Microscopía

domingo, 25 de julio de 2021 1:42 p. m.

La microscopía es la observación de objetos muy pequeños bajo grandes aumentos.

Unidades de medida
-mm: 0,001m
-µm:0,000001m
-nm:0,000000001m
-Å:0,0000000001m
-pm:0,000000000001m

El límite de resolución del ojo humano está entre 0,1 y 0,2 mm, esto quiere decir que la distancia mínima entre el punto que estoy viendo y mis ojos
debe estar entre este intervalo para que así pueda ser visible.

Cuando las estructuras que quiero observar se encuentran por debajo de mi límite de resolución tenemos que hacer uso de algunos instrumentos
que producen una imagen aumentada del objeto.

Microscopía óptica
-También llamado microscopio compuesto ya que el microscopio óptico tiene dos lentes
-se dice que la lupa es el microscopio óptico más simple ya que cuenta con solo un lente, por ende, la complejidad de un microscopio
óptico dependerá del número de lentes que este posea.
- hay dos tipos, microscopio binocular y mono ocular.

Oculares: lentes que cuentan con aumento de 10x.

Revolver: estructura móvil que nos va a permitir cambiar el objetivo.
Objetivos: un microscopio de rutina en el laboratorio tiene 4 objetivos, el
Rojo con un aumento de 4x, amarillo 10x, azul 40x, blanco 100x, máx150x.
Base: soporta la mayor parte de las estructuras del microscopio, cuenta con
El cable que provee la energía al microscopio el cual cuenta con un bombillo
Que tiene una salida de campo de luz
Tornillo macrométrico: permiten que la platina suba o baje
Tornillo micrométrico: mover la platina igual que el macrométrico pero de
Manera más fina para enfoque.
Platina: sostiene la lámina y la ubica correctamente para que pueda pasar
La luz sobre nuestro espécimen. Contiene fijadores y coordenadas a sus lados.
Condensador: reducir la distorsión de la luz que sale del bombillo.
Diafragma: nivela la intensidad de la luz.
Botones de desplazamiento: uno mueve la platina de izquierda a derecha
Y el otro mueve de adelante hacia atrás.

-El microscopio óptico se sirve de la luz visible para generar una imagen.
-La luz visible hace referencia al espectro electromagnético, en el espectro electromagnético existen diferentes longitudes de onda.
-el rango de la luz visible está entre 700nm-380nm, por ende la imagen formada de la luz visible debe estar en ese rango de longitud de
onda.
-el espectro electromagnético depende de la frecuencia de la onda y la longitud de esta, ya que, de esto depende la luz que se vaya a
utilizar(luz visible, luz ultravioleta, etc.)
-en los ópticos 0,2micras, con luz blanca 0,25 y 100-170 con rayos UV.

Aumento
-la capacidad que tiene el microscopio de formar una imagen más grande, es decir que ocupe una mayor superficie en la retina.
-el poder de aumento de un lente está determinado por el grado de curvatura de su superficie y la distancia focal.
-en las lentes convexas a mayor distancia focal mayor será el aumento.
-10x- la equis hace referencia al tamaño original del objeto que se está estudiando, y el número hace referencia a las veces que este
objeto ha sido aumentado desde su tamaño original.
-el aumento total será la multiplicación del aumento ocular por el aumento del objetivo.

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Resolución
-Capacidad que tiene un sistema óptico para aislar dos puntos que se encuentran muy próximos entre sí.
-Límite de resolución es la distancia mínima entre punto y punto, estaríamos hablando de micras en el óptico y nanómetros en el
electrónico.
-el límite de resolución es inversamente proporcional a la resolución.
-a menor longitud de onda, mayor resolución.
-aumentando la longitud de onda, disminuye la resolución.
-la apertura numérica es directamente proporcional al poder de resolución.

AN= n(índice refractivo) *Sin (a)

¿Cómo se puede aumentar la resolución?

