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com
Jonal deComroled Relrase,(1991)yo 55-5s8

14H
1992 lsevier ciencia

ADUNESU16836599100I Editor BVAllrahnsered 0168-3659/92/505.00

COREL O672

¿A qué profundidad penetran los liposomas intactos en la piel

humana?
J. Lasch'rLauby W.Wohlrab?
ry Mdical f'auy, Marus Luthg-Uaivesity, HaleSauit, F.RG. und 'DEpartmeut ofDermatoka Manin-Luther.nuversry.
Halie. FR.G
(Recibió21enero de 1991; aceptadoenformulario revisado13julio de 1991)

Se hicieron intentos para visualizar liposomas intactos en la piel humana mediante fluoromicrografía. Con
este fin, el compartimento acuoso de los liposomas así como la bicapa lipídica fueron seguidos por marcaje8
con fluoróforos hidrofílicos y lipofílicos, respectivamente. Micrografías en varios momentos después de la
aplicación externa sugirieron que los liposomas intactos se pudren penetran más profundamente que la capa
homónima.

Palabras llave: Liposume; Piel humana; Aplicación tópica de liposomas; Penetración cutánea de
liposomas.

ventajas de los liposomas como portadores de fármacos en el

y una creciente comercialización d
latroduccion piel 14 cosmético
papel en el desarrollo de potenciadores corresponsal
transdérmicos de drue de Penetraion juegan
un papel cada vez mayor
ivery sistemas. En la terapia externa de la piel
Facpliy, Marninto:.-Lmher-UnivoTsiLy. Bioquímica*y,

lesionada, lo que interesa principalmente no de

es la absorción percutánea mejorada, sino la

promoción de la penetración intradérmica. icl Lssch. tastituir Holhstrzsst

Mezci y Gulasckharsm [1] informaron en 1980 w2uHalle/S4ale. FRG

concentraciones aumentadas de riamcinokone

acetónido

en la epidermis y la dermis después

1aplicación tópica de una formulación liposomal
sobre piel de conejo depilada. Utilizando piel humana
supravital extirpada y una técnica modificada para la
determinación de la penetración cutánea de
fármacos radiomarcados 12], encontramos que el
liposamal con-tisol penetraba mucho mejor en la
célula dérmica.
capas que el cortisol en ungüentos
convencionales 131
A pesar de numerosos estudios que corroboran
la
ics sobre una base de liposomas, se conoce la
línea sobre cómo los liposomas intac profundos
pueden penetrar en la piel humana y el
mecanismo molecular por el cual la
Se promueve la penetración de fármacos lipofílicos
liposomales tales como hormonas esteroides. Los
estudios para responder a estas preguntas
mediante la medición de los perfiles de
concentración-tiempo de los lípidos liposomales
radiomarcados en la piel ISj o por audioradioterapia
[6] son cuestionables porque solo se puede seguir
el destino de las moléculas marcadas o sus
metabolitos.
que podría ser bastante diferente de la de in tac
lipis vrsicies la el presente estudio se empleó
luoro-mierografía de eriosecciones de piel
humana para visualizar la penetración de
vesículas de lípidos de luorescert intactas en la
piel. Se usaron fluoróforos que marcaban el
compartimento acuoso así como la bicapa
lipídica liposomal.
Materiales y Métodos

Los auroforos hidrofílicos de alto peso

molecular empleados se obtuvieron por
lubricación
dexirano, triglicina sacarosa
(fluoresceinisotbiocya Y comí): FITC-

