FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

“INFORME PRÁCTICA N° 13”

ALUMNO:

 Llerena Obando Mitzi Fernanda

DOCENTE:

 Dr. Mercado (Práctica)

CURSO:

 Inmunología General (Práctica)

TURNO:

 06:00 p.m. – 09:35 p.m. (Sábado - P)

NRC:

 3742

23/12/2022
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MANUAL DE PRACTICAS INMUNOLOGIA BASICA

PRÁCTICA 14

PRUEBAS RÁPIDAS DE DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO

INTRODUCCIÓN

 DIAGNÓSTICO DE EMBARAZO: la aparicióndelahormonagonodotrofinacoriónica(hCG)enorinaysueropocodespuésde

la concepción y su posterior aumento rápido durante el principio de la gestación convierten a esta hormona en un
excelente marcador para la detección precoz del embarazo. La prueba hCG de embarazo en un solo paso en placa
(Orina/Suero) es una prueba rápida que detecta cualitativamente la presencia de hCG en una muestra de orina o
suero con una sensibilidad de 25mUI/ml (1). La prueba utiliza una combinación de anticuerpos monoclonales y
policlonales para detectar selectivamente los niveles elevados de hCG en orina o suero. La prueba hCG de embarazo en un
solo paso en placa (Orina/Suero) no muestra interferencias cruzadas con otras hormonas glucoproteícas
estructuralmente relacionadas, FSH,LHyTSH,ennivelesfisiológicosaltos.

La prueba utilizadoslíneasparaindicarelresultado. Lalínea de lapruebautilizaunacombinación de anticuerpos queincluyen

un anticuerpomonoclonal hCGparadetectarselectivamenteniveles elevadosdehCG.Lalíneadecontrolestácompuestapor
anticuerpos policlonalesde cabray partículas coloidales de oro. El ensayo se realiza añadiendo la muestra de orina o suero
al pocillo delaplaca y observandola formación de líneas de color.

El Ag en las muestras positivas reacciona con el conjugado de color del anticuerpo específico anti-hCG para formar
una línea de color en la región de la línea de la prueba de la membrana. La ausencia de esta línea de color sugiere un
resultado negativo. Para servir como control del procedimiento, siempre aparecerá una línea de color en la región de
la línea de control, si la prueba se ha realizado correctamente.

 PRUEBA RÁPIDA PARA DIAGNÓSTICO DE ANTICUERPOS HIV 1/2: el Centro para el Control y la Prevención de
Enfermedades de EE.UU. (CDC), destaca la importancia de la utilización de pruebas rápidas de detección del HIV para
facilitar el acceso al diagnóstico precoz en zonas de alta prevalencia, en individuos de alto riesgo o en zonas donde
otros métodos de diagnóstico como ELISA, Western Blot oamplificación de ácidos nucleicos no estén disponibles (1).

También son de gran utilidad en elmomento del parto, especialmente para el diagnóstico de mujeres que no hayan
sido controladas durante el embarazo. Por otra parte, estas pruebas rápidas constituyen una herramienta diagnóstica que
puede desempeñar un papel importante en campañas de prevención y diagnóstico en entornos clínicos y no clínicos,
facilitando de esta manera, la detección precoz de la infección. WL Check HIV 1/2 es un ensayo
inmunocromatográfico "in vitro", de lectura visual, para la detección cualitativa de anticuerpos contra losvirus HIV-1
y HIV-2 en suero, plasma y sangre entera.La prueba consta de un cassette plástico que contiene:

 Una membrana de nitrocelulosa sensibilizada con antígenos recombinantes para HIV-1 (gp41) y HIV-2 (gp36) en la
zona de prueba "T", conjugados a oro coloidal. La muestra y el buffer se agregan en el pocillo de muestra "S"
solubilizando ymezclándose con el conjugadode antígenos recombinantes.