-disminuyendo la longitud de onda(puede ser mediante filtros de color azul)
-entre mayor sea la apertura numérica, los rayos pegan en el espécimen y se dispersan
Formando un ángulo alfa, los índices de refracción ya están establecidos, Ej: aire: 1
Aceite o vidrio: 1,51; agua: 1
-utilizar el condensador, se recoge y condensa la luz antes de que se ilumine el objeto
-aceite de inmersión en casos especiales.

Factores que determinan el poder de resolución

-la interacción entre los rayos de luz y el espécimen pueden alterar la resolución.
-la luz incidente proveniente del objeto es desviada de su trayectoria inicial y mientras
Más pequeño sea un objeto, mayor será dicha desviación.
-las características de la imagen serían aumentada, invertida y virtual(ya que se está viendo en ese momento y no es almacenable).
-encontraremos rayos que se alteran y rayos que no se alteran por el espécimen antes de entrar al lente del objetivo.
-α es la mitad del ángulo de apertura formado por el cono de luz proveniente del objeto.
-la calidad de un objetivo es mayor cuanto más elevada esté su apertura numérica.
-a mayor cantidad de rayos capturados por el lente objetivo mayor será el poder de resolución.

Conceptos faltantes:
-campo visual: zona circular, zona que se observa al mirar la preparación bajo un
Determinado aumento
Si el aumento es mayor el campo disminuye.
-contraste: diferencia que podemos encontrar en términos de apariencia entre las partes
Adyacentes de un objeto o entre un objeto y su fondo
Aberraciones: la imperfección que puede tener un sistema óptico en el momento que
Se produce la imagen.

Clases de microscopios

Microscopio de campo oscuro

-variante del microscopio óptico compuesto
-la luz debido a un diafragma de campo oscuro la luz no pasará de forma recta en el condensador si no que la luz vendrá de forma
perpendicular desde los lados.
-en este la única luz que es capaz de entrar al objetivo es la que fue dispersada por la muestra
-la desventaja principal de esta técnica es que presenta imágenes
Con poca resolución debido a la falta de rayos directos para
Presentar completamente la información de la muestra
-útil para observar estructuras muy delgadas y microorganismos
Sin teñir, debido a que debido a esta técnica el objeto aparece
Como una mancha brillante sobre el fondo oscuro.

Microscopio de campo brillante

-se recomienda para muestras de alto contraste, como los cortes teñidos de tejidos.

Microscopio de contraste de fase

- nos dará un mayor contraste entre el fondo y el especimen que queremos estudiar
-permite visualizar células sin necesidad de tinción, es decir vivas
-nos va a permitir examinar componentes intracelulares con células de una resolución hasta cierto punto alta, observando
cromosomas mitóticos y vacuolas.

Microscopio diferencial de contraste de interferencia

-utiliza luz ultravioleta
-un rayo de luz atraviesa la muestra y el objetivo y luego se divide en dos rayos que se interfieren entre si por medio de un prima
condensador ubicado en el condensador, generando luz polarizada.
-utilizado en procedimientos como la fertilización in vitro

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-utilizado en procedimientos como la fertilización in vitro
-las imágenes aparecen como si la célula estuviera proyectando sombras hacia un lado, dando el efecto de imagen tridimensional,
Diseñado especialmente para ver relieves de especímenes de difícil manejo.

Microscopio de fluorescencia
-se utiliza para visualizar muestras capaces de emitir fluorescencia que absorben radiación ultravioleta invisible y emiten porciones de la energía en
las longitudes de onda visibles, más largas
< que absorben porciones de radiación ultravioleta invisible y emiten parciales de la energía en las longitudes de ondas visibles.
-la fuente de luz de este microscopio es de rayos ultravioletas.
-se necesitan filtros para poder por un lado se llegue a la longitud de onda a la que se va a excitar el fluoróforo y otro quenos permita evidenciar la
longitud de onda que se va a absorber.

