Liceo Bicentenario Teresa Prats

Profesora: Fernanda Aldea Pereira

Electivo Biología Celular y Molecular 4° Medio

TRABAJO PRÁCTICO Nº 1
Microscopía

Gran parte de los conocimientos que se tienen en el campo de la Biología han sido obtenidos gracias a
la aparición y perfeccionamiento del microscopio óptico. Existen en la actualidad varias clases de
microscopios, todos ellos instrumentos que principalmente permite ver objetos demasiado pequeños
para el ojo humano, es decir producen imágenes aumentadas.

Algunos tipos de microscopios

Microscopio de luz - Luz corriente Resuelven objetos separados

(convencional o invertido) - Epifluorescencia hasta por 0.2 μm
- Confocal

Microscopio electrónico - de transmisión Resuelven objetos separados

- de barrido hasta por 2 nm.

Usted trabajará con un microscopio óptico compuesto, llamado así pues contiene dos arreglos de
lentes: el objetivo que produce una imagen aumentada, y el ocular que aumenta la imagen producida
por el primero.

RECOMENDACIONES

1. Cuando tenga que trasladar el instrumento tómelo siempre por la columna.

2. Llévelo en posición vertical, si se inclina se pueden caer los oculares.
3. Mantenga las lentes limpias usando solamente el paño apropiado que usted tiene para este efecto.
4. No deje el microscopio en el borde de su mesón.
5. Una vez ubicado el microscopio en su lugar, no lo mueva más. Nunca use los dedos.
6. No saque los oculares, se le podrían caer y quebrar; además entraría polvo en el interior del tubo.
7. No mueva ninguna pieza si no se conoce exactamente su uso.
8. No coloque el mechero de gas encendido cerca del microscopio.
9. No moje el microscopio con ningún líquido. Si ello llegara a ocurrir, séquelo inmediatamente.
10. Los movimientos de enfoque deben ser suaves, especialmente si está moviendo el macrométrico.
11. Las preparaciones deben colocarse sobre la platina con el cubreobjetos hacia arriba (no se aplica
para microscopio invertido).

DESCRIPCIÓN DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

El microscopio óptico compuesto consta de partes mecánicas, de iluminación y ópticas que se

describen a continuación.

Sistema mecánico: Es el armazón metálico que sostiene al sistema óptico y al de iluminación,

dándoles la posición adecuada y permitiendo los movimientos necesarios para la correcta
coordinación entre ambos.
 ● Base o pie: Permite la sustentación del microscopio siendo de forma variable. En algunos
modelos, además sostiene al espejo y/o a la fuente de luz.
● Columna: es el pilar que sostiene al tubo, platina, condensador y sobre el cual están
montados los tornillos focalizadores.
● Platina: es una plataforma horizontal con un orificio central, que permite el paso de rayos
luminosos, sobre la cual se coloca el objeto a observar (montado sobre un soporte de vidrio o
plástico adecuado). La platina posee dos pinzas destinadas a sujetar la preparación y
generalmente es móvil, de manera que la preparación pueda ser desplazada horizontalmente.
● Tubo: cilindro metálico hueco cuya superficie interna es completamente negra para evitar la
reflexión de la luz. En su extremo superior se encuentra el ocular, en tanto que en el inferior
se encuentra situado el revólver. En general la longitud del tubo es de 170 mm.
● Revólver (tambor): mecanismo situado al extremo inferior del tubo donde se instalan los
diferentes objetivos. El revólver está diseñado de manera que si se ha enfocado con uno de los
objetivos (es recomendable comenzar con el de menor aumento), el foco no se pierda al
cambiar de objetivo rotando el revólver, esto se conoce con el nombre de sistema parafocal.
● Tornillos para la focalización: la platina junto con parte del sistema de iluminación se
desplazan verticalmente por medio de dos tornillos: el macrométrico, para un enfoque
aproximado, y el micrométrico para movimientos destinados al enfoque de precisión
(en muchos microscopios ambos tornillos van juntos).

Sistemas de iluminación: se encuentra ubicado bajo la platina.

● Lámpara: está constituida por una fuente de luz (ampolleta). La luz es
homogeneizada por un filtro mate (esmerilado). En algunos casos el haz de luz es
dirigido hacia el objeto por espejos. En los microscopios antiguos en el lugar de la
lámpara se encuentra un espejo de dos caras.
● Condensador: conjunto de lentes ubicado bajo la platina que puede moverse
verticalmente por medio de un tornillo y permite concentrar los rayos luminosos para
obtener una imagen más nítida.
● Diafragma-iris: está adosado al condensador (se mueve verticalmente junto con
este). Su función es regular el paso del haz luminoso.
● Anillo portafiltro: es un anillo ubicado bajo el diafragma-iris que puede moverse
lateralmente mediante una palanca; sobre él se puede colocar uno o más filtros.
● Lente de campo: lente condensador accesorio. Se usa cuando se enfoca con el
objetivo de mayor aumento.

