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ENZIMAS
Automvil obtiene energa por oxidacin de hidrocarburos a CO2 + agua a una temperatura de 2200C. Clula obtiene energa oxidando C6H12O6 a CO2 + agua a 37C Catlisis tal vez funcin ms importante de las protenas. Protenas catalizadoras ENZIMAS

Catalizadores ms eficientes: 1020 versus 102 104. Catalizadores altamente especficos. Enzimas no crean reacciones qumicas ni alteran la constante de equilibrio [Keq depende slo de la diferencia entre los niveles de energa de los reactivos y los productos (G)]. Las enzimas no cambian el G de una reaccin. Como se demuestra en la grfica de abajo, las enzimas slo disminuyen la energa de activacin, pero no cambian la diferencia de energa entre los reactivos y los productos.

Enzimas disminuyen fuertemente la Energa de Activacin.

Caractersticas de las reacciones catalizadas por enzimas

Las enzimas convierten una reaccin no espontnea en una reaccin espontnea. Aumentan la velocidad de la reaccin.

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Por ser catalizadores no se consumen durante la reaccin. Para catalizar una reaccin especfica, un enzima debe hacer dos cosas: (1) unir el sustrato correcto, (2) situar el sustrato en el centro activo y (3) generar el producto final. El resultado de la formacin del complejo enzima-sustrato es la reduccin de la energa de activacin para que proceda la reaccin, con la consiguiente conversin del sustrato en producto(s). Estos pasos se representan esquemticamente en la imagen inferior para el caso de la enzima glicoltica fructosa bifosfato aldolasa.

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Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante. Si representamos v0 frente a [S]0 obtenemos el siguiente grfico:

Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden. A altas [S]0, la enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S]0. En este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es mxima (Vmax).

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Constante de Michaelis-Menten Para explicar la relacin observada entre la velocidad inicial (v0) y la concentracin inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: - En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato - En la segunda etapa, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando la enzima libre:

Km = k2 + k3 / k1

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La constante de Michaelis-Menten (Km) es un parmetro cintico importante por mltiples razones: - Km es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. En efecto, si Km = [S], la ecuacin de Michaelis-Menten se reduce a: v = Vmax/2. - El valor de Km da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor Km, mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor Km, menor afinidad. - Km se define como (k2+k3/k1), donde las reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la reaccin 1 lo forma. - As, si Km es grande, el complejo ES es inestable pues predomina la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato). - Si Km es pequea, el complejo ES es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato). - La Km del sustrato natural es menor que la de los sustratos anlogos. Si dos sustratos del mismo enzima tienen distinta Km, el que presente mayor Km tiene menor afinidad por el enzima, y la reaccin transcurre siempre a menor velocidad que con el sustrato de menor Km, salvo a concentraciones saturantes de sustrato, donde la v = Vmax. - Los valores de Km de muchos enzimas son prximos a los de la concentracin fisiolgica de sus sustratos, de forma que pequeas variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la velocidad de toda una ruta metablica.

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Tipos de enzimas Oxido-reductasas: Catalizan reacciones de oxidorreduccin o redox. Precisan la colaboracin de las coenzimas de oxidorreduccin (NAD+, NADP+, FAD) que aceptan o ceden los electrones correspondientes; tras la accin cataltica, estas coenzimas quedan modificados en su grado de oxidacin por lo que deben ser transformadas antes de volver a efectuar la reaccin cataltica. Ejemplo: Deshidrogenasas.

Transferasas: Transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de ciertas molculas) a otras sustancias receptoras. Suelen actuar en procesos de interconversion de monosacridos, aminocidos, etc. Ejemplos: transaminasas, quinasas.

Hidrolasas: Verifican reacciones de hidrlisis con la consiguiente obtencin de monmeros a partir de polmeros. Suelen ser de tipo digestivo, por lo que normalmente actan en primer lugar. Ejemplo: glucosidasas, lipasas

Isomerasas: Actan sobre determinadas molculas obteniendo de ellas sus ismeros de funcin o de posicin. Suelen actuar en procesos de interconversin. Ejemplo: epimerasas.

Liasas: Realizan la degradacin o sntesis de los enlaces denominados "fuertes" sin ir acoplados a sustancias de alto valor energtico (como el ATP). Ejemplos: descarboxilasas, sintasas. Ligasas: Realizan la degradacin o sntesis de los enlaces denominados "fuertes" mediante al acoplamiento a sustancias de alto valor energtico (como el ATP). Ejemplos: sintetasas, carboxilasas. 6

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PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser protenas y de actuar como catalizadores. Como protenas, poseen una conformacin natural ms estable que las dems conformaciones posibles. As, cambios en la conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica. Los factores que influyen de manera ms directa sobre la actividad de un enzima son: pH, temperatura y cofactores.

Efecto del pH:

- Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el llamado pH ptimo.

- La mayora de los enzimas son sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad. Pepsina gstrica: pH 2 Ureasa: pH 7 Arginasa: pH 10

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Efecto de la Temperatura:

Cofactores A veces, un enzima requiere para su funcin la presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la catlisis: los cofactores. Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de los enzimas conocidos requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima. Muchas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente al enzima se llaman grupos prostticos. La forma catalticamente activa del enzima, es decir, la enzima unida a su grupo prosttico, se llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se llama apoenzima.