Microscópio confocal de barrido Láser

Produce una imagen de plano delgado situado dentro de un especimen mucho más grueso, la muestra
se ilumina con un rayo láser con un enfoque fino que barre rápidamente el espécimen a una sola
profundidad, con lo que solo ilumina un plano delgado( o corte óptico dentro de la muestra)

Fluorocromos: absorben la luz incidente y emiten luz con mayor longitud de onda, que puede pasar por
el espejo dicroico y enfocarse en un plano que contiene abertura diminuta, la luz pasa luego a un tubo
fotomultiplicador que amplifica la señal, la cual se transmite a una computadora que forma una imagen
digital procesada.

Microscópio electrónico

-utiliza haz de electrones para iluminar un objeto, dado que los electrones tiene una longitud de onda más baja que la de la luz visible, lo
que permite mostrar estructuras más pequeñas.
-reduce su longitud de onda(0,005nm) reduciendo el límite de resolución.
-lentes electromagnéticos.
-muestra muerta y deshidratada.
-preparación de la muestra compleja en un medio de vacío.

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Microscópio electrónico de transmisión(TEM)
-forma imagen con los electrones que se transmiten a través del espécimen,
-para utilizarlo se debe cortar la muestra en capas finas para que los electrones puedan atravesar la muestra.
-se coloca una placa fotográfica o una pantalla fluorescente detrás del objeto para registrar la imagen aumentada.
-se puede aumentar un objeto hasta un millón de veces.
-se utiliza más para estudiar la estructura interna de una célula
-amplificación de hasta 1000000x

Microscópio electrónico de barrido(SEM)

-imágenes tridimensionales y superficiales
-amplificación de 300000x
-no es necesario cortar el objeto en capas para observarlo
-se usa por lo general para explorar la superficies de los objetos cuyos tamaños
Varían, como por ejemplo un virus o la cabeza de un animal

Para poder estudiar una célula(en si para cualquier cosa en un microscopio pero en este caso una célula). Se debe llevar a cabo una preparación
previa de la muestra, para así poder llevara cabo su estudio correctamente y poderle sacar el mayor provecho a la misma.

Por ello, existen distintas maneras para la preparación de una muestra:

En Fresco
Técnica usada para la observación In Vitro utilizada para el estudio de los caracteres(Conjunto de rasgos, cualidades) de
movilidad bacteriana, morfología(forma), agrupación y estructuras de resistencia de parásitos. Existen dos técnicas de
preparación en fresco:

-Preparación en fresco simple (permite la observación de organismos acuáticos) la cual consiste en colocar una gota de
líquido con los microorganismos que se van a estudiar en el portaobjetos y cubrirla seguidamente con un cubreobjetos.
-Preparación en gota pendiente se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos y cubrirlo con un
portaobjetos( proceso invertido) con una excavación central, (denominándose así portaobjetos excavado). Hay que sellar
la excavación con vaselina alrededor de la excavación, la ventaja de dicha preparación es que no se seca, por ello puede
ser observada por un tiempo más largo.

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 La preparación en fresco es utilizada para observar microorganismos vivos.
para la búsqueda de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales. Este protozoo de gran movilidad causa inflamación
de la vagina y la uretra. Si en la preparación se observan células en forma de huso que se mueven mediante
contracciones o sacudidas cruzando el campo, probablemente se tratará de T. vaginalis, pudiéndose efectuar el
diagnóstico.

Es necesario el hecho de que sea vivo, ya que existen diversos factores para que este protozoo se mantenga vivo, para explica r el más
importante, es necesario conocer que el ph vaginal normal es de 4,5. Para que este protozoo se desarrolle y mantenga vivo nec esita de un ph
de 5,5.
Este protozoo, para seguirse desarrollando provocará un aumento en la alcalinidad. Toda está explicación es para decir esto, si el protozoo no
se mueve, esto quiere decir que no está provocando un aumento en el ph vaginal y por ende, no podría seguir viviendo.
Si se ve que no provoca aumentos ni nada y el protozoo sigue ahí, puede tratarse de otra cosa.