conFITC
Dextrano, peso molecular medio, 70.000, 0,02Mol FITC
56

por mol de glucosa se extrajo de Sigma; FITC-
Triglicina (MW 1879,2) y FITC-Sac charusc (MW
342,3)) se prepararon de la siguiente manera:
soluciones 0,3 M de tnglicina y seccharose
(Serva) en tampón de borato, pH 9,0, se
reaccionaron durante 1 hora a temperatura
ambiente con FITC io la oscuridad. El FITC no
tratado e hidrolizado se eliminó mediante
filtración en gel en Sephadex G-10 equilibrado
con PBS. El marcador lipofílico, N. NBD-DPPE
(N-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4 yl)
dipelmitoylfosfatidiletanolamina), fue de Sigma
Los liposomas marcados con los fluoróforos se
prepararon como sigue: 50 mg de eze lecitina. 2 mg
NBD-DPE, 10 mg colesterol y LS ng n-ta
El cophcrol se depositó en paredes de vesael de
giass por evaporación exuberante en una
corriente de N y se mantuvo al vacío durante !
hora. Luego, se añadieron 500 dl de PBS
isooosmolar y 500 dl del respectivo fluoróforo en
el mismo tampón. Estas dispersiones se
sonicaron intermitentemente con el sonicador
Branson -12 bajo control. Los liposomas
marcados resultantes se fraccionaron luego en
columnas de Sepharose 6B-CL en MLV (vesículas
multilemelares lame), normalmente una fracción
muy pequeña (alrededor del 20% del lípido) y SUV
en pequeñas vesículas unilamelares). La fracción
de SUV se midió en una columna Se-pharose 4B-
CL que se calibró con tiroglobulina, ribosomas de
hígado de rata y el virus vegetal Erysimum latente
con radios de Stokes de 8,

misg

A
Fip. 1. Fluormmirmgraphs de skir humano 0 min (a,
b)
D
Asi
que

y 300 min (cd) después de la aplicación de liposomas claros. Fuoro-

Carolina del Sur. sirawm cormeum: E. cpidcsmis; 0. dcnnis.
foro NBD-DDFT (ai, FTCararoe ibd). Sozeber: um.
 57

Carolina
del Sur
D
D
Fe 2. Fruoromicrogapbs de piel de bumas 24 h encr la aplicación de tipcomcs. (a)NBD-DPPE y (b) FITCacarosa
1tipvromes etiquetados. Carolina del Sur. tratum cotneym E; epidermis; D, desmis. Medida barra 400
m.

11,8 y 15nm. respectivamente. Según Ack-

uno (FTC-sacarosa) penetró rápidamente en

ers 17]. el complemento de la función de error
inverso

la piel y, dentro de 0 minuto, esparcido sobre el

(erfe) del coeficiente de partición entre el

toda la capa homy a la que estaban confinados

líquido

fase

la

gel

fase 30 y 300 minutos (Fig. la-d). Obtuvimos

K(K=(V,-V.)/{VV)) estaba
calculadocomo exactamente los mismos fluorógrafos con FITC-dex

una función de la partícula radio, R, produciendo un

liposomas marcados con tran y FITC-triglicina. A

curva de calibración lineal hasta un diámetro de
vesícula
de 30 Nu Rsatb cf-"(1-K,)=atb estimar si los liposomas depositados en el
ev
o capa hormy podría actuar durante un tiempo
prolongado como una
Méj
erfe'(K) con a= -0.9 nm y b=20.3 am como
sistema de liberación, ampliamos las
observaciones hasta
column
constante característica del a cali-

Las 24 h. No hubo cambio en el luoróforo.

malcriado Tbe SUV produjo un K, de 0,34, cquiva-

ent a un radio de Stokes de 13,4 nm, un
ic. sentido distribución (Fis 2).

diámetro hidrodinámico de 27 nm.

Los SUV etiquetados se aplicaron a la sutura
extirpada.
Debate
Lo vicw del "modelo de lípidos de ladrillo y
Dravital piel humana en 24 h. Por lo general, 60 l mortero

de la suspensión de liposomas y cilindrada pipeteada

cm piel. Después de 30, 300 min fueron 24 h piel en 2

ders fueron perforados, criofijados en liauid Nz, es la permeabilidad ampliamente cpidérmica.ceptadaahora[9}.
cortados en barriceritisreasonabke[8],«hichbto
e ike secciones secadas al
un espesor de 7 jm aire.
asumir que las laminillas de lípidos iniercelulares
fil
Los especímenes fueron examinados bajo el
epiu-

ing el espacio intercelular 30 am en el estrato

microscopio de orescencia (Puede
Jenalumar n zeiss,
cormeum probibit mayor penetración. como
debe ser
Jena). Por lo general, se evaluaron 23 campos
microscópicos.

