Norma Española

UNE-EN ISO 21149

Noviembre 2017

Cosméticos
Microbiología
Recuento y detección de bacterias aerobias mesófilas
(ISO 21149:2017)

Esta norma ha sido elaborada por el comité técnico

CTN 84 Aceites esenciales y productos cosméticos, cuya
secretaría desempeña STANPA.

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 UNE-EN ISO 21149

Cosméticos
Microbiología
Recuento y detección de bacterias aerobias mesófilas
(ISO 21149:2017)

Cosmetics. Microbiology. Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria (ISO 21149:2017).

Cosmétiques. Microbiologie. Dénombrement et détection des bactéries aérobies mésophiles

(ISO 21149:2017).

Esta norma es la versión oficial, en español, de la Norma Europea EN ISO 21149:2017, que
a su vez adopta la Norma Internacional ISO 21149:2017.

Esta norma anula y sustituye a la Norma UNE-EN ISO 21149:2010.

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 Índice

Prólogo europeo .................................................................................................................................6

Declaración ...........................................................................................................................................6

Prólogo ...................................................................................................................................................7

1 Objeto y campo de aplicación........................................................................................9

2 Normas para consulta ......................................................................................................9

3 Términos y definiciones..................................................................................................9

4 Principio ............................................................................................................................ 10
4.1 Generalidades .................................................................................................................. 10
4.2 Recuento en placa .......................................................................................................... 10
4.3 Filtración a través de membrana.............................................................................. 10
4.4 Detección de bacterias por enriquecimiento ....................................................... 11

5 Diluyentes, neutralizantes y medios de cultivo................................................... 11

5.1 Generalidades .................................................................................................................. 11
5.2 Diluyentes y diluyentes neutralizantes .................................................................. 11
5.2.1 Generalidades .................................................................................................................. 11
5.2.2 Diluyentes neutralizantes ........................................................................................... 12
5.2.3 Diluyente ........................................................................................................................... 12
5.3 Diluyente para la suspensión bacteriana (solución de triptona y
cloruro sódico) ................................................................................................................ 12
5.3.1 Composición ..................................................................................................................... 12
5.3.2 Preparación ...................................................................................................................... 13
5.4 Medio de cultivo .............................................................................................................. 13
5.4.1 Generalidades .................................................................................................................. 13
5.4.2 Medio de cultivo para el recuento ............................................................................ 13
5.4.3 Medios de cultivo para la detección......................................................................... 13
5.4.4 Medio de agar para el cultivo de las cepas de referencia................................. 15

6 Aparatos y material de vidrio .................................................................................... 15

7 Cepas de microorganismos ......................................................................................... 15

8 Manipulación de los productos cosméticos y las muestras de

laboratorio ........................................................................................................................ 16

9 Procedimiento ................................................................................................................. 16
9.1 Recomendaciones generales ...................................................................................... 16
9.2 Preparación de la suspensión inicial ...................................................................... 16
9.2.1 Generalidades .................................................................................................................. 16
9.2.2 Productos miscibles en agua ...................................................................................... 16
9.2.3 Productos no miscibles en agua ................................................................................ 17
9.3 Métodos de recuento ..................................................................................................... 17
9.3.1 Diluciones para métodos de recuento .................................................................... 17
9.3.2 Métodos de recuento en placa ................................................................................... 17
9.4 Enriquecimiento ............................................................................................................. 18
9.4.1 Generalidades .................................................................................................................. 18
9.4.2 Incubación de la muestra ............................................................................................ 18

10 Recuento de colonias (métodos de recuento en placa y de filtración a

través de membrana) .................................................................................................... 18

EXTRACTO DEL DOCUMENTO UNE-EN ISO 21149

11 Detección del crecimiento (método de enriquecimiento) .............................. 18

12 Expresión de los resultados ........................................................................................ 19