Sin embargo, el inconveniente con la observación en fresco es que no permite aumentar el contraste de la preparación, por
tanto el uso de un microscopio de campo claro con este es bastante limitado. (indagar tipos de microscopios ópticos).

Aplastamiento

- Consiste en aplastar el objeto de estudio entre el porta objeto y el cubre objeto. De esta forma se realiza una disociación
y una disrupción. Es una técnica rápida y útil para algunos casos, pero rudimentaria. Con esto último se da por hecho la
preparación de una lámina microscópica permanente o semipermanente.

- Sirve para observar tejidos blandos, cariotipos de células vegetales que permiten visualizar los cromosomas que
contienen dichas células

Esto corresponde con los estudios holísticos, donde se obtiene la muestra a estudiar.(El holismo en biología, por ejemplo,
considera que los organismos vivos tienen propiedades que no se pueden predecir en función de sus componentes
químicos).

Frotis

- Extensión que se hace en un portaobjetos teniendo una muestra o cultivo con objetivo de separar los microorganismos
ya que si aparecen juntos la visión de estos sería más difícil debido a que las imágenes se verían menos nítidas o claras.
- Consiste en, poner una gota de la muestra que se vaya a estudiar( sangre, bacterias, espermatozoides, etc.), se extiende
o se impronta, después de esto se pueden teñir según la técnica que convenga.

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 Como por ejemplo los frotis de sangre que son los más comunes, se utilizan para contar el número de los distintos tipos
de célula que circulan en esta, sirviendo así par diagnosticar diferentes enfermedades sanguíneas. Siendo el lugar más
conveniente para ser estudiada el cuerpo del frotis.

Corte histológico

- Es una sección o rodaja fina que se le hace a un tejido biológico que posteriormente se adhiere a un portaobjetos, y por
lo general es coloreada con alguna tinción específica para resaltar alguna parte de la estructura.
- Por lo general dichos cortes son hechos por un micrótomo con un espesor de 0,5 a 10 micras aunque lo más común es
que sean de 6 a 10 micras.
- Se emplean por lo general en laboratorios de histología y anatomía patológica
- Su función radica en analizar el metabolismo de los órganos, su composición o para registrar electrofisiológicamente las
características de sus células.
- Gracias a esto es posible determinar algunos tipos de gérmenes socombiales ( bacterias, virus o parásitos).
- Existe una limitación en cuanto al diagnóstico histológico, puesto que no es posible determinar la cepa o la resistencia del
germen hacia los antibióticos.

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Citometría de flujo
Permite seleccionar células o componentes subcelulares enteros de una muestra.
Esto se hace mediante cámaras de sedimentación especiales, en las cuales los cromosomas se separan por sus tamaños y densidades.

Pero estas se pueden separar de una manera más eficiente, utilizando un instrumento llamado citómetro de flujo. En el que las células
fluyen de una tras otra por un tubo muy delgado, son discriminadas y entonces separadas de acuerdo con la fluorescencia que emiten. El
fluorocromo es agregado en los distintos tipos celulares mediante anticuerpos específicos.(leer pág 415 Robertis).

Determina el número de células, el porcentaje de las células vivas y ciertas características de las células(como el tamaño y forma) en una
muestra de sangre o tejido.
Las células se deben marcar con anticuerpos con sustancias fluorescentes, se hace pasar la solución de células una en una pordelante del haz de
láser.