escena en Fiss. I y 2, la fluorescencia es siempre

Se tomaron micrografas uadas con la objrc-

confinado 1o tbe stratum corneum, incluso
después de 24

tivo 12.5 primario magnificación; 80) y un P

Película 3200 TMax (Kodak), tiempos de
exposición: I mia
(fluorescencia) o 4 min (transmisión).
resultados
Tanto el marcador de liposomas lipofílicos
fluorescentes (NBD DPPE) como el hidrofílico
b. Por lo tanto, los liposomas intactos
fluorescentes se aplican o
la etiqueta de la superficie de la piel solo en las
primeras capas de las células.
Es para reacon sombrero nuestra tecniqus
cznot
Responder a la pregunta por la cual los
fosfolípidos liposomales de un mecanismo
molecular mejoran la penetración de los
compuestos lipofílicos.Fluidisa-
ción" de los dominios intercelulares de Hipid en el
suratum coincum que se ha sugerido para algunos
58

Sw.Wobrab. U. Lachmann y 1. Lam. eacratonof

potenciadores de la penetración química [ t0 ]
es una hipótesis relevante e interesante. En piel humaa, Dernatol. Moaa1ssch.. 175 (I99) 3A4-
lecitina froet hidrorornisona que contiene iposomas en
resumen, de nuestro resultado concluimos que
los liposomas intci están confinados a la capa
homy y no penetran en profundidad. Por otra 6H. Koma1, K. Hisski. H. Oamoto. K. Miyasawa, M.
parte. recientes micrografías de cectrón de Hashida y H. Sezaki. Actividad conservante e ie sivo
fractura de Irecze |11] muestran que los prrcutincoos pentirDthn Bul. 34 19861 341-3422.
liposomas cambian las estructuras laminares liposomas, Chem. Farmacia ol bulilparabeno cnirapprdin
intercelulares en el estrato córneo y los
estudios de doble marcaje 12} sugieren que
existen liposomas intactos en toda la capa uEn cors J. BoL Chem. 242 (1967) 3237-3233.
hormonal.
& GK Acken, Aw procedimientos de clíbralion para gel flnta-

Referencias rio, Cias, Liplds y tht 270 (19811 95-817.

PM, Anch Dematoi. Res., spideral permenbitiey har.

1MMezri smd V. Guasehharam. Laposomes -a ack
L Landmana. El basrier cpldernmal permesbiby, Anat.
istraion. sistema de entrega para la ruta fpicol o
fármaco adaun-livc Lise Sci.. 26 1I980) 1473-1477.
Enbryet. I78 (19B6) 1-13.
21. Schefer. G. Stiugre. A. Zesch. W, Schala y J.
AH.hanem, H. Mahmud,
Gazith. Keminatina quamitaivc de abarpion
perrunaneous de drus marcado radioactivamente en pag
0 S. Borsuia, en J.LL Foa WI Kiguehi. UD Rohr,
ioand ie vivo por la piel humana. actual Problema
fecto
Dematol. ? (1978) 80-04,
s
Lasch y w, Wohlob, cortisol ligado a Lipaome: una
3J. Enfoque Cw a i293-1299.
4$19kay cutancoas terapia. Bromado. bioquimica Krowzynski y T. Stozrk,
y WR Caod. el ef
Acu,
Liposomacomo de cihaanl Liu, el transporte
molestia
stolriorrin der percuRKn Theraoie. farmacia, 19
llber pemanis quan
eje
1984)627-629 m 75-

esquí ll. 6 A (1987)

liberación controlada,

m aaitiess rmous de beta-estradiol y

enfoque titativo. 1,

37.
Ilolandia,
JA. Eouusua, F. Spies, G. Gooris y

SE Junginger. Iaterktion entre

HE.J liposomas y hu-

hombre stin in vitro. Posier en dae Conkrence,
Uposnmes
 en drus dchvery - 21 años después, Londres, 12-15
de diciembre

Diciembre 1990.

12 ie. N. etad Esbahía. K, Topicsl Applkstion of Li

Posoma Systkms. Póster de la entrega de
diciembre de Confcresce Liposomes - 21 tars on,
Londres. 12°-1° De en dng 1990.