I.E.S.

TEGUESTE ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS 28/11/2022

Práctica 6: ANÁLISIS DE SUPERFICIES. EVALUACIÓN DE LA

EFICACIA DE UN DESINFECTANTE

OBJETIVO:

✓ Analizar las superficies de trabajo.

✓ Determinar una concentración de desinfectante eficaz.
✓ Utilizar distintos elementos para el muestreo de superficies.

PROCEDIMIENTO:

1. Preparar un medio de cultivo general (por ejemplo, Agar Nutritivo u otro que
estimemos), siguiendo las instrucciones del frasco. Preparar por cada grupo el
volumen suficiente para llenar 3 placas RODAC (son placas de Petri especiales
de 6 cm. de diámetro) y una placa de Petri. Esterilizar en autoclave.

2. El medio, una vez esterilizado y atemperado a unos 55ºC, se vierte en las placas.
En las placas RODAC hay que dejar que sobresalga del borde de la placa para
facilitar el contacto con la superficie a examinar. Dejar solidificar en las
inmediaciones del mechero.

3. Las tres placas RODAC se utilizarán para evaluar la eficacia de un desinfectante

en la superficie de trabajo:

- Presionar suavemente una placa sobre una zona de la superficie de trabajo

(sin movimientos laterales).

- Aplicar sobre dicha superficie una mezcla de lejía y agua al 10%. Dejar
actuar un minuto, y presionar otra placa sobre la misma.

- Aplicar ahora una mezcla de lejía y agua al 50%, dejar actuar un minuto, y
volver a presionar otra placa sobre la superficie.

- Rotular las placas adecuadamente e incubar las placas durante 24-48 horas a
37ºC.

4. Análisis de superficies no planas: Método del hisopo. Este sistema está

especialmente recomendado para analizar superficies de aparatos y utensilios
(máquinas picadoras de carne, cubiertos, etc.). Además, se pueden estudiar
superficies muy contaminadas, ya que a partir de la solución salina estéril es
posible realizar las diluciones decimales que sean precisas.

- Delimitar la superficie que se va a analizar mediante una plantilla de papel de

aluminio estéril con una abertura de dimensiones conocidas (por ejm. 9 cm2).
- Humedecer el hisopo estéril en 5 ml de solución salina estéril y restregar varias
veces sobre la superficie delimitada por la plantilla.
- Introducir de nuevo el hisopo en el tubo con solución salina estéril y dejar
durante 15-30 minutos de manera que los microorganismos se liberen del
algodón al caldo.
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- Sembrar 0,1 ml de dicho caldo en una placa de AN e incubar durante 24-48

horas a 37ºC.

5. Contar las colonias que han crecido. El resultado se expresa en UFC/9 cm2.

REALIZAR INFORME

1. Objetivos:
2. Fundamento
Resolver las siguientes cuestiones:
¿Qué son las placas RODAC y para qué se utilizan?
¿Qué tipos de medios de cultivos se suelen preparar en las placas RODAC comerciales y
qué tipos de microorganismos permiten seleccionar en las superficies analizadas?
¿Existe normativa vigente que utiliza los resultados obtenidos con las placas RODAC para
análisis de superficie?
Además de las placas RODAC, ¿qué otros elementos preparados comerciales se suelen
utilizar para analizar superficies?
3. Materiales y reactivos
4. Procedimiento
5. Resultados
Interpretación de los resultados: responder a las siguientes cuestiones
Indica el resultado que has obtenido en las distintas superficies:
1) Superficie de trabajo plana
RECUENTO EN LAS PLACAS RODAC:

• UNIDADES: ufc/25 cm2 o ufc/placa, en base a los resultados obtenidos se

consideran el análisis de superficie:
- ACEPTABLE → < 10 ufc/placa
- NO ACEPTABLE → > 10 – 100 ufc/placa
- SUPERFICIE EXTREMADAMENTE SUCIA → > 100 ufc/placa

• ¿Existe una normativa vigente que establezca los límites legales según la
superficie analizada mediante el uso de las placas RODAC?

2) Superficie rugosa (que has determinado):

Indica qué tipo de superficie has utilizado.
• UNIDADES: UFC/9cm2
Razonar la cantidad de microorganismos presentes en la superficie
teniendo en cuenta el uso y localización de la misma.
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6. Conclusión
7. Gestión de residuos.
8. Bibliografía