1.El impacto de cada célula con el rayo de luz será captado por distintos detectores
2.En el momento de realizar las mediciones en el citómetro de flujo, las células pueden estar vivas o fijadas pero obligadamente en suspensión
celular y en forma de célula única. Al obligarlas a pasar alineadas una a una frente o a un haz láser mediante un flujo continuo, cada célula a la vez
que dispersa la luz emite luz fluorescente como consecuencia de la excitación láser a la que es sometida.
3.Permitir la medida simultánea de varios parámetros en una misma célula.

en resumen, se marcan las células con anticuerpos, luego la célula pasa por un sistema de vibración positivo o negativo y pasa por un campo
eléctrico que puede separar a la célula dependiendo del marcaje que tengan.

Microdisección

-mediante láser que es una tecnología que permite separar células únicas o pequeños grupos de células de manera selectiva, eficiente y
rápida, a partir de cortes de tejido, extendidos celulares, o cultivos.
-El gran potencial de la microdisección reside en su capacidad de procesar muestras para su posterior
Análisis mediante otras técnicas( para la medida de expresión génica, de proteínas, actividades enzimáticas o, incluso, metabolitos)
permitiendo analizar las funciones de una célula o tejidos concretos.
-El haz de láser recorta directamente un grupo de células, se capturan y se colocan en un contenedor
Apropiado para su análisis posterior.

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Por centrifugación
-proceso que puede separar los componentes celulares por centrifugación repetida a velocidades cada vez mayores, en estas
condiciones los componentes celulares se separan en función a su tamaño y densidad. Cuanto menor sea el tamaño del componente
subcelular mayor será la fuerza centrifuga necesaria para centrifugarlo.

-Se debe realizar a la rotura mecánica de las células con un homogeneizador mecánico
-Las células se homogeneizan en una solución amortiguada isotónica(que a menudo contiene sacarosa), lo que proviene la rotura de las
vesículas de membrana por ósmosis.
-El homogeneizado se somete a una serie de centrifugaciones secuenciales cada vez con mayor fuerza centrífuga.

Gradiente de densidad: las partículas se distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido líquido, se permite la
separación de varios o todos los componentes de la muestra.

Centrifugación zonal: en el cual se forma un gradiente de densidades y luego se deposita la muestra a analizar en la parte superior. Las
partículas se separan por la diferencia de velocidad de sedimentación a causa de la diferencia de masa de cada una.

Centrifugación isopícnica: se separan las partículas en un gradiente de densidades en función de la densidad de las mismas, es utilizada
para separar ácidos nucleicos o diferentes organelos celulares.

Centrifugación zonal: en la cual se forma un gradiente de densidades nuevamente, las partículas se separan por la diferencia en la
velocidad de sedimentación a causa de la diferencia de masa de cada una, aquellas que tenga el mismo coeficiente de sedimentación se
separan al usar métodos de diferente densidad. Común en la separación de ADN.

Separación por enfoque isoeléctrico o isoforesis:

Cada proteína tiene un punto isoeléctrico característico dando lugar a la electroforesis, teniendo en cuenta esto, en la técnica
denominada enfoque isoeléctrico se hace la electroforesis debido a un gradiente de pH, las proteínas se desplazan hasta alcanzar el pH
del punto isoeléctrico, en ese momento la migración de proteinas se detiene ya que tiene carga 0.

-cuando se juntan las técnicas de enfoque isoeléctrico y electroforesis en geles de poliacrimida (para separación de proteínas) se
aprovechan de dos propiedades de las proteínas, sus cargas (punto isoeléctrico) y su por su masa.

-cuando a las proteínas se les agrega un detergente iónico se separan por su peso molecular principalmente eso se debe a que el
detergente se une con sus proteínas y le agrega una gran cantidad de carga negativa, reduciendo así el efecto de sus cargas, moviéndose
por su masa.

-las proteínas mas pequeñas se mueven más rápido que las grandes debido a que al atravesar los poros celulares del gel de
poliacrilamida encuentran menos resistencia.

Cultivos celulares
-Es el mantenimiento o crecimiento, in vitro de células tejidos u órganos.

