Exosomas I: nanoportadores de mensajes biológicos.

Introducción

El tráfico de materiales biológicos a través de las membranas celulares es parte de la

homeostasis celular normal y la liberación celular de moléculas a través de las vesículas de
membrana extracelular (EV) es utilizada por las células para una serie de funciones fisiológicas
que incluyen la comunicación célula-célula,diferenciación celular, inmunidad e inflamación [1
]Como tal, los EV son una población heterogénea de vesículas, que poseen diferentes
propiedades biofísicas, dimensiones y tienen diferentes rutas de biogénesis.

La liberación de EV es un proceso extremadamente conservado en eucariotas y procariotas,

así como en plantas [2]. En bacterias, eucariotas bajos y en plantas, los EV están involucrados
en la interacción huésped-patógeno y en la liberación de compuestos como factores de
virulencia o toxinas en el microambiente [2]. Estas vesículas han sido nombradas durante estos
últimos 15 años con una multitud de términos que incluyen:
• Ectosomas.
• Desprendimiento de vesículas.
• Micropartículas.
• Microvesículas.
• Exosomas [3].

A diferencia de otros tipos de vesículas extracelulares, los exosomas tienen un diámetro

menor, entre 30 y 100 nm, un origen endótico y se liberan en el compartimento extracelular
cuando los cuerpos multivesiculares (MVB) se fusionan con la membrana plasmática [4]. La
secreción de exosomas ocurre de manera constitutiva, aunque el estrés celular o la activación
del receptor pueden modular su secreción [5]. Los mecanismos de montaje y clasificación de
exosomas no están bien definidos, pero se ha demostrado que varias moléculas regulan este
proceso, como RAB11, RAB27, RAB35 y syndecan-syntenin-ALIX [6, 7]. Además, el miembro
de ESCRT (complejo de clasificación endosomal requerido para el transporte) TSG101 (gen
de susceptibilidad tumoral 101) y la tetraspanina CD63, que está enriquecida en dominios
específicos de la membrana plasmática involucrados en la gemación de microvesículas, han
sido descritos como involucrados en la formación de exosomas [8] . El contenido molecular del
exosoma está estrictamente relacionado con el tipo y el estado funcional de la célula
productora y su caracterización puede verse afectada por los métodos de purificación; Las
técnicas disponibles actualmente se basan en la ultracentrifugación, la ultrafiltración y la
cromatografía líquida de exclusión por tamaño, los métodos de gradiente, la inmunoafinidad,
la microfluídica y la precipitación polimérica [9]. Aunque todos estos métodos se han utilizado


con éxito para la preparación de exosomas, presentan limitaciones debido a posibles

contaminaciones celulares causadas por el conocido tráfico dinámico entre el compartimento
endosómico y la membrana plasmática, lo que hace que la presencia de los llamados
marcadores exosómicos a menudo enriquecido, pero no exclusivo de exosomas. De todos
modos, su contenido bioquímico consiste no solo en lípidos, metabolitos y proteínas,
sino también en miARN y ARNm y, más recientemente, también se ha informado de la
presencia de ADN, como genómico y mitocondrial (Fig. 2.1). En las siguientes
secciones, se proporcionará una visión más amplia y más amplia de estos componentes para
comprender mejor la función del exosoma.

Lípidos y metabolitos.

La composición lipídica del exosoma refleja la de la célula parental, pero también tiene algunas
características que se comparten con vesículas de diferente origen, lo que representa posibles
marcadores EV. La composición lipídica de los exosomas no se ha aclarado por completo,
pero varios autores coinciden en que los componentes lipídicos comunes de las vesículas
extracelulares están presentes en la bicapa lipídica y consisten en esfingomielinas, colesterol,
fosfatidilserina, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina y gangliósido GM3 [10-13] . La
fosfatidilserina se ha encontrado enriquecida en la membrana exosómica en comparación con
la celular, mientras que es lo opuesto a la fosfatidilcolina [10, 14]. La composición lipídica
específica permite la estabilidad de los exosomas in vivo.

Además, se han encontrado dominios de tipo balsa lipídica en membranas de exosomas que
sugieren un papel en la formación y estructura de las vesículas [15]. Dubois y sus colegas
aislaron balsas lipídicas de los prostasomas humanos mediante ultracentrifugación en
gradiente y las analizaron mediante espectrometría de masas; encontraron varias proteínas
asociadas a la balsa lipídica, algunas de

Fig. 2.1 Representación esquemática de la estructura y el contenido de los exosomas. Los exosomas están
encerrados por una bicapa de fosfolípidos de membrana enriquecida en dominios similares a balsas de lípidos y
su carga incluye ARN (ARNm, ARNnc y miARN), ADN (genómico y motocondrial) y varias proteínas como
anexinas, tetraspaninas, Alix, TSG101, Moléculas de MHC, Integrinas, proteínas Rab, proteínas citoesqueléticas,
enzimas y proteínas de transducción de señales, etc. Incluso si los exosomas contienen varios componentes
comunes, su composición molecular varía según las características específicas de la célula de origen.