Seguidamente, esta mezcla migra por capilaridad a través de la membrana de nitrocelulosa. Si la muestra es reactiva, los
anticuerposanti HIV-1 y HIV-2 presentes, formarán un complejo con los antígenos conjugados a oro coloidal. Este complejo
seuniráposteriormente alos antígenos inmovilizadosen la zona de prueba"T" de la membrana de nitrocelulosa, formando
así una línea de color rosa-rojo púrpura. La ausencia de dicha línea indica un resultado negativo. Como control de
procedimiento, la prueba incluye unazonade control "C"de color celeste quecambiaacolor rosa-rojo púrpura tras el
paso de la muestra. La ausencia de estalíneainvalida losresultados.

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OBJETIVO:
1. Describir y comprender el procedimiento y fundamento de pruebas rápida del tipo directo (Ags) e Indirecto (Acs).

 DIAGNÓSTICO DEL EMBARAZO:

A. MATERIALES
 Muestra de suero y/o orina
 Test entira
 Contenedor para la recolección de la muestra
 Cronómetro

B.PROCEDIMIENTO
 Deje que la placa, la muestra de orina o suero y/o los controles alcancen la temperatura ambiente (15- 30°C) antes de
realizar la prueba.
 Deposite 3 gotas de orina o suero (aproximadamente 100μL) en el pocillo de la placa (S) y ponga en marcha el
cronómetro.Evite que queden retenidas burbujas de aireen el pocillode la placa(S).
 Esperehastaqueaparezcanuna odoslíneascoloreadas.Losresultadosdeberán leerse a los3minutoscuandoseanalice
orinaoalos5minutoscuandoseanaliceuna muestra de suero.

NOTA: Una concentraciónbajade hCG podríadarlugar,despuésde unperiodo de tiempoprolongado,ala apariciónde una

débil línea en la región de la prueba (T);por tanto,nointerpreteel resultadodespués de 10 minutos.

C.INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
 POSITIVO:Aparecen dos líneas coloreadas distintas.Una líneaquedará en la región de control (C) y otralíneaquedará
enlaregióndelaprueba (T).
 NEGATIVO:Unalíneacoloreadaapareceenlaregióndecontrol(C).Noaparece ningunalínea coloreada en la región de
la prueba (T).
 NO VÁLIDO: No aparece la línea de Control. Un volumen de la muestra insuficiente ouna técnicaincorrectasonlas
razonesmásfrecuentesdelfallodela líneade control.

 PRUEBA RÁPIDA PARA DIAGNÓSTICO DE ANTICUERPOS HIV 1+2 MATERIALES

 Muestra de suero y/o orina
 Test entira
 Contenedor para la recolección de la muestra
 Cronómetro

A.PROCEDIMIENTO
 Losreactivos ylasmuestrasdebenestaratemperaturaambiente (18-30 °C)antesde utilizar.
 Agregarlamuestra(dos gotas)sobre la superficie absorbente del pocillo e iniciar elcronómetro.
 Leer los resultados entre los 20 y 30 minutos. No leer pasado los 30 minutos ya que pueden obtenerse
resultados erróneos.
 Algunas muestras positivas reaccionan inmediatamente mientras queotras lo hacen máslentamentedentro del tiempo
de lectura indicado.

B.CRITERIOS DE VALIDACION DE LA PRUEBA

 El cassette cuenta con unalíneade colorceleste en la zona de control "C"que al realizar elensayodebecambiar acolor rosa-
rojo púrpura. Este cambio de color confirma que sehaagregadoelvolumenadecuadodemuestra,quesumigración
fueapropiaday que la realización del procedimiento fue correcta.
 Resultado Positivo (2 líneas): se observan 2 líneas de color rosa-rojo púrpura, una en la zona de prueba "T" y otra
en la zona de control "C". El resultado es positivo, aunque las intensidades del color de las líneas "T" y "C" sean
diferentes.
 ResultadoNegativo(1línea): seobserva solamente unalínea de colorrojo-rosa púrpura en la zona de control"C".
 Resultado Inválido: la ausencia de la línea de color rosa-rojo púrpura en la zona de control "C" invalida el
resultado, aunque esté o no presente la línea de color rosa-rojo púrpura en la zona de prueba "T".

