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Curso: Microbiología General: Facultad de Farmacia Y Bioquimica
Curso: Microbiología General: Facultad de Farmacia Y Bioquimica
PRACTICA N°10
“PRINCIPALES GRUPOS BACTERIANOS DE
IMPORTANCIA MEDICA (III)”
Integrantes:
Sección: FB7N1
LIMA-PERÚ
PRÁCTICA Nº 10
“PRINCIPALES GRUPOS BACTERIANOS DE IMPORTANCIA
MÉDICA (III)”
I.- INTRODUCCIÓN
II.-COMPETENCIAS
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
El agar Mc Conkey es un medio de siembra diferencial para la selección de
Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. En el
medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la
mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que
inhiben el crecimiento de las bacterias grampositivas.
La lactosa es el único hidrato de carbono. Las bacterias que fermentan lactosa
producen colonias de sombras variadas de rojo, debido a la conversión del
colorante rojo neutro (rojo por debajo de pH 6.8) a partir de la producción de
ácidos mixtos. Los fermentadores fuertes típicos de la lactosa son Escherichia,
Klebsiella y Enterobacter. En este caso esta prueba dio positivo para krebsiella
por ser un microorganismo fermentador de lactosa.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
incoloras.
INOCULACIÓN EN AGAR EMB
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
El agar EMB es un medio de siembra diferencial para el aislamiento o
detección de Enterobacteriaceae. Los colorantes anilinicos (eosina y azul de
metileno) inhiben el crecimiento de bacterias grampositivas y gramnegativas
con requerimientos nutricionales especiales. EMB de Levine, que solo tiene
lactosa, da reacciones más en paralelo con el agar de Mc Conkey.
La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa,
y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina
y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias
Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.
presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa
poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no
lo hacen son incoloras.
Las colonias fermentadoras fuertes típicas de lactosa, en especial Escherichia
coli, producen colonias negro verdosas con un brillo metálico. En este caso se
produjo el crecimiento de Krebsiella , el cual es considerado un fermentador
débil el cual produce colonias violáceas en 24-48h. Con ello, se permite la
diferenciación de las enterobacterias fermentadoras de la lactosa (color violeta
intenso) de las no fermentadoras (grisáceas).
INOCULACIÓN EN AGAR SS
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
El agar SS es un medio altamente selectivo formulado para inhibir el
crecimiento de la mayoría de los microorganismos coliformes y permitir el
crecimiento de especies de Salmonella y Shigella. La alta concentración en
sales biliares y el citrato de sodio inhiben todas las bacterias grampositivas y
muchos microorganismos gramnegativos.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido
sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. El carácter diferencial se basa en la
fermentación de la lactosa y el rojo neutro es el indicador para la detección de
ácido. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de
desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH.
Las colonias lactosa positivas son de color rojo, mientras que las colonias
lactosas negativas son transparentes. En este caso se produjo el crecimiento
de Krebsiella el cual es un microorganismo fermentador de lactosa.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa,
crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
INOCULACIÓN EN CALDO LACTOSADO
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
En este caso se utiliza el agar urea de Chistensen porque tiene menos buffers
que el caldo urea de Stuart y contiene peptonas y glucosas. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol es el indicador de pH. Este
medio enriquecido favorece el crecimiento de muchas especies de bacterias
que no pueden desarrollarse en el caldo de Stuart y la menor capacidad de
amortiguación permite la detección de cantidades menores de amoniaco.
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en
base a la fermentación de los hidratos de carbono glucosa, lactosa y sacarosa
y a la producción de ácido sulfhídrico.
La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fer-
mentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la
producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
Medio SIM destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro
de hidrógeno por los microorganismos, en el cual la tripteína y la peptona
aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. El triptófano es un
aminoácido constituyente de muchas peptonas y particularmente de la
tripteína y puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar indol. En
el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol
producido se combina con reactivo de Kovac´s para originar un compuesto de
color rojo.
A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido
sulfhídrico que reacciona con el hierro presente formándose un compuesto de
color negro. El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga
al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar
movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio.
En la práctica la prueba del indol fue negativa puesto que el color que
dio con el reactivo fue amarillo, debido a que no se liberó indol porque la
bacteria no tiene triptofanasa. Tambien es negativo para producción de
SH2 y movilidad.
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
FUNDAMENTO
La aparición de un color rosado constituye una reacción positiva indicadora de
la presencia de acetoína, producto de la fermentación de la glucosa.
Algunos microorganismos fermentan la glucosa por la via de degradación del
2,3-butanodiol; este metabolito se manifiesta con los reactivos para Voges-
proskauer (solución de α-naftol y de KOH).