Ellos involucrados en la formación de vesículas intraluminales [16]. Llorente realizó uno de los
estudios lipidómicos moleculares más extensos en 2013 sobre el exosoma liberado por las
líneas celulares de cáncer de próstata. El análisis destacó la composición exclusiva de los
lípidos del exosoma en comparación con las células parentales; de hecho, los exosomas
estaban altamente enriquecidos en glucosfingolípidos, esfingomielina, colesterol y
fosfatidilserina [17]. Un análisis lipidómico detallado fue realizado recientemente por Haraszti
et al. que comparó el perfil lipidómico de microvesículas y exosomas de tres líneas celulares
diferentes: glioblastoma, carcinoma hepatocelular y células madre mesenquimales de médula
ósea. Los autores descubrieron que el enriquecimiento en glicolípidos y ácidos grasos libres
caracterizaba a los exosomas, mientras que el enriquecimiento en ceramidas y esfingomielinas
caracterizaba a las microvesículas. También observaron que los exosomas de las células Huh7
y MSC se enriquecieron en cardiolipinas, mientras que los exosomas U87 se enriquecieron en
esfingomielinas [18].

Los lípidos vesiculares son esenciales para la biogénesis del exosoma, la liberación y la
interacción con las células diana, Trajkovic et al. informaron que los exosomas derivados de
células del sistema nervioso central están enriquecidos en ceramida, implicados en la
gemación de exosomas en la luz de los cuerpos multivesiculares [12]; de hecho, la liberación
de exosomas se redujo por la inhibición de la síntesis del precursor de ceramida, la
esfingomielina neutra.

Además de la función estructural, los lípidos en los exosomas se pueden considerar como
componentes bioactivos involucrados en condiciones fisiopatológicas. Una de las primeras
pruebas surgió en 2002 de Kim y sus colegas que mostraron que las vesículas extracelulares
derivadas de tumores inducían un fenotipo angiogénico y correlacionaban estos efectos con la
presencia de esfingomielina vesicular [19]. Algunos años después, se han encontrado
prostaglandinas (PGE), compuestos lipídicos fisiológicamente activos, en exosomas, que
muestran efectos biológicos relacionados con procesos inflamatorios [20]. Los autores
encontraron que los exógenos transportaban PGE2 a las células objetivo e inducían
respuestas biológicas dependientes de prostaglandinas [20]. Además, Xiang et al. mostró que
PGE2 estaba contenido en exosomas derivados de adenocarcinoma mamario murino; los
exosomas tumorales fueron internalizados por células supresoras derivadas de mieloides e
indujeron su expansión, promoviendo así el crecimiento tumoral [21]. Los exosomas también
transportan enzimas responsables de la síntesis de leucotrienos (LT), lo que influye en el
metabolismo de los lípidos de las células receptoras. Esser et al informaron que los exosomas
de los macrófagos y las células dendríticas contenían enzimas activas para la biosíntesis de
leucotrienos, lo que contribuye a las respuestas inflamatorias [22].


Además de los lípidos, los exosomas contienen y entregan una amplia gama de metabolitos,
reprogramando el estado metabólico de las células receptoras [23-25]. La metabolómica es
una aplicación reciente de los estudios “ómicos” en el campo de los vehículos eléctricos, por
lo tanto, la literatura relacionada aún es escasa. El primer informe del contenido metabólico de
las vesículas extracelulares fue proporcionado por Altadill et al., Que aislaron las vesículas
extracelulares del plasma humano y los cultivos celulares. Mediante un enfoque de
espectrometría de masas, los autores descubrieron que, además de los glicerofosfolípidos, los
VE contienen metabolitos como ácidos orgánicos, alcoholes cíclicos, esteroides, fenoles y
conjugados de aminoácidos, azúcar y conjugados de azúcar [23]. Un estudio muy reciente de
Royo et al. indicó que los VE son estructuras "metabólicamente activas" capaces de afectar
los procesos biológicos [25]. Los autores realizaron un análisis metabólico específico de
cromatografía líquida-espectrometría de masas (UHPLC-MS) del suero agregado con
vesículas extracelulares de hepatocitos tratados con diferentes fármacos inductores de daño
hepático. Observaron que el perfil metabólico del suero se ve significativamente afectado por
la presencia de EV hepáticos [25].