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TAREA DE LABORATORIO

1.Explique el fundamento del presente esquema de prueba rápida para diagnóstico de embarazo:

La tira reactiva se pone en contacto

con la orina que se moverá a través de
las zonas de la tira por “capilaridad”.

“Pad Absorbente”

 Inicialmente hay que tener en cuenta que dicha reactiva consta de varias zonas constituidas por almohadillas ( comúnmente
conocidas por su nombre en idioma inglés como “pads”) de diferentes materiales y se tendrán 3 tipos de anticuerpos en dichas
zonas diferentes de la tira:
a.En la zona de reacción: existe un anticuerpo monoclonal para hCG y si existe hCG presente en la muestra de orina, se unirá al
anticuerpo.
b.En la zona de test: existe un anticuerpo policlonal para hCG y un colorante (generalmente “oro coloidal”). Si existe hCG en la
muestra de orina, esta llegará unida de la anterior zona con el anticuerpo monoclonal y reaccionará con el anticuerpo
policlonal de esta zona, generando de este modo un cambio de color (4).
c. En la zona de control: en esta zona se encuentra un tercer anticuerpo (con colorante) el cual reaccionará con los anticuerpos
monoclonales libres que provienen desde la zona de reacción, produciendo también un cambio de color, validando así si el test
se llevó a cabo de forma idónea (lo que generalmente se observa como la “línea control”).

 Ahora bien, cuando se realiza la prueba rápida en cuestión, la muestra (orina en este caso) se añade al extremo proximal de la
tira donde se encuentra el “pad de muestra”. En este pad la muestra es tratada o modificada, en cierto modo, para que sea
compatible con el resto del sistema. Un ejemplo para lo descrito sería: en el caso de una muestra de “sangre entera”, el pad de
muestra cumple la función de retener los glóbulos rojos y dejar pasar el plasma. En base a ello, en el presente caso de
una “muestra de orina” el pad de muestra contiene sales capaces de tamponar dicha muestra para que ingrese al sistema con un
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determinado pH. Luego, la muestra tratada continúa su camino a través de esta zona hacia el siguiente pad, donde se encuentra
inmovilizado un “conjugado de partículas”, las cuales generalmente son de oro coloidal o en ciertos casos de látex
coloreado. Asimismo, dichas partículas ya han sido previamente conjugadas con cierto componentes biológico específico
requerido para la presente prueba, en este caso el “el anticuerpo monoclonal” para la hCG. Pues bien, la muestra “rehidrata
y solubiliza” el conjugado seco que se encuentra inmovilizado en dicho pad.

De este modo, el “analito” presente en la muestra interactuará con el conjugado en cuestión, dando paso a la mezcla que
migrará por “capilaridad” hacia la siguiente sección de la tira reactiva constituida por una “membrana de nitrocelulosa”, la cual
va a funciona como la matriz de reacción durante todo el periodo que dure la prueba (5). Es prudente decir que esta “matriz de
reacción” es una membrana porosa, en la cual el segundo componente biológico específico del ensayo se encuentra
inmovilizado, en este caso el “anticuerpo policlonal”, el mismo que estará dispuesto en forma de bandas en las áreas específicas
de la membrana que servirán para capturar el analito y el conjugado a medida que migran a través de la membrana.

Nota: el exceso de reactivos migrará más allá de las líneas de captura y quedará atrapado en el “pad absorbente” ubicado en el
otro extremo de la tira.

Sin duda, cabe aclarar que la presente prueba rápida es de tipo directo, dado que son los más comunes y utilizadas
principalmente cuando se tiene la intención de detectar analitos de gran tamaño, poseedores de múltiples sitios antigénicos,
tales como lo es la hCG (6). Finalmente, los resultados se interpretan en la matriz de reacción como la presencia o ausencia de
líneas de conjugado capturado, en base a ello se tiene:

 Un resultado positivo: es indicado por la presencia de una línea de prueba (línea T). Algunas de las partículas conjugadas no
serán capturadas en la línea de captura y continuarán fluyendo hacia la segunda línea de anticuerpos inmovilizados, la línea
de control (C) en la zona del mismo nombre.

