Resumen de métodos de secuenciación

(
secuenciación
:
esel proceso mediante el cual se determing el orden preciso delas Técnical de secuenciation masivia I new
generation sequencing

NGS
).
5 millones
bases
nitrogenadas deuna cadena a ABN de bases en un corto periodo de tiempo

.
.
1. Pirosemenciacion CROCHE -
6 454)

SFLX
4S4
( fidoll

semuenciación
Métudo
sanger mediante didesoxinucleó sintesis con detección luminiscente es una secuenciación en tiempo real mide la liberación

:
,
,
sintesis enzimática de la cadena complementaria a
aquella que sequiere
secuenciar de pirofosfato cppiJ durance la sintesis deBNA cada vez que
entra un desoxiribonucleótido
reacción enzimática de polimerizacións se detecta a medida que la mava cadena sera sintetizando 3
selee amedida se da
s
que

.
.
PGSOS da la reacción
:
.
1. El BNA molde monocatenars o
2. Terminadores reversibles LILUMINA

-SOLESAJ
.
z zicht que se
emparese con el DNoA molde
y quie cstile como CEBABOR pasos 1- Union de los cebadores
y l primerosnucleótidos marcados
.Bsigonusló
0s
- TRIFOSfAtos CANTPS -7 marcado
estarci
3.4 d e s Ox i nU c Baso 2. Lavado
yexcitacion de los marcadores finorescentes anotando

.
)
UOS
,
4. BNA
Se adiciona una polimerasa los puntol aonche
hay agrupaciones
.
.
A se preparans reacciones on paralelo y a cada una sele ariacle un ddNTP diferente Paso 3, eliminacin de terminadores
y
marcadores fmorescentes

.
.
en una ae
RESUITABO obtencion cada reaccion mezda de fragmentos t
longitudes Pas 4, adicion de nuslesticos

8
nveva

.
la secuenciación automática -3
mejora dee método enzimático
.
.
combinand
megores polimerasas (Fluorocromos diferenciales PLRS
sequenasas),
,
asimétricas y se diseraron equipos que automatizan el procedimiento
.
,
l

'. JERárquiCO Manoporos y altección electrónica

.
SHOTOUN CIONPORCION SHUTOUN O 3. LOTFORBTECH

.
-MINION)
b en mapas presecuencialón identificacon mediante marcadores moleculares es la secuenciación de moléculas únicas mediante la deteccion electrinica asu paso por nanoporos
-basada
.
:
,
y se ordena un conjunto de clones solapantes I Una enzima asociada a prot que forma el nanoporo
guid al BNA

.
.
.
namoporo
DNA anara al

.2.
AGENOMACOMPLETO
,"
' cor rient
El paso de la bases nitrogenadas varian la magnitud dela
SHUTOUNAPLICADO
.
5
elgenoma completo se
fragmenta alazar seciona Se lee las variacone desorrientey y
secuencia se interpreta la

,
,
secuencian los
y se
fragmentos
.