CREST (calcinosis cutis, fenémeno de Raynaud, trastornos de motilidad de! eséfago, esclerodactiia, telangectasias), asi ‘como vasculitis.Medizinische EUROIMMUN Labordiagnostika =e AG El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune inflamatoria crénica con evolucién recurrente-remitente que afecta sobre todo al tejido conjuntivo, pero también a numerosos sistemas orgénicos. La frecuencia de la colagenosis varia en funcién de la regién y es diez veces mas frecuente en las mujeres que en los hombres, En Europa Central 12,5 de cada 100 000 mujeres sufren LES, mientras que esta cifra aumenta hasta 100 en los EE, UU. La edad con mayor incidencia se sitia entre los 15 y los 30 afios. El cuadro clinicamente diversos puede abarcar numerosos sintomas: eritema en alas de mariposa, alteraciones cuténeas hiperqueratésicas discoides, purpura, artralgias, mialgias, insuficiencia renal, anomalias neuropsiquiatricas, polineuropatia, pericarditis, cardiomiopatia, pleuriis, fibrosis pulmonar, anemia, hepatomegalia y esplenomegalia. Un «brote de LES» suele ir acompafiado de flebre, El sindrome de Sjégren (SS) es una enfermedad autoinmune inflamatoria crénica de las gléndulas exocrinas que solo en los EE. UU. afecta a entre uno y cuatro millones de personas (a las mujeres, nueve veces mas que a los hombres). Los sintomas clinicos del SS primario son principalmente sequedad ocular y oral debido a la destruccién de las glandulas lagrimales y salivales por infitrados infociticos. También puede afectar las gléndulas del pancreas, gléndulas excretoras de mucosa del intestino, gkindulas de los bronquios y la vagina, asi como las glindulas sudoriparas. Aproximadamente el 5% de los casos de pacientes de SS desarrollan un linfoma maligno. En caso de SS secundario, los indicios de enfermedad de un SS primario aparecen como sintomas acompafiantes de artritis reumatoide (AR), SSc, LES, PM/DM, asi como de la colangitis biliar primaria y la hepatitis autoinmune. La esclerosis sistémica (SSc) es una enfermedad autoinmune inflamatoria crénica con evolucién recurrente-remitente con acumulacién de colgeno en la piel y en los Srganos internos. Con la SSC el cutis reacciona con hinchazén y trastomos circulatorios dolorosos paroxisticos de los dedos, especialmente en condiciones de estrés 0 frio (sindrome de Raynaud). Aparecen dolores artriticos en las articulaciones. Ademds, también afecta el tracto gastrointestinal, los pulmones, el corazon, los rifiones y otros organos. Se distingue entre la forma difusa de SSc (DSSo), la forma limitada de SSc {LSSo) y el sindrome de solapamiento de PM/SSc 0 PMISLE/SSc, La DSSc afecta el tejido conjuntivo de pulmones, riftones, eséfago y corazén, siendo la esclerosis de los pulmones la causa de muerte mas habitual. La LSSc, que a menudo afecta las extremidades y, en menor medida, los érganos internos, se equipara en gran parte con el sindrome de CREST (calcinosis cutis, fenémeno de Raynaud, trastornos de motilidad de! eséfago, esclerodactiia, telangectasias). El sindrome de solapamiento PM/SSc se identifica a través de la miositis, enfermedad pulmonar intersticial, artrtis, fendmeo de Raynaud, fiebre e hiperqueratosis en las manos La polimiositis/dermatomiositis se incluye en las miositis idiopéticas (miositis autoinmunes) con una incidencia anual de 1:100.000, Las mujeres se ven afectadas el doble que los hombres. Se debate una triada causante de enfermedad de componentes genéticos (HLA-B8, DRW 52, DRW 53), noxa externa (bacterias, virus como Coxsackie A 0 Toxoplasma gondii, «contaminante») y afectacién fisica (p. ej, esirés). La dermatomiositis (DM) puede aparecer a cualquier edad, la polimiositis (PM) normalmente no aparece hasta la segunda década de vida y la miositis de cuerpos de inclusién (inclusion body myositis, IBM), a partir de la quinta década de vida Los sintomas principales de PM y DM son debilidad muscular y, en estadio avanzado, atrofia muscular. A principio de la enfermedad afecta principalmente a la musculatura de la laringe y va acompafiado de voz aspera, disfagia y disnea. Son caracteristicos de la DM los eritemas lividos, sobre todo los periorbitales y preestemales, asi como en la zona de la rodilla y los codos, también las lesiones capilares dolorosas en el borde y lecho de la ufia, asi como hiperqueratosis de las manos con fisuras. Entre el 40% y el 70% de los nifios enfermos y el 20% de los adultos presentan ademas una calcinosis, del tejido subcutaneo y de los musculos. Se distinguen las distintas formas de PM siguientes: miositis idiopética primaria (PM y DM en el 33% de los casos), PM/DM paraneoplastica (del 8% al 20% de los casos, pero no en nifios), DM infantil con vasculitis secundaria (del 5% al 10% de los casos) y sindrome de solapamiento PM/DM en caso de colagenosis (20% de los casos). La PM/DM paraneopiastica esta asociado a un carcinoma de estémago, intestino, faringe, pulmones, mama o un tumor/carcinoma ovarico. En la mayoria de los casos se observa una mejora del