TEMA-10-La-celula-como-factoria-...

ERREESE

Biotecnología

3º Grado en Farmacia

Facultad de Farmacia
Universidad de Granada

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

TEMA 10:

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
LA CÉLULA COMO FACTORÍA
BIOTECNOLÓGICA Y HERRAMIENTA
TERAPÉUTICA
LA CÉLULA COMO FACTORÍA BIOTECNOLÓGICA Y HERRAMIENTA TERAPÉUTICA. CULTIVO DE
CÉLULAS DE MAMÍFERO. PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES. ANTICUERPOS
HUMANIZADOS. UTILIDAD EN EVALUACIÓN DE DIANAS MOLECULARES. CÉLULAS MADRE.
INGENIERÍA DE TEJIDOS Y CULTIVO DE ÓRGANOS. MEDICINA REGENERATIVA.

Reservados todos los derechos.

OBJETIVOS
o Conocer las diferencias y características principales de cultivos primarios y de líneas celulares
establecidas.
o Conocer los diferentes tipos de células de mamífero utilizadas en experimentación biológica.
o Conocer los métodos básicos de expresión de proteínas en células en cultivo y de
anticuerpos humanizados.
o Conocer las bases moleculares del crecimiento, diferenciación y muerte celular aplicados a
la medicina regenerativa.
o Conocer las opciones metodológicas empleadas en la construcción de tejidos ex vivo.

CULTIVO CELULAR: Proceso que permite el mantenimiento de células in vitro, preservando al

máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas.
Las células crecen en condiciones controladas, generalmente fuera de su ambiente natural,
nosotros lo suministramos todo lo que necesite.
Ventajas:
• Control de las condiciones ambientales
• Homogeneidad, pueden estar constituidos por un solo tipo celular.
• Se pueden realizar cultivos celulares en pequeños volúmenes
• Conservación, las células pueden mantenerse congeladas por largos periodos de
tiempo con solo una pequeña pérdida de viabilidad.
• Permiten gran versatilidad en cuando a la cantidad de células que se pueden obtener,
podemos tener muchas células.
• Es una alternativa al empleo de animales de experimentación.
Desventajas:
 No están organizadas en tejidos ni reciben los estímulos externos que recibirían in vivo.
 Pueden a lo largo del tiempo perder algunas de sus características fenotípicas o sufrir
fenómenos de inestabilidad cromosómicas (aneuploidias).
 Es esencial trabajar en condiciones de asepsia (ausencia de gérmenes).

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

CULTIVO DE CÉLULAS DE MAMÍFEROS

Cultivo de órganos:
Se coloca el órgano en una rejilla en interfase líquido-gaseosa, que permite obtener nutrientes
y liberar deshechos. Se mantiene la estructura característica del tejido vivo y se produce la
diferenciación de tipos celulares.
Cultivo de tejidos (o explantes)
Se coloca el tejido en una rejilla en interfase líquido-gaseosa.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Cultivo celular
Sobreviven si son células transformadas o cancerígenas. Los tipos de cultivo son:
❖ HISTOTIPICOS Y ORGANOTÌPICOS
 Histotípicos: Un único tipo celular. Elevada densidad celular
 Organotipicos: varios tipos celulares.
❖ PRIMARIO Y LÍNEA CELULAR
❖ EN SUSPENSIÓN Y ADHERIDO A SUPERFICIE
❖ BIDIMENSIONAL Y TRIDIMENSIONAL
CULTIVO PRIMARIO Y LÍNEA CELULAR

Reservados todos los derechos.

CULTIVO PRIMARIO:
Son cultivos que vienen directamente del tejido. Suele contener varios tipos de células.
También pueden ser células específicas aisladas directamente del tejido. Por ejemplo, los
linfocitos, macrófagos o células del bazo.
Organoides: Son agregados de células cultivadas en matrices tridimensionales (3D)
específicas, que dan lugar a órganos en miniatura simplificados que conservan algunas
funciones fisiológicas. Son cultivos primarios que provienen de una o varias células, de un
tejido, de células madre embrionarias o células madre pluripotentes inducidas, que pueden
autoorganizarse en cultivos tridimensionales.
Establecimiento de un cultivo celular primario
Es el obtenido directamente a partir de células de un tejido animal o humano. Es necesario
seguir los siguientes pasos:
1) Disección del tejido
2) Disgregación para destruir las uniones entre células y el tejido conjuntivo, puede ser
a) enzimática (con tripsina, colagenasa, proteasa) o
b) mecánica (agitación continua)
3) Sembrado
LÍNEA CELULAR:
Cultivo en el que las células se han obtenido mediante sucesivos subcultivos. En este cultivo
se ha seleccionado un determinado tipo celular y por tanto es muy homogéneo y uniforme.
Las características se conservan largo tiempo. Pueden tener una vida limitada o ser inmortales.
Las líneas inmortales pueden ser espontáneas, es decir, pueden replicarse indefinidamente,
son cancerígenas, o también pueden ser transformadas, se introducen en las células
elementos que prolonguen su vida.