Un aspecto muy desafiante, aún no resuelto por completo, para definir profundamente la carga
molecular de exosomas, se refiere al aislamiento efectivo y selectivo de estos nanovesículas.
La pluralidad de protocolos desarrollados determina la variabilidad cualitativa y cuantitativa de
los exosomas obtenidos, lo que afecta considerablemente los resultados de los análisis
posteriores y dificulta la comparación, reproducción e interpretación de los datos obtenidos por
diferentes grupos de investigación.


Los datos de múltiples estudios de proteómica han demostrado claramente que las proteínas
exosómicas se pueden clasificar en dos grupos principales. El primero es un conjunto
conservado de proteínas, consideradas como "marcadores exosómicos", en gran parte
asociadas a la biogénesis exosómica e independientemente de su origen celular. El segundo
está formado por proteínas que definen una firma de exosoma única específicamente
relacionada con la célula productora y que determinan su papel en varios fenómenos
biológicos, como la progresión de la enfermedad, y pueden representar una fuente de
biomarcadores para el diagnóstico, pronóstico y respuesta a la enfermedad. tratamiento.

A medida que se realizan más estudios de proteoma, cada vez es más evidente que más allá
del conjunto de proteínas conservadas, los exosomas contienen proteínas que reflejan su
origen celular. Por ejemplo, numerosos estudios proteómicos han demostrado que los
exosomas derivados de tumores (TDE) expresan un conjunto discreto de proteínas
específicamente relacionadas con el fenotipo tumoral e involucradas en la proliferación celular,
presentación de antígenos, transducción de señales, migración, invasión y angiogénesis,
apoyando la hipótesis de que Los exosomas pueden desempeñar un papel crucial en la
modulación de la progresión tumoral y en la preparación del nicho metastásico [26].
Recientemente, se demostró que las integrinas exosómicas (ITG) dirigen la colonización
específica de órganos al interactuar con los receptores en las células objetivo de una manera
específica de tejido, preparando la formación de nicho premetastásico.

En particular, los autores demostraron que las integrinas exosómicas α6β4 y α6β1 estaban
asociadas con metástasis pulmonares, mientras que la integrina exosómica αvβ5 se relacionó
con metástasis hepáticas. Este estudio también demostró que los TDE son suficientes para
redirigir la metástasis de las células tumorales que normalmente carecen de la capacidad de
hacer metástasis a un órgano específico [29].

Varios estudios han demostrado que el tratamiento de las células cancerosas con compuestos
antitumorales induce alteraciones de la composición proteica basal de los TDE que revierte
sus acciones pro-tumorales. Taverna y col. informaron que después del tratamiento con
curcumina, un compuesto derivado de plantas bien conocido por sus efectos anticancerígenos,
las células de leucemia mieloide crónica liberaron exosomas (curcumina / CML-exos) con
diferencias significativas en su composición de proteínas en comparación con los exosomas
liberados por los no tratados células (CML-exos). En particular, se informó que la curcumina /
CML-exos se redujo significativamente en proteínas pro-angiogénicas y se enriqueció en
proteínas con actividad antiangiogénica y esto reflejó la pérdida de la capacidad del CML-
exosoma para promover el fenotipo angiogénico y alterar el organización de barrera endotelial
[30].

La evidencia acumulada en los últimos años ha demostrado que los exosomas derivados de
las células madre mesenquimatosas (MSC) pueden mediar varias de las funciones
tradicionalmente asociadas con las proteínas secretoras canónicas, como los factores de
crecimiento del secretoma MSC [31-33]. En un reciente estudio proteómico se informó que los
exosomas derivados de MSC contienen un perfil robusto de efectores paracrinos angiogénicos,
con un uso potencial para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el tejido
isquémico. Entre ellos se identificaron el factor de crecimiento derivado de plaquetas, el factor
de crecimiento epidérmico, el factor de crecimiento de fibroblastos y, en particular, las
proteínas de la vía de señalización del factor nuclear kappaB (NFkB) [34].
Fen y col. También informó que el choque térmico induce a las células madre Sca-1 + a liberar
exógenos enriquecidos en el factor de transcripción del choque térmico 1 (HSF1) que dirige
los cardiomiocitos isquémicos hacia un fenotipo pro-supervivencia mediante la represión
epigenética de miR-34a [35].


Como se mencionó anteriormente, otro aspecto interesante, correlacionado con la peculiar

proteína de la proteína del exosoma de la firma, es la posibilidad de usar exosomas como
fuente de biomarcadores para varias patologías. Varios datos publicados en los últimos años
apoyan firmemente el impacto clínico efectivo de los exosomas que, como agregados
multimoleculares, también ofrecen la oportunidad única de identificar la combinación de
diferentes biomarcadores.