estado de la enfermedad tras la extirpacién del tumor.Medizinische EUROIMMUN Labordiagnostika =e AG El electromiograma, la biopsia muscularicuténea, la determinacién de enzimas musculares y la serologia autoinmune especffica contribuyen al diagnéstico. La deteccién de autoanticuerpos asociados a PM/DM con equipos de ensayo especiales es imprescindible para el diagnéstico de PM/DM y la evaluacién de la evolucién de la enfermedad y la terapia. Los titulos altos de anti-nRNP/Sm son caracteristicos del sindrome de Sharp, en el que el titulo esta en correlacién con la actividad de la enfermedad. Los anticuerpos contra nRNP/Sm son ademas detectables en pacientes con LES, SSc y PM/DM. Los aAC contra Sm se clasifican, junto con los aAc contra ADNdc, nucleosomas y la proteina P ribosomal, como patognoménicos para LES. Los aAc SM pueden detectarse en el 5% al 40% de los pacientes de LES. Mientras que la prevalencia en los caucdsicos solo es del 10%, en otros grupos étnicos es considerablemente superior, como en el caso de los arabes, chinos o negros africanos. En estudios americanos con una proporcién alta de no caucasicos, la prevalencia se determina entre el 20% y el 40%, En caso de SS, se encuentran anticuerpos contra SS-A en entre cl 40% y el 95% de los casos. Estos aparecen normalmente combinados con aAc contra SS-B (anti-La). Los aAc contra SS-A se encuentran ademés en el 20% al 60% de los pacientes de LES y con una prevalencia de cerca del 100% en caso de lupus eritematoso neonatal (sindrome LES neonatal). Las madres con resultados positives de aAc contra SS-A-/SS-B transmiten estos aAC por via diaplacentaria al felo y no solo provocan reacciones inflamatorias, sino con frecuencia también un bloqueo auriculoventricular congénito (grado | a II). Observacién: La distincién de los anticuerpos contra SS-A de aquellos contra el llamado antigeno Ro-62 (proteina de 52 kDa, RING dependent E3 ligase) reviste importancia diagndstica Los anticuerpos contra Ro-52 no son especificos de la enfermedad y pueden detectarse también en miositis, esclerosis sistémica, lupus eritematoso neonatal y otras colagenosis, asi como en colangitis biliar primaria, hepatitis autoinmune y hepatitis virica. En caso de SS, se encuentran ac contra SS-B entre el 40% y el 95% de los casos. Estos aparecen normaimente combinados con aAc contra SS-A (anti Ro). Los aAc contra SS-B se encuentran ademas en entre el 5% y el 35% de los pacientes de LES y, con una prevalencia del 75% al 80%, en caso de lupus eritematoso neonatal _(sindrome LES). Las madres con resultados positives de aAc contra SS-A- ISS-B transmiten estos aAC por via diaplacentaria al feto y no solo provocan reacciones inflamatorias, sino con frecuencia también un bloqueo auriculoventricular congénito (grado | a Ill). Los aAc contra Scl-70 son anticuerpos marcadores de la esclerosis sistémica (SSc), que puede dotectarse entre el 25% y el 75% de los pacientes. En Japén se dan prevalencias bajas. La deteccién serolégica de anticuerpos contra Scl-70 se asocia mayoritariamente a formas de evolucién dificiles, difusas y pronésticos adversos (deteccién de anti Scl-70 entre el 25% y el 75% de estos casos de SSc). Con menor frecuencia, entre el 5% y el 30% de los casos, la deteccién de anti Scl-70 ser relacionacon formas de SSc limitadas y en aprox. e! 13%, con sindrome de solapamiento SSc/SLE/PM o SSc/PM. Todavia no se ha aclarado la relacién patogenética entre la SSc y los ac contra Scl-70, dado que algunos pacientes de silicosis pueden desarrollar anticuerpos contra Scl-70 sin enfermarse de SSc. Los anti-Jo-1 son anticuerpos contra histidi-tRNA-sintetasa (sintetasa tRNA"). El aAc Jo-1 es un marcador conocido y altamente especifico de la PM/DM, Los aAc contra Jo-1 tienen una prevalencia en caso de PM/DM del 18% al 30% (proporcién PM:DM 2:1), En el 60% de los casos de pacientes de PM/DM con resultado positivo para anticuerpos Jo-1, aparece el llamado sindrome anti sintetasa con el complejo de sintomas de miositis, enfermedad pulmonar intersticial, artrtis, fenémeno de Raynaud, fiebre e hiperqueratosis en las manos.Medizinische EUROIMMUN Labordiagnostika =e AG ‘Anticuerpos contra [Enfermedad Prevalencia ‘Sindrome de Sharp (EMTC) ‘95-00% Lupus eritematoso sistémico (LES) 347% nRNP/Sm Esclerosis sistémica (SSc) 244% Polimiositis/dermatomiositis (PM/OM) 12-16% ‘Solapamiento de polimiositis/SSc aprox. 24% ‘sm ‘Lupus eritematoso sistémico (LES) 540% ‘Sindrome de Sjégren (SS) 40-95% ‘SS-A (Ro) Lupus eritematoso sistémico (LES) 20-60% Lupus eritematoso neonatal 195-100% ‘Sindrome de Sjégren (SS) 40-95% 'SS-B (La) Lupus eritematoso sistémico (LES) 5.35% Lupus eritematoso neonatal 75-80% Esclerosis sistémica (SSc) 25-75% ‘Sol-70 - Forma difusa (DSSc) 25-75% - Forma limitada (LSSc) 530% \Jo-t Polimiositis/dermatomiositis (PM/DM) 18-30% Referencias bibliograficas 1, Alba P, Bento L, Cuadrado MJ, Karim Y, Tungekar MF, Abbs |, Knamashta MA, D'Cruz D, Hughes GR. 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