Llévate 1 año de WUOLAH PRO con BBVA. ¿Cómo? ¡+Info aquí!

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

Líneas inmortalizadas y transformada

Se pueden crear espontáneamente. Puede ocurrir que se cree una línea inmortalizada
espontánea que permite a las células replicarse indefinidamente. Ej. HELA, Caco-2
También es posible introducir en la célula elementos que prolonguen su vida. Ej: Antígeno T
del papilomavirus. Inhibe p53 y Rb (que son proteínas supresoras de tumores) prolongando la
vida de algunos tipos celulares
CULTIVO BIDIMENSIONAL Y TRIDIMENSIONAL
Se forman células

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
pluripotenciales, son células
madre a partir de las cuales se
obtiene el resto de los tipos
celulares. Estas se dividen, y
conforme van ascendiendo se
van diferenciando en los
distintos tipos celulares. Si
aislamos las células
pluripotenciales y las ponemos en un cultivo, al cabo de los días, se crean una especie de
esferas en las que en el interior se ha formado un mini intestino, son esferas tridimensionales.

Reservados todos los derechos.

EN SUSPENSIÓN Y ADHERIDO A SUPERFICIE
En suspensión
 Células sanguíneas de la serie blanca
 Obtenidas por centrifugación en gradiente
Adheridas a una superficie
Derivan de tejidos sólidos
Habitualmente crecen en monocapa:
a) Directamente sobre el material de la placa
b) Sobre sustratos que facilitan la adhesión de determinadas células:
 Componentes de la matriz extracelular: colágeno, fibronectina.
 Matrices comerciales: Matrigel®

Llévate 1 año de WUOLAH PRO con BBVA. ¿Cómo? ¡+Info aquí!

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

MODIFICACIONES GENÉTICAS

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
TRANSFECCIÓN (en
eucariotas): se mete
material genético en
células eucariotas con
un vector.

Reservados todos los derechos.

TRANSFECCIÓN TRANSITORIA TRANSFECCIÓN ESTABLE
El DNA no está integrado en el genoma El DNA se integra en el genoma
La alteración genética no es permanente, no La alteración genética es permanente, se
se transmite a la progenie transmite de generación en generacion
No requiere selección Requiere detección selectiva
Solo se pueden usar vectores de DNA. El ARN
Se pueden usar vectores de DNA y RNA por si solo no es etable en la célula y no puede
ser introducido en ella
Alto numero de copias de genes transfectados,
EL único ADN integrado da un nº de copias
da como resultado un alto numero de
bajo
proteinas
Las células se cultivan en menos tiempo Requiere más tiempo de selección
Adecuado para estudios con vectores con
No es adecuado para estudios usando vectores
promotores inducibles
TRANSDUCCIÓN: introducción de material genético en las células mediante virus.
El vector viral recombinante tiene que se transfectado en una línea celular especial que
exprese constitutiva ente la transcriptasa inversa viral y las proteínas de la cápside.

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES

GENERACIÓN DE HIBRIDOMAS
Un hibridoma es una línea celular híbrida obtenida mediante fusión de un linfocito B productor
del anticuerpo específico de interés, con una línea celular de mieloma (linfocito B canceroso)
que no produce una inmunoglobulina propia. Pasos:

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Reservados todos los derechos.
1º. Inyección de un antígeno específico en un ratón con el fin de obtener células B que
produzcan anticuérpos frente este antígeno.
2º. Aislamiento de células B prductoras del anticuerpo.
3º. Fusión de la célula productora de anticuerpo con una célula tumoral (mieloma).
4º. El hibridoma resultante se expande y produce los anticuerpos monoclonales
indefinidamente

 Anticuerpos murinos: son aquellos anticuerpos monoclonales de origen totalmente

animal. Aunque actualmente existen anticuerpos monoclonales de este tipo su aplicación
como fármacos está limitada debido a la reacción inmunológica que producen ya que el
sistema inmune los reconoce como extraños y producen AB frente ellos.
 Anticuerpos quiméricos: la región variable es de procedencia murina y la región
constante es de origen humano, gracias a esto se consigue reducir la respuesta
inmunogénicas y con ello ha aumentado la eficacia de los fármacos.