Sistema óptico: consiste en un conjunto de lentes (montados en el tubo) que producen la

imagen.
● Objetivos: Cada uno está formado por asociaciones de varias lentes convergentes que
actúan como si fueran una sola lente con una distancia focal determinada. Los
objetivos van montados en el revólver. En algunos objetivos, especialmente diseñados
para captar la mayor cantidad de luz proveniente de la muestra, se tiene que poner una
gota de líquido (con el mismo índice de refracción que el de la lente) entre la muestra
y el objetivo. Estos objetivos se llaman de inmersión. Hay objetivos de inmersión que
requieren agua y otros aceite mineral.
 ● Oculares: Se sitúan en el extremo superior del tubo al cual el observador aplica el
ojo. Cada ocular está formado por la combinación de la lente ocular propiamente tal y
la lente colectora o de campo. Los oculares corrigen las aberraciones ópticas y
producen una imagen aumentada.

MANEJO DEL MICROSCOPIO

Experiencia Nº1
Rotule el esquema que se adjunta. Si tiene alguna duda o existe alguna diferencia entre el
aparato que usted tiene y el esquema adjunto, consulte a su instructor. Instale su microscopio
de la siguiente manera:
● El tubo va dirigido hacia usted.
● El revólver, dejando sobre la preparación el objetivo de menor aumento,
(generalmente es el más corto). El revólver se mueve siempre en sentido contrario a
los punteros del reloj.
● El condensador en su posición más alta.
El observador debe sentarse cómodamente frente al microscopio, el cuerpo erguido y la
cabeza inclinada sobre el ocular. Mientras observa, una mano maneja el tornillo micrométrico
y la otra desplaza la platina. Debe observarse con ambos ojos abiertos y manteniéndolos
separados del ocular.
Experiencia Nº2. Observación de un trozo de papel de diario.
Conecte el enchufe del microscopio (o del transformador) a la red de 220 V; al encender la lámpara, el
campo visual se iluminará homogéneamente.

Moje un trozo pequeño de papel de diario y adhiéralo a un portaobjetos. Coloque la preparación en la

platina con el papel hacia arriba y centrado. Ubique el objetivo de menor aumento sobre la
preparación. Utilizando el tornillo macrométrico suba la platina a su tope máximo y luego, baje
lentamente mientras observa hasta lograr enfocar correctamente. Mejore el foco con el micrométrico.
Si la luz resulta excesiva (mala definición) cierre un poco el diafragma. Si a pesar de ello hay mucha
luz, emplee filtros y/o disminuya la intensidad de la fuente luminosa.

Cambie a un objetivo de mayor aumento; mejore el foco con el micrométrico. Con cada objetivo
recorra su muestra moviendo la platina.

Experiencia Nº 3. Célula vegetal

Se le entregará un trozo de catáfilo de cebolla del cual deberá extraer, desde la cara cóncava, un trozo
de epitelio de cebolla ("tela de cebolla"). Colóquela sobre un portaobjetos, agregue gotas de agua y
ponga sobre ella un cubreobjetos, cuidando que no queden burbujas de aire. Haga sus observaciones
con aumento menor, mediano y mayor. Dibuje y rotule en su cuaderno cada caso, anote los aumentos.

Tiña la muestra con azul de metileno y observe estructuras muy cercanas entre sí para que tenga una
idea acerca del poder de resolución del instrumento (capacidad del instrumento de dar imágenes bien
definidas de puntos situados muy próximos entre sí en un mismo plano focal).

Observe utilizando el aumento mayor, distintos planos focales de su preparación. Note que cuando
enfoca también se ven estructuras que están en otros planos (o fuera de foco), esto es una indicación
de poder de penetración del instrumento (capacidad del instrumento de dar imágenes bien definidas de
puntos situados muy próximos entre sí pero en distintos planos focales).

Responda en su cuaderno las

siguientes preguntas:
1. ¿Qué tipo celular es el que
se presenta en la imágen?
2. Rotule las diferentes
estructuras celulares.
3. Compare lo observado con
lo de la imágen e indique las
diferencias.
Experiencia Nº 4. Observación de frotis de mucosa bucal.
Con un palito o cotonete ráspese delicadamente la mucosa bucal y luego frótela sobre un portaobjetos.
Deje caer una gota de azul de metileno, espere 3 minutos y lave con gotas de agua. Ponga sobre ella
un cubreobjetos, cuidando que no queden burbujas de agua. Haga sus observaciones con aumento
menor, mediano y mayor. Dibuje y rotule en su cuaderno cada caso, anote los aumentos.

Responda en su cuaderno las

siguientes preguntas:
4. ¿Qué tipo celular es el
que se presenta en la imágen?
5. Rotule las diferentes
estructuras celulares.
6. Compare lo observado
con lo de la imágen e indique las
diferencias.

INFORME DE LABORATORIO

Observación catáfilo de cebolla

Aumento 4X

Aumento 10X

Aumento 40X
Observación de frotis de mucosa bucal.
Aumento 4X

Aumento 10X

Aumento 40X

Responda las siguientes preguntas

1. ¿Por qué es importante la tinción para la observación al microscopio?

2. Investigue sobre diferentes tipos de tinciones y sus efectos.