Crecimiento en microorganismos

CRECIMIENTO 1. Incremento en los constituyentes celulares.

BACTERIANO Microbiólogos:
2. AUMENTO EN EL NÚMERO DE CÉLULAS:

CÉLULAS INDIVIDUALES:
 se AGRANDAN
 se DIVIDEN

Acinetobacter
PARA ORIGINAR DOS CÉLULAS HIJAS

• Crecimiento cenocítico (multinucleado)

Ciclo celular procariota
divisiones nucleares SECUENCIA COMPLETA
no se acompañan de
divisiones celulares DE SUCESOS
 DESDE LA FORMACIÓN DE
UNA NUEVA CÉLULA
 HASTA LA SIGUIENTE
DIVISIÓN
 Ciclo celular procariota
• FISIÓN BINARIA

• Gemación

• Fragmentación

Fisión binaria Fisión binaria

• Presenta aspectos desconocidos
• Ciclos celulares estudiados en:
Escherichia coli, Bacillus subtilis,
Caulobacter crescentus.

• Dos vías paralelas superpuestas:

1. Replicación y repartición de DNA
2. Citocinecis (septo, división células hijas)
 Borrelia

1. Fisión binaria: Replicación y reparto del

Streptomyces Rhodobacter
cromosoma
• MAYOR PARTE DE BACTERIAS: ADN CONSTITUYE UN SOLO
CROMOSOMA CIRCULAR, CERRADO COVALENTEMENTE. Burkholderia Agrobacterium
Sinorhizobium

• EXCEPCIONES, CON CROMOSOMA LINEAL O MÁS DE UN

CROMOSOMA:
 Borrelia: cromosoma lineal con extremos cerrados covalentemente (bucle
de horquilla).
 Streptomyces: cromosoma lineal, extremos con secuencias cortas
repetidas y en complejo con proteínas, (recuerda a los telómeros
eucariotas).
E. coli  Rhodobacter sphaeroides, Vibrio, Leptospira y Brucella: dos
cromosomas circulares.
 Sinorhizobium melitoti : tres cromosomas circulares.
 Burkholderia cepacia: entre 2 y 4 cromosomas.
 Agrobacterium tumefaciens: un cromosoma lineal y otro circular.

Replicación del cromosoma

• Bacterias: haploides poseen un solo cromosoma.
• En crecimiento activo, (desfase de la división celular
respecto de la replicación): 1. Comienza en punto determinado:
cada individuo puede albergar varias copias de ese ORIGEN DE REPLICACIÓN
cromosoma. 2 2. En ambas direcciones desde el ORIGEN.
• E. coli puede llegar a 10 copias. 3
3. Proteínas necesarias para la replicación
• Azotobacter hasta 100 copias. 1
se agrupan en REPLISOMA.
• Un caso extremo: bacteria gigante Epulopiscium,
aumenta el número de copias en cuatro órdenes de 2
4. Finaliza en una SECUENCIA DE
magnitud (¡unas 10.000 veces!), TERMINACIÓN situada al lado opuesto
del ORIGEN.
se desconoce su significado
4
 Replicación del cromosoma
• Todavía no se conoce bien el mecanismo
de repartición de los cromosomas a las
células hijas.

MreB: proteína
Forma celular y movimiento del cromosoma
Se polimeriza y asocia en un espiral interior

El origen de cada cromosoma replicado se

asocia con MreB para su transporte
a polos opuestos.

Crecimiento bacteriano
• División celular: Crecimiento
de 2n
aumento del número de células de la microorganismos

población.
Logaritmo
Análisis de (10) del
Crecimiento Fisión binaria
poblacional
la curva de número de
crecimiento células
viables
frente al
tiempo de
incubación
 Tipos de cultivo Tipos de cultivo
1. Cultivo discontinuo
2. Cultivo continuo
Cantidad de medio de cultivo definida,
Sistema abierto:
 no se añade más,
 con el tiempo los nutrientes disminuyen
 condiciones ambientales constantes
 los residuos tóxicos aumentan.  suministro continuo de nutrientes
• Sistemas cerrados  retirada de residuos.

Curva de crecimiento Fases de la curva de crecimiento

en cultivo cerrado 1. Fase de latencia (lag)
• Proceso activo: la célula sintetiza nuevos
componentes.
• No se produce división celular
inmediatamente.
• No hay incremento neto de la masa.