Recientemente, mediante el uso de análisis de espectrometría de masas, se encontró un

proteoglicano de la superficie celular, glypican-1 (GPC1), enriquecido específicamente en
exógenos derivados de células cancerosas. Se detectaron exosomas circulantes positivos
para GPC1 en el suero de pacientes con cáncer de páncreas con especificidad y sensibilidad
absolutas, discriminando a sujetos sanos y pacientes con una enfermedad pancreática benigna
de pacientes con cáncer de páncreas [36].

En otro artículo interesante, se propuso el papel de la exosomal-survivina como marcador de

diagnóstico y / o pronóstico en pacientes con cáncer de mama temprano. Los autores
encontraron que los niveles de esta proteína (y de su variante de empalme) fueron
significativamente más altos en todas las muestras de suero de exosomas de mujeres
afectadas por cáncer de seno en comparación con los controles. Además, la expresión variable
de los niveles de Survivin-2B se correlacionó con las etapas del cáncer [37]. Curiosamente,
además del plasma / suero, otros biofluidos, como la orina, pueden representar fuentes
valiosas de biomarcadores exosómicos.

El uso potencial de exosomas urinarios se informó en general para el diagnóstico y el manejo

clínico de los cánceres urogenitales, como el de vejiga y el de próstata.


Un estudio comparativo de perfiles de proteínas mediante proteómica basada en

espectrometría de masas destacó la expresión de ITGA3 e ITGB1 (proteínas involucradas en
procesos de migración / invasión) en exosomas liberados por líneas celulares de cáncer de
próstata (LNCaP y PC3T). Posteriormente, estas proteínas se encontraron más abundantes
en los exosomas urinarios de pacientes metastásicos en comparación con la hiperplasia
prostática benigna o el cáncer de próstata (PCa), lo que sugiere el uso potencial de exosomas
urinarios para la identificación de pacientes con PCa metastásica de manera no invasiva [38].

Además de su papel en la biología tumoral, existe una creciente evidencia de que los
exosomas pueden desempeñar un papel en la regulación del metabolismo específico del tejido
y / o de todo el cuerpo a través de la entrega de diferentes moléculas de carga exosomal a los
tejidos adyacentes y remotos. Aunque todavía hay datos limitados sobre la aplicabilidad clínica
de los biomarcadores exosómicos para la predicción de la progresión de los síndromes
metabólicos [39], algunos estudios prometedores han respaldado la hipótesis de que las
proteínas de los exosomas circulantes o urinarios pueden estar potencialmente asociadas a la
obesidad y complicaciones metabólicas en pacientes con mani - enfermedad cardiovascular
fest [40] y complicaciones renales de diabetes [41–43].

La nefropatía diabética (DN) es una complicación importante de la diabetes mellitus y la causa

más frecuente de enfermedad renal en etapa terminal. Los marcadores actuales para el
diagnóstico de DN (es decir, creatinina y excreción de albúmina urinaria) tienen limitaciones
comprobadas y se necesita el descubrimiento de nuevos marcadores candidatos para una
mejor estadificación de la enfermedad, predicción de resultados y monitoreo de la respuesta a
la intervención clínica. Estudios proteómicos recientes de exosomas urinarios han
proporcionado indicaciones prometedoras para el uso potencial de estas nanovesículas como
fuente de biomarcadores de DN [41, 42]. Por ejemplo, una comparación cuantitativa sin
etiqueta de exosomas urinarios de DN versus grupo de control permitió resaltar un panel de
tres proteínas (AMBP, MLL3 y VDAC1) que cambian en DN y que podrían usarse para
desarrollar nuevos enfoques de diagnóstico para monitorear el inicio de la enfermedad y
progresión [42]. Curiosamente, en otro estudio se subrayó que los exosomas urinarios reflejan
mejor los cambios de proteínas ocurridos en el riñón de pacientes diabéticos. Los autores
informaron que, de acuerdo con las alteraciones encontradas en el tejido renal de pacientes
diabéticos, la gelatinasa y la ceruloplasmina se encontraron respectivamente con actividad
disminuida y niveles elevados en los exosomas urinarios de pacientes con DN.


En contraste, los niveles de estas dos proteínas en la orina completa fueron muy variables y
no se correlacionaron con los niveles en el tejido renal diabético [43].

Los estudios actuales sobre exosomas proporcionan indicaciones prometedoras sobre su

uso efectivo en entornos clínicos y merecen un mayor avance para desarrollar herramientas
de diagnóstico y pronóstico no invasivas nuevas y válidas en múltiples enfermedades.