Nota: la línea de color rojo en la zona de test (T) puede variar dependiendo de la concentración de hCG presente. Sin embargo,
ni el valor cuantitativo ni la tasa de aumento de hCG puede determinarse por esta prueba cualitativa.

 Un resultado negativo: una línea coloreada aparece en la zona de control (C) pero se observa la ausencia de una línea
coloreada en la zona de la prueba (T).

 Un resultado inválido: se considera un resultado inválido si no aparece ninguna línea en la zona de control (C), incluso si
aparece una línea en la zona de la test (T), por lo que es recomendable repetir la prueba con otra tira, teniendo siempre en
cuenta las especificaciones de cuidado que se brindan en los distintos kits de prueba a emplear, dado que incurrir en su mal
empleo es una causa típica de obtener un resultado inválido, a parte claro está de otras causas como una muestra
insuficiente.

Nota: para verificar que la prueba se ha llevado a cabo de forma idónea, la “línea de control” (C) debe formarse,
independientemente de si el resultado es positivo o negativo en la zona de test (T).
La muestra de sangre y el tampón se Anticuerpo preadherido para
añaden al pozo de la prueba, cualquier detectar anticuerpos de interés en
anticuerpo contenido en la muestra la muestra de sangre
comenzará a fluir por la tira

Antígeno marcado con oro para su detección.

Preajuste en la almohadilla de conjugado.

Los anticuerpos de control se unen a la línea

Anticuerpo de control marcado con oro. de control para mostrar que todas las partes
Preajustado en la almohadilla de conjugado.
de la prueba funcionaron correctamente

El exceso de anticuerpos, el tampón

Flujo direccional de la prueba antígeno marcado y las plaquetas de la
Los anticuerpos de la muestra de sangre que sangre llegan finalmente a la
son específicos del antígeno de interés son almohadilla de absorción
captados en la línea de prueba

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2.Coloque sus fotos de la práctica:

Referencias Bibliográficas:

1. Mercado Martinez, Pedro. Manual De Practicas Inmunología Básica. Universidad Privada Antenor Orrego -
Facultad de Medicina Humana.

2. William Rojas M, Juan-Manuel Anaya C, Luz Elena Cano, Beatriz h. Aristizábal B, Luis Miguel Gómez O,
INMUNOLOGÍA DE ROJAS 2017. Corporación para Investigaciones Biológicas-CIB. Medellín- Colombia.

3. Bruno Lomonte Vigliotti. 2007. Manual de Métodos Inmunológicos. UNIVERSIDAD DE COSTA RICA.
http://www.kerwa.ucr.ac.cr/bitstream/handle/10669/9244/2007_Manual_Metodos_Inmunologic os_compl
eto_web.pdf?sequence=1&isAllowed=y

4. MONLAB. Prueba Rápida de Embarazo hCG en placa MonlabTest® (Suero/Plasma/Orina) [Internet].

www.monlab.es. 2018 [citado 6 diciembre 2021]. Disponible en:
https://www.monlab.es/document/Muestras%20orina/IFU%20pruebas%20embarazo%20placa%20monlabte
st.pdf

5. CROMATEST. Β-hCG cassette [Internet]. www.linear.es. 2018 [citado 6 noviembre 2021]. Disponible en:
http://www.linear.es/ficheros/archivos/363_4130040hCGcassette40t(orinayplasma)cas.pdf

6. Díaz y Orea MA. et all. “Determinación De Anticuerpos Anti Gonadotropina Coriónica Humana En Mujeres
Embarazadas Con Y Sin Preeclampsia” [Internet]. www-optica.inaoep.mx. 2017 [citado 6 noviembre 2021].
Disponible en: https://www-optica.inaoep.mx/~tecnologia_salud/2017/Resumenes/MyT2017_044_E.pdf