Se debe a:
1. Células viejas: necesitan sintetizar ATP,
cofactores esenciales, ribosomas.
2. Medio de cultivo diferente al anterior:
nuevas enzimas para usar nuevos
nutrientes.
3. Tiempo de recuperación porque están
dañadas.
1. Velocidad de crecimiento constante:
SE DUPLICAN EN NÚMERO A
INTERVALOS REGULARES.
2. No existe sincronización.
3. La población es más uniforme química y
fisiológicamente.
4. Estudios bioquímicos y fisiológicos.
El crecimiento exponencial es un
crecimiento equilibrado.
2. Fase exponencial (log)
• Crecen y se dividen hasta el nivel
máximo posible.
en función de:
su potencial genético, tipo de medio y
condiciones en las que crecen.
En la Fase exponencial (log):
Modificación de las concentraciones de nutrientes
o las condiciones ambientales
crecimiento desequilibrado:
las velocidades de síntesis de los componentes
celulares varían entre sí
hasta que se alcanza un nuevo estado de
equilibrio.
 Crecimiento desequilibrado
Experimento shift-up:
medio pobre en nutrientes más rico
1. nuevos ribosomas: aumentar síntesis de
proteínas.
2. Incremento en proteínas.
3. Incremento en síntesis de DNA.
4. Aumento esperado en la velocidad de
multiplicación.
5. Se alcanzan condiciones de equilibrio.
Shift-up y shift down
Demuestran que el crecimiento microbiano:
• Está bajo un control preciso y
coordinado.
• Responde rápidamente a cambios
nutricionales y de las condiciones
ambientales.
Experimento shift-down:
medio rico en nutrientes más pobre
1. Tiempo para elaborar las enzimas para la
biosíntesis de los nutrientes no disponibles.
2. Las células disminuyen su tamaño y
3. modifican su metabolismo hasta que son
capaces de crecer de nuevo
Se reanuda el equilibrio
3. Fase estacionaria
• Crecimiento de la población cesa.
• Llegan a esta fase cuando la
concentración es aproximadamente de
109 cel/mL.
• El tamaño final de la población depende
de la disponibilidad de nutrientes, otros
factores y del tipo de microorganismo.
 3. Fase estacionaria
El número total de microorganismos viables
permanece constante
1. Equilibrio entre la división y muerte de
las células.
2. La población deja de dividirse aunque
siga metabólicamente activa.
4. Fase de muerte
• Disminución de células viables.
• Se debe a cambios ambientales
perjudiciales: privación de nutrientes y
acumulación de residuos tóxicos.
• La muerte es logarítmica:
(una cantidad constante muere cada hora)
3. Fase estacionaria
Las poblaciones microbianas entran en fase
estacionaria por varias razones:
1. Limitación de nutrientes.
2. Limitación de oxígeno (aerobias)..
3. Acumulación de productos residuales
tóxicos.
4. Nivel crítico poblacional.
Hipótesis sobre la fase de
muerte:
1. Temporalmente incapaces de crecer en
las condiciones empleadas:
VIABLES PERO NO CULTIVABLES
VBNC
Respuesta genética
de las células hambrientas
en la fase estacionaria
 Hipótesis sobre la fase de Fase de disminución
muerte: prolongada
Experimentos de crecimiento a largo plazo:
2. Muerte Celular Programada:
Una fracción de la población microbiana
está genéticamente programada para Disminución exponencial de la viabilidad
suicidarse.
se reemplaza por
Células muertas están muertas,
Nutrientes liberados por células muertas Disminución gradual del número de células
mantiene a células que no han iniciado el cultivables
suicidio: ALTRUISMO. En meses o años

Disminución prolongada del

crecimiento

LA ÚNICA FORMA DE DECIDIR SI UNA

BACTERIA ES VIABLE ES INCUBARLA
EN UN MEDIO FRESCO APROPIADO
 El hambre, experiencia positiva
para las bacterias….
Estrategias:
1. Cambios morfológicos significativos:
endosporas.
2. Disminución de tamaño, con
reducción del protoplasto y
nucleoide.
3. Cambios de la expresión génica.
4. Cambios fisiológicos.

El hambre, experiencia positiva

LAS CÉLULAS
EN CONDICIONES DE HAMBRE
para las bacterias….
SE VUELVEN MÁS RESISTENTES A LA • Sobreviven en estrés nutricional durante
DESTRUCCIÓN años.
POR EL HAMBRE MISMO • Son consideraciones importantes para
la industria y la medicina.
Y OTROS FACTORES,
• Hay evidencias de que Salmonella typhimurium y
COMO QUÍMICOS: cloro.
otros patógenos se vuelven más virulentos
cuando pasan hambre.
• En condiciones de estrés nutricional,
las bacterias producen las proteínas del hambre
Muerte microbiana
que las hacen más resistentes al daño:

1. Incrementan puentes cruzados del

peptidoglicano:
mayor fuerza de la pared celular. Es la pérdida irreversible de la capacidad de
multiplicarse.
2. Se producen proteínas que se unen al DNA y lo
protegen.