El procedimiento consiste en extraer una célula del tejido original y llevarlas a un ambiente artificial que permita su crecimiento,
multiplicación y mantenimiento del metabolismo, de una manera controlada.

A partir de extraer el órgano o tejido del organismo de origen se pueden obtener diferentes tipos de cultivo, distintos por su capacidad
de replicación y ser subcultivados.

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de replicación y ser subcultivados.

Las células normales( no malignas se pueden dividir una cantidad determinada de veces, por lo general de 50 a 100 veces antes de
envejecer y morir. Razón por la cual en los cultivos las células son modificadas genéticamente, permitiéndoles crecer por un tiempo
indefinido
Telomerasa: enzima responsable del mantenimiento de los telómeros. Oncogenes promotores de cáncer.
Las células de este tipo son conocidas como línea celular( células modificadas genéticamente) y casi siempre crecen para formar tumores
malignos cuando se inyectan en animales de laboratorio susceptibles.

Las células cultivadas pueden obtenerse en grandes cantidades, casis todos los cultivos contienen solo un tipo de célula, permite estudiar
actividades como, endocitosis, movimiento celular, división celular, tráfico de membrana y la síntesis de macromoléculas

-las células cultivadas responden al tratamiento con fármacos, hormonas y otras sustancias activas.
-los cultivos celulares requieren nutrimentos, hormonas, suero, factores de crecimiento y cofactores para mantenerse sanas y proliferar.
-uno de los principales objetivos: desarrollar medios libres de suero que mantengan el crecimiento de las células.
-la composición de estos medios químicos es relativamente compleja, nutrientes, vitaminas, di
Versas proteínas purificadas(insulina, factor de crecimiento epidérmico, transferrina).Mantener condiciones estrictas de esterilidad.
-La disociación se realiza con ayudas de enzimas proteolítica(tripsina)= digerir proteinas extracelulares de adhesión celular
- El tejido se lava para eliminar la enzima y se suspende en una solución salina que carece de iones de Ca+2 y que contiene
etilendiaminotetraacético(EDTA), quelando con los iones de calcio. El calcio desempeña una función importante en la adhesión
celular

Cultivos primarios
-son células trasplantadas directamente desde el tejido original hacia el medio artificial
Mismo cariotipo, número de cromosomas y cromatina

-Suele tener duración limitada y se llama cultivo celular finito.

-cultivos en monocapa: adheridas
-cultivos en suspensión: dispersas
-cultivo tridimensional

-Contiene una población celular variada: después de un tiempo la población con la reproducción celular más alta predomina, la que no,
desaparece.
Se pueden obtener mediante explantes primarios o de suspensiones de células disgregadas.

Explantes primarios
Se coloca un fragmento de tejido o de órgano en la interfase sólido líquido de un soporte. Las células se adhieren a la superficie y las de
la periferia pueden migrar y proliferar por la superficie de un soporte.

Disgregación celular
Se pierden las interacciones célula-célula y las célula-matriz extracelular. Las células son capaces de proliferar y la población celular crece
notablemente.

Cultivo secundario
-proviene de un cultivo primario y las células están criopreservadas en nitrógeno líquido.
-se les dice también diploides porque tienen el mismo número de cromosomas 2n que las células de las que provienen. Son comúnmente
utilizados en la fabricación de vacunas víricas.

En estas condiciones las células suelen multiplicarse hasta cubrir la superficie celula, en el recipiente se forma una monocapa( una capa
de células de espesor).

Línea establecida: cultivo celular que tiene alta capacidad de multiplicarse in vitro, proveniente de un cultivo primario, teniendo las
mismas características que el tejido de origen.

Cultivos de masa y clonal

Cultivo de masa: una cantidad de células mas o menos grandes de célula se agrega a una caja de cultivo, se asientan y se unen al fondo
para formar una capa relativamente uniforme de células, las células que sobreviven, crecen y se reproducen creando una monocapa que
cubre el fondo de la caja.