12.1 Método para el cálculo del recuento de colonias ................................................ 19
12.2 Interpretación ................................................................................................................. 20
12.3 Ejemplos ............................................................................................................................ 21
12.3.1 EJEMPLO 1 Dos placas de una dilución ................................................................... 21
12.3.2 EJEMPLO 2 Una placa de una dilución ..................................................................... 21
12.3.3 EJEMPLO 3 Dos placas de dos diluciones ............................................................... 21
12.3.4 EJEMPLO 4 Dos filtros de membrana de una dilución....................................... 21
12.3.5 EJEMPLO 5 Un filtro de membrana de una dilución........................................... 21
12.3.6 EJEMPLO 6 Dos filtros de membrana de dos diluciones ................................... 22
12.3.7 EJEMPLO 7 Dos placas de una dilución ................................................................... 22
12.3.8 EJEMPLO 8 ......................................................................................................................... 22
12.3.9 EJEMPLO 9 ......................................................................................................................... 22
12.4 Detección después del enriquecimiento ................................................................ 23

13 Neutralización de las propiedades antimicrobianas del producto .............. 23

13.1 Generalidades .................................................................................................................. 23
13.2 Preparación del inóculo ............................................................................................... 23
13.3 Idoneidad de los métodos de recuento................................................................... 23
13.3.1 Principio ............................................................................................................................ 23
13.3.2 Ensayo de idoneidad del método de siembra por inclusión ........................... 24
13.3.3 Idoneidad del método de la siembra en superficie ............................................ 24
13.3.4 Idoneidad del método de filtración a través de membrana ............................ 24
13.4 Idoneidad del método de detección por enriquecimiento .............................. 25
13.4.1 Procedimiento ................................................................................................................. 25
13.4.2 Interpretación de los resultados .............................................................................. 25
13.5 Interpretación de los resultados del ensayo de idoneidad ............................. 25

14 Informe de ensayo.......................................................................................................... 26

Anexo A (Informativo) Otros diluyentes neutralizantes .............................................. 27

Anexo B (Informativo) Otros diluyentes ............................................................................ 29

Anexo C (Informativo) Otros medios de cultivo .............................................................. 30

Anexo D (Informativo) Neutralizantes de la actividad antimicrobiana de

los conservantes y líquidos de lavado ................................... 34

Bibliografía ........................................................................................................................................ 35

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1 Objeto y campo de aplicación
Esta norma internacional proporciona unas directrices generales para la enumeración y detección de
bacterias aerobias mesófilas presentes en los productos cosméticos,

– mediante el recuento de colonias en un medio de agar después de la incubación aerobia, o

– mediante la comprobación de la ausencia de crecimiento bacteriano después del enriquecimiento.

Debido a la gran variedad de productos cosméticos que abarca este campo de aplicación, este método
puede no ser apropiado en todos los aspectos, para algunos productos (por ejemplo ciertos productos
inmiscibles en agua). Otros métodos (por ejemplo los automatizados) pueden sustituir a los ensayos
que se describen en esta norma, siempre que se haya demostrado su equivalencia o demostrado que es
adecuado el método se haya validado de otra manera.

Si es necesario, los microorganismos enumerados o detectados se pueden identificar mediante

ensayos de identificación adecuados descritos en las normas indicadas en la bibliografía.

Para asegurar la calidad del producto y la seguridad de los consumidores, se recomienda realizar un
análisis de riesgos microbiológicos adecuado para determinar los tipos de productos cosméticos para
los que es aplicable esta norma. Los productos considerados de bajo riesgo microbiológico (véase la
Norma ISO 29621) incluyen los que presentan una baja actividad de agua, los productos hidro-
alcohólicos, los que presentan valores extremos de pH, etc.

2 Normas para consulta

En el texto se hace referencia a los siguientes documentos de manera que parte o la totalidad de su
contenido constituyen requisitos de este documento. Para las referencias con fecha, solo se aplica la
edición citada. Para las referencias sin fecha se aplica la última edición (incluida cualquier
modificación de esta).

ISO 21148:2005, Cosméticos. Microbiología. Instrucciones generales para el examen microbiológico.

EN 12353, Antisépticos y desinfectantes químicos. Conservación de los organismos de ensayo utilizados

para la determinación de la actividad bactericida (incluida la Legionella), micobactericida, esporicida,
fungicida y virucida (incluidos bacteriófagos).

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