PRÁCTICA #3

Recuento bacteriano y obtención de cultivos puros

Miriam Morán (21187)

Universidad del Valle de Guatemala, Facultad de Ciencias y Humanidades, Departamento
de Bioquímica y Microbiología. Curso Microbiología General, Carrera Química
Farmacéutica.
INTRODUCCIÓN

Con el fin de favorecer el crecimiento y conservación de las bacterias para su estudio,

estas suelen ser sometidas ya sea en medios de cultivos líquidos o sólidos, compuestos
de nutrientes y con otros factores aptos para el crecimiento de la bacteria (Doménech,
2020). En dichos medios se puede llevar a cabo el aislamiento de bacterias a través de
diferentes métodos como: de vaciado y/o rayado; la presente práctica se basa en este
último. La técnica de rayado es cualitativa y se basa en el principio de dilución, donde se
diluye de manera gradual el inóculo inicial de la bacteria, de manera que se separan las
células bacterianas entre sí y se obtiene un número reducido de colonias (BYJU'S, 2021).
El objetivo principal de la práctica se basó en la aplicación correcta del método de rayado
de Serratia spp., en diferentes cajas Petri de agar TSA y Chromocult; este se cumplió de
manera satisfactoria, ya que, se lograron observar colonias bacterianas de
aproximadamente 3 mm de tamaño (grandes), de forma circular con borde entero,
opacas, brillantes, pigmentadas de color rojo, lisas y convexas. Cabe destacar que la
pigmentación fue morada en Chromocult.

METODOLOGÍA

La presente práctica se basó en el realizaron 4 líneas en dirección

método de rayado de la bacteria Serratia perpendicular al inóculo; para
spp., en TSA y Chromocult. Se inició posteriormente, flamear nuevamente el
rotulando las cajas Petri con las iniciales, asa y repetir esto último,
fecha y bacteria escogida. Luego, se perpendicularmente a las últimas líneas.
flameó el asa en el mechero, se tomó Finalmente, se esterilizó el asa una
una asada de la colonia y se colocó en última vez y se llevó a cabo otro inóculo
un cuarto del agar, el inóculo inicial, en el cuadrante restante, esta vez, sin
moviendo el asa forma de espiral. bacterias en el asa. Se incubaron las
Después, se volvió a flamear el asa y se cajas durante un día a 37 °C.

RESULTADOS

Figura 1. Colonias bacterianas de Serratia spp.

Nota: El agar de la izquierda se trató de Chromocult y el de la derecha TSA.
DISCUSIÓN
Como principal objetivo en la presente
práctica, se propuso la ejecución correcta
del aislamiento de la bacteria Serratia
spp., a través del método de rayado.
Dicho objetivo fue cumplido de manera
satisfactoria, obteniendo un crecimiento
considerable de colonias bacterianas en
los agares empleados.
Uno de los agares que se utilizó para el
aislamiento, se trató del tripticasa de
soya (TCA), en este medio, las colonias
de Serratia spp., manifestó la siguiente
morfología: grandes, con tamaño mayor
a 3 mm, con una forma circular de borde
entero, opacas, brillantes, pigmentadas
de color rojo, lisas y convexas. El método
de rayado en TCA resultó altamente
efectivo, puesto que, la literatura
respalda las características observadas
(Li et al., 2011). Además, en la colonia se
sintió un olor a pescado, y de igual
manera, esta propiedad también
coincidió con las fuentes
(HardyDiagnostics, 2003).
Por otra parte, se usó el agar de
Chromocult, el cual es empleado
específicamente para el crecimiento de
bacterias gram-negativas y coliformes,
por lo que, se esperaba el crecimiento de
Serratia spp.; una gram-negativa y
bacteria coliforme (Guentzel, 1996).
Cabe destacar que el medio Chromocult
presenta un sustrato Salmón-GAL que
detecta la β-D-galactosidasa, un
compuesto presente en el tipo de
bacterias mencionadas (EMD Millipore,
2020). Las colonias observadas en este
medio manifestaron las mismas
características que en TCA, lo cual se
trató de lo esperado. Sin embargo, la
coloración no coincidió, puesto que, la
pigmentación en CCA resultó morada, en
lugar de roja o rosada (González et al.,
2003).
La razón por la cual Serratia spp.,
manifestó una pigmentación morada en
CCA, fue debido a la principal fuente de
error en la práctica; la quema de las
bacterias luego de esterilizar el asa. En
las cajas Petri con CCA, después de
someter el asa a la llama, no se esperó
el tiempo adecuado antes de realizar el
rayado, afectando así los resultados.
Dicho suceso está fundamentado, puesto
que, la bacteria que se analizó cuenta
con un pigmento rojo llamado
prodigiosina. Este pigmento, al ser
expuesto a una temperatura mayor de 37
°C, deja de producirse en las bacterias,
provocando la pérdida del color rojo
(Romanowski, 2019).
En caso de próximas experimentaciones,
se recomienda el control de la
temperatura del asa al momento de diluir
las bacterias en el medio de cultivo; esto
con el propósito de evitar la muerte de
las mismas y promover su crecimiento y
conservación.
CONCLUSIONES
1. El objetivo de la práctica se cumplió
de manera satisfactoria; debido a que
se ejecutó un aislamiento de bacteria
adecuado, pudiendo observar el
crecimiento leve de colonias, luego
de su incubación.
2. Las colonias observadas en TCA
manifestaron las siguientes
características: grandes, de forma
circular con borde entero, opacas,
brillantes, pigmentadas de color rojo,
lisas y convexas.
3. En el caso del crecimiento en CCA,
se diferenció de las colonias de TCA
por tratarse de pigmentación morada.
REFERENCIAS
- Doménech, A. (2020). Medios de
cultivo. Universitat de les Illes Balears.
https://www.uib.cat/depart/dba/microbiolo
gia/seminarios/1%20Medios%20de
%20cultivo.pdf
- BYJU’S. (2021). Streak Plate
Technique. https://byjus.com/neet/streak-
plate-technique/

- González, R., Tamagnini, L., Olmos, P.,

& de Sousa, G. (2003). Evaluation of a
chromogenic medium for total coliforms
and Escherichia coli determination in
ready-to-eat foods. Food Microbiology,
20(5), 601-604.
https://doi.org/10.1016/s0740-
0020(02)00178-8

- EMD Millipore. (2020). Chromocult®

Coliform Agar - Technical Data Sheet.

- HardyDiagnostics. (2003). Serratia -

bacterial genus. Microbiology Dictionary.
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_
prod/Content/hugo/Serratia.htm

- Li, B., Yu, R., Liu, B., Tang, Q., Zhang,

G., Wang, Y., Xie, G., & Sun, G. (2011).
Characterization and comparison of
Serratia marcescens isolated from edible
cactus and from silkworm for virulence
potential and chitosan susceptibility.
Brazilian Journal of Microbiology, 42(1),
96-104. https://doi.org/10.1590/s1517-
83822011000100013

- Guentzel, N. (1993). Medical

Microbiology (4.a ed.). University of
Texas Medical Branch at Galveston.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK
8035/

- Romanowski, E. G., Lehner, K. M.,

Martin, N. C., Patel, K. R., Callaghan, J.
D., Stella, N. A., & Shanks, R. M. (2019).
Thermoregulation of Prodigiosin
Biosynthesis by Serratia marcescens is
Controlled at the Transcriptional Level
and Requires HexS. Polish Journal of
Microbiology, 68(1), 43-50.
https://doi.org/10.21307/pjm-2019-005

ANEXOS

N/A