3. Se producen proteínas chaperonas que

protegen de desnaturalización a otras proteínas
y recuperan el estado nativo de proteínas
dañadas.

El conocimiento de la velocidad de
crecimiento microbiano
en la fase exponencial
LAS MATEMÁTICAS DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO es indispensable
en cualquier estudio fisiológico o ecológico
básico
o aplicado a la solución de problemas
industriales.
 Ejemplo de crecimiento exponencial
Durante la fase log, cada microorganismo
Tiempo* Número de 2n Población Log10 Nt
se divide a intervalos constantes: divisiones (No x 2n )

0 0 20= 1 1 0.000
la población duplicará su número durante 20 1 21= 2 2 0.301
40 2 22= 4 4 0.602
un periodo determinado de tiempo: 60 3 23= 8 8 0.903
80 4 24=16 16 1.204
100 5 25=32 32 1.505
120 6 26=64 64 1.806
Tiempo de generación o de duplicación

*Cultivo hipotético empieza con una célula con tiempo

de generación de veinte minutos.

Población en un tiempo t:
Gráfico del ejemplo de crecimiento exponencial
No = Número inicial de células
Nt = Población en un tiempo t
n = número de generaciones en un tiempo t
lineal
Log10 número de células

Nt = No x 2n

logarítmica
 Número de generaciones:
Despejando n (número de generaciones), luego
de aplicar logaritmos en base decimal:
log Nt = log No + n.log 2 y fase exponencial en un cultivo discontinuo
n = log Nt – log No
log 2
n = log Nt – log No
0.301
Constante de la velocidad de
crecimiento (k)
• La velocidad de crecimiento durante la
se expresa por la constante de velocidad
de crecimiento (k)
• Equivale al número de generaciones por
unidad de tiempo, generalmente
generaciones por hora. k=n
t

Tiempo medio de generación (g)

• Es el tiempo que tarda una población en
Reemplazando: duplicar su número (g)

k = n = log Nt – log No • Si la población se duplica en un tiempo t,

t 0.301t entonces después de una generación:
Nt = 2No
 Tiempo de generación (g) Tiempo de generación
• Si se sustituye 2 No en la ecuación de velocidad • Los tiempos de generación cambian
media de crecimiento y se despeja k: notablemente según la especie de
microorganismo y las condiciones ambientales.
k = log (2 No) – log No = log 2 + log No – log No
0.301 g 0.301 g
• Los valores van desde menos de 10 minutos
k=1
g hasta varios días.

El tiempo medio de generación es la inversa de la constante de la

velocidad media de crecimiento g=1
• Los tiempos de generación en la naturaleza
k suelen ser más largos que en el laboratorio.

Tiempos de generación Medida del Crecimiento Microbiano

Medida del número de células

• Métodos directos:

– Cámara de Neubauer o Petroff‐Hauser (para

levaduras y
células mayores que las bacterianas)

– Técnica de filtración en membrana

– Cámara de Neubauer o Petroff‐Hauser (para levaduras y células – Cámara de Neubauer o Petroff‐Hauser (para levaduras y células
mayores que las bacterianas) mayores que las bacterianas)

Medida de la masa celular

Método turbidimétrico

El espectrofotómetro mide la turbidez como la cantidad

de luz que desvía un cultivo, en unidades de
absorbancia (DO)
– Técnica de filtración en membrana
La célula bacteriana dispersa la luz, de manera que no
es detectada por el detector sensible a la luz.
 Medida de la masa celular
Método turbidimétrico

La curva estandar relaciona la DO con el #células/mL.

Una vez que se obtiene, esta curva puede usarse para

convertir cualquier medida de DO en #células/mL.

Por ejemplo, a partir de esta curva, una lectura de 1,6

unidades de DO significa que el cultivo contiene 1x108
células /mL.

Sistemas de cultivo continuo Biorreactores

1. Quimiostato

Población en
fase logarítmica
 Sistemas de cultivo continuo
Sistemas de cultivo continuo
• Turbidostato
2. Turbidostato
• Tiene una fotocélula para medir la
absorbancia o turbidez de un cultivo en el
recipiente del cultivo.
• La velocidad de flujo del medio fresco al
recipiente se regula automáticamente para
mantener una densidad celular
predeterminada.