Cultivo clonal: se agrega una cantidad hasta cierto punto pequeña en una caja de cultivo para que cada célula esté a una distancia
considerable de su vecina, en este caso, cada célula prolifera independientemente formando una colonia o clon separado cuyos
miembros provienen de la misma célula original.

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miembros provienen de la misma célula original.

Radioisótopos
-Los isótopos son radioactivos cuando contienen una combinación inestable de protones y neutrones, tendiendo así a romperse o
desintegrarse, con lo que alcanzan una configuración más estable.
-cuando un átomo se desintegra, puede liberar partículas o radiación electromagnética que puede vigilarse con los instrumentos
apropiados.
-rastreador: sustancia que revela su presencia de una forma u otra y por tanto puede localizarse o vigilarse durante el curso de su
experimento.
-isótopos átomos con misma cantidad de protones y diferente número de neutrones.
Vida media: es una medida de la inestabilidad que puede tener un radioisótopo, entre más inestable mayor es su probabilidad de que un
átomo se desintegre en un tiempo específico.
Formas principales de la radiación :
Partícula Alfa: libera dos protones y dos neutrones.
Partícula Beta: que equivale a un electrón.
Radiación Gamma: radiación electromagnética o fotones

Radioterapia
-Se utilizan rayos x de alta potencia, partículas o semillas radiactivas para destruir las células cancerígenas. Se utiliza principalmente para
combatir tipos de cáncer.
-reducir el tamaño del tumor lo más que se pueda antes de la cirugía.
-ayudar a evitar que el cáncer reaparezca después de la cirugía o la quimioterapia.
-aliviar los síntomas causados por el tumor.
-tratar cánceres que no se pueden extirpar por cirugías.

Autorradiografía
-Método que utiliza material radioactivo para marcar a nivel molecular, celular y tejidos.
-La muestra que contiene la sustancia radioactiva se coloca en contacto directo con una capa gruesa de emulsión fotográfica
-Los átomos radioactivos de la muestra se desintegran y la radiación emitida activa los granos individuales de bromuro de plata de la
emulsión y los hace susceptibles a convertirse en plata metálica
-Por medio de un revelado fotográfico, el patrón de granos resultantes indica la distribución del material radioactivo en la muestra.
-El átomo de tritio es el radio isótopo más usado, por ejemplo se utiliza la trimidina tritiada para estudiar el metabolismo y el mecanismo
de replicación de ADN.

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Análisis de proteínas
P.transporte: canal de potasio, mioglobina,albúmina
P.estructura: colágeno,histonas
P.catálisis:pepsina, polimerasa de DNA, Lisozima
P.movimiento:miosina
P.regulación y señalización:insulina, factor de transcripción, inmuno-gamma-globulina.

Espectrofotómero
-permite identificar la cantidad de proteína o ácido nucléico presente en una solución determinada por medio de la medición de la
cantidad de luz de una longitud de onda específica que absorbe esa solución.
-la solución se deposita en un recipiente especial de cuarzo(cubeta), con lados planos(se usa esto porque el vidrio no absorbe luz
ultravioleta).
-la cantidad de luz que pasa sin ser absorbida(luz transmitida), se mide en fotoceldas.
-la absorbancia de la solución en esta longitud de onda proporciona una medida de la concentración de la proteína.

Cristalografía por rayos x(difracción de rayos x)

-la radiación que se dispersa( difracta) por los electrones de los átomos de la proteína, golpea un detector sensible a los electrones
situado detrás del cristal.
-los cristales de proteína se bombardean con un fino haz de rayos x de 0,1 a 0,2nm de longitud de onda.

-Fotografía 51 es el nombre dado a una imagen del DNA obtenida por Rosalind Franklin mediante difracción de rayos x en 1952.
-el patrón de diferenciación que el cristal produce depende de la estructura interna de la proteína.

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