Llévate 1 año de WUOLAH PRO con BBVA. ¿Cómo? ¡+Info aquí!

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

 Anticuerpos humanizados: solamente

una parte de la región variable (las
regiones hipervariables) son de origen
animal y el resto es de origen humano.
Se toleran muy bien en el organismo.
 Anticuerpos humanos: Estos
anticuerpos en su totalidad son de
origen humano, por lo que se ha

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
conseguido reducir de forma
considerable su inmunogenicidad y con
ello se ha conseguido aumentar su
eficacia mucho más.

Reservados todos los derechos.

CÉLULAS MADRE
Las células madre son la
materia prima del cuerpo; a
partir de ellas se generan
todas las demás células con
funciones especializadas.
Bajo las condiciones
adecuadas en el cuerpo o en
un laboratorio, las células
madre se dividen para
formar más células.
Estas células hijas se convierten en nuevas células madre (autorrenovación) o en células
especializadas (diferenciación). Ninguna otra célula del cuerpo tiene la capacidad natural de
generar nuevos tipos de células.

Llévate 1 año de WUOLAH PRO con BBVA. ¿Cómo? ¡+Info aquí!

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

Características:
-Capacidad de replicación indefinida

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
-Capacidad de diferenciación a múltiples tipos celulares o “pluripotencia”.
Utilidad:
✓ -Generación de nuevos tejidos
✓ -Aumentar la comprensión sobre como ocurren las enfermedades.
✓ -Probar nuevos medicamentos en cuanto a seguridad y eficacia
Tipos de células madre:
1º. -Origen embrionario
2º. -Aisladas de tejidos adultos
3º. -Aisladas de fluido amniótico
4º. -Aisladas de cordón umbilical
5º. -Reprogramado nuclear de células somáticas.

Reservados todos los derechos.

.
CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS:

Provienen de embriones que tienen de tres a cinco días de vida. En esta etapa, un embrión se
llama blastocito y tiene alrededor de 150 células. Estas son células madre pluripotentes, que
pueden dividirse en más células madre o convertirse en cualquier otro tipo de célula del
cuerpo por lo que pueden usarse para regenerar o reparar tejidos y órganos enfermos.
CÉLULAS MADRE ADULTAS
Se encuentran en pequeñas cantidades en la mayoría de los tejidos adultos, como la médula
ósea o la grasa. Comparadas con las células madre embrionarias tienen una capacidad más
limitada para generar diferentes células del cuerpo. La evidencia emergente sugiere que las
células madre adultas pueden crear diferentes tipos de células. Por ejemplo, las células madre

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650
 Tema 10: La célula como factoría biotecnológica y herramienta terapéutica

de la medula ósea, podrían crear células óseas o del músculo cardiaco.

CÉLULAS MADRE MODIFICADAS PARA QUE TENGAN LAS PROPIEDADES DE LAS CÉLULAS
MADRE EMBRIONARIA (CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS)
Se han transformado satisfactoriamente las células adultas normales en células madre
mediante la reprogramación genética. Al modificar los genes de las células adultas, se pueden
reprogramar las células para que actúen de manera similar a las células madre embrionarias.
Las células adultas reprogramadas permiten prevenir el rechazo del sistema inmunológico a
las nuevas células madre. Sin embargo, los científicos aún no saben si el uso de células adultas

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
modificadas causará efectos adversos en los humanos.

Reservados todos los derechos.

CÉLULAS MADRE PERINATALES

Proceden del líquido

amniótico, así como en la
sangre del cordón umbilical.
Estas células madre también
tienen la capacidad de
convertirse en células
especializadas

Llévate 1 año de WUOLAH PRO con BBVA. ¿Cómo? ¡+Info aquí!

a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-6310650