Esta prueba se basa en la conversión del acetilmetilcarbinol (acetoina) en
diacetilo a través de la acción e hidróxido de sodio y oxigeno atmosférico. El
diacetilo se convierte en un complejo rojo bajo la acción catalítica de α-naftol y
creatina.
Las bacterias que utilizan esta via como el grupo Krebsiella para esta prueba
es positiva por la coloración rojiza que apare después de adicionar hidróxido
de potasio en medio con glucosa. Esta coloración se debe a la oxidación del
acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para
dar un color rojo.
INOCULACIÓN EN CALDO MR-VP
(Reacción de rojo de metilo)
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges
Proskauer. Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias.
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
Klebsiellae pneumoniae
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
FUNDAMENTO
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la
capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno
y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son
necesarios para el desarrollo bacteriano. El azul de bromotimol es el indicador
de pH, que vira al color azul en medio alcalino.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de
citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento
del citrato genera progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en
presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que al ser
utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción
de citrato permeasa.
Krebsiella da positivo por la producción de un color azul en el medio de prueba
después de 24 horas de incubación lo cual indica la presencia de productos
alcalinos y la utilización de citrato.
REACCIÓN DE LA CITOCROMO OXIDASA
Klebsiellae pneumoniae
Negativo
FUNDAMENTO
La klebsiella es un frecuente
patógeno humano.
Pseudomonas
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
TSA Estria
FUNDAMENTO
Tiene por base una fuente proteica (digeridos trípticos, digeridos proteicos de
soja) con una pequeña cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro
sódico y 5% de sangre.
INOCULACIÓN EN TSI
Pseudomonas
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
TSI Inoculación
FUNDAMENTO
Pseudomonas
FUNDAMENTO
La prueba de oxidasa se basa en la producción de una enzima oxidasa
intracelular. Esta reacción de oxidasa se debe a un sistema de citocromo
oxidasa que activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno
molecular. El sistema citocromo, por lo común presente en los
microorganismos aerobios, permite a estos utilizar el oxígeno como aceptor
final de hidrogeno para reducir el oxígeno molecular a peróxido de hidrogeno.
El citocromo oxidasa varía entre las especies bacterianas, algunos
microorganismos poseen solo una oxidasa mientras que otros pueden producir
2 a 3 . los citocromos distintos de la citocromo oxidasa son b, c1, c resultados
de una prueba positivo en la prueba de oxidasa.
Las especies de pseudomona producen una enzima oxidasa que, en
presencia de oxigeno atmosférico, citocromo c y un reactivo para oxidasa,
oxida el reactivo a un compuesto coloreado, el indofenol. Los electrones
provenientes del citocromo c son captados por el citocromo oxidasa oxidada,
que los transfiere a una molécula de oxígeno. El oxígeno libre es necesario
para la regeneración indirecta del citocromo c oxidado, la prueba en realidad
determina la presencia del citocromo c y por lo que nuestro resultado fue
positivo porque dicha bacteria pseudonoma contiene dicha enzima
respiratoria.
VIBRIO
MEDIO DE CULTIVO TIPO DE SIEMBRA
TSI INOCULACION
FUNDAMENTO
Vibrio
FUNDAMENTO
La prueba de oxidasa se basa en la producción de una enzima oxidasa
intracelular. Esta reacción de oxidasa se debe a un sistema de citocromo
oxidasa que activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno
molecular. El sistema citocromo , por lo común presente en los
microorganismos aerobios, permite a estos utilizar el oxígeno como aceptor
final de hidrogeno para reducir el oxígeno molecular a peróxido de hidrogeno..
El grupo de Vibrio no poseen dicha enzima por lo tanto el resultado es
negativo y no se produce las reacciones mencionadas.
IV.- RESULTADOS
TABLA N°1: ESTUDIO DEL GRUPO ENTEROBACTERIA
ENTEROBACTERIA
Agar Mc Conkey + SIM +
Agar EMB + CITRATO +
CALDO
Agar SS + +
PEPTONADO
CALDO MR-VP
Caldo lactosado + +
Rojo de metilo
Caldo MR-VP
Agar UREA + Reacció n Voges ++
proskauer
CITOCROMO
TSI + -
OXIDASA
PSEUDOMONAS + + + +
VIBRIO + + - +
V.-CONCLUSIONES
Las Enterobacteriaceae son una familia amplia de bacterias Gram negativas
que provienen del intestino, su morfología es principalmente bacilar,
la mayoría son motiles, son anerobios facultativos, carecen de la enzima
citocromo c oxidasa y por ello son oxidasa negativos.
La manera de orientarse en la identificación del genero de las
enterobacterias, es por medio de un conjunto de pruebas bioquímicas
denominadas IMVIC que consisten por las pruebas: Indol, Rojo de metilo,
Voges Proskauer y Citratos.
VI.-BIBLIOGRAFIA