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EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La velocidad de una reaccin enzimtica depende de la concentracin de sustrato. La presencia de los productos finales puede hacer que la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su sentido

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EFECTO DE LOS INHIBIDORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: inhibidores. Pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original (INHIBIDOR COMPETITIVO). Los inhibidores competitivos se unen de forma reversible a la enzima libre, y no al complejo E~S, para formar un complejo enzima inhibidor (E~I) Con frecuencia, el sustrato y el inhibidor compiten por el mismo lugar en la enzima. La concentracin del complejo E~I depende de la concentracin del inhibidor libre y de la constante de disociacin KI. Debido a que el complejo E~I se disocia fcilmente, la enzima est disponible de nuevo para unir al estrato. La actividad de la enzima disminuye debido a que no se produce una reaccin productiva durante el tiempo limitado que existe el complejo E~I. El efecto de un inhibidor competitivo sobre la actividad puede invertirse aumentando la concentracin de sustrato. A [S] elevadas, todos los lugares activados estn llenos de sustrato y la velocidad de reaccin alcanza el valor que se observa sin un inhibidor. Las sustancias que se comportan como inhibidores competitivos, es decir, que reducen la afinidad aparente de una enzima por el sustrato, suelen tener una estructura semejante a la del sustrato. Entre estas molculas hay productos de reaccin o anlogos que no se metabolizan, o derivados del sustrato.

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Pueden alterar la conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al sustrato (INHIBIDOR NO COMPETITIVO). En algunos reacciones catalizadas por enzimas el inhibidor puede unirse tanto a la enzima como al complejo enzima sustrato: En estas circunstancias, que se denominan inhibicin no competitiva, el inhibidor se une a un lugar diferente del lugar activo. La unin del inhibidor ocasiona la modificacin de la conformacin de la enzima que impide la formacin del producto. Normalmente, los inhibidores no competitivos no afectan a la unin del sustrato y se parecen poco o nada a ste. Como con los inhibidores competitivos, la inhibicin no competitiva slo se invierte parcialmente aumentando la concentracin de sustrato.

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Pueden unirse covalentemente a la enzima produciendo inhibicin IRREVERSIBLE.

Enzimas Alostricas: La mayora de las enzimas alostricas son protenas con varias subunidades. La unin del sustrato a un protmero en una enzima alostrica afecta a las propiedades de unin de los protmeros adyacentes. La actividad de las enzimas alostricas se ve afectada por molculas efectoras que se unen a otros lugares denominados lugares alostricos o reguladores. Las enzimas alostricas generalmente catalizan pasos reguladores clave de las rutas bioqumicas.

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Covalente

Efectores de las enzimas

Algunas enzimas se regulan por la interconversin reversible entre sus formas activa e

nactiva.

Estos cambios de la funcin estn producidos por diversas modificaciones covalentes. Muchas de estas enzimas poseen residuos especficos que pueden estar fosforilados y desfosforilados. Por ejemplo, en un proceso controlado por hormonas, la forma inactiva de la enzima glucgeno fosforilasa b) se convierte en la forma activa (glucgeno fosforilasa a) por la adiccin de un grupo fosfato a residuo especfico de serina. Otros tipos de modificaciones covalentes reversibles son la acetilacin y la nucleotidilacin (la adiccin covalente de un nucletido).

No Covalente Numerosas sustancias interaccionan no covalentemente con las enzimas modificando s actividad.

Coenzimas y grupos prostticos 14

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a) Muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos y otras reacciones requieren, adems de su sustrato, una segunda molcula orgnica conocida como coenzima sin la cual son nactivas.

b) Para distinguirlas de iones metlicos activadores y de las enzimas mismas, las coenzimas se definen como compuestos orgnicos termoestable, de peso molecular bajo, requeridas para la actividad de las enzimas.

c) La mayor parte de las coenzimas se unen a las enzimas por fuerza no covalentes. Las que orman enlace covalentes con las enzimas se denominan tambin grupos prostticos.

d) Es muy grande la importancia del grupo prosttico o de la coenzima desde el punto de vista funcional pues suelen ceder y recibir alternadamente parte de los productos de la reaccin.

e) En las reacciones de oxidoreduccin los hidrgenos desprendidos de un sustrato deben ser captados por una sustancia con lo que se expulsa al sustrato oxidado y es posible recibir una nueva molcula del sustrato con hidrgenos.

) Tal sustancia es una coenzima, como el NAD, el NADP, el FAD, etc., que, a su vez, suelen cederlos a una tercera sustancia o, cuando las reacciones son reversibles los pasan al sustrato oxidado para reducirlo.

g) Entre las reacciones que requieren coenzimas estn las oxidorreducciones, las reacciones de transferencia de grupo e isomerizacin y las reacciones que forman enlaces covalentes (claves 1,2,5 y 6;IUB).

h) Las reacciones lticas que comprenden reacciones hidrolticas catalizadas por enzimas digestivas no requieren de coenzimas.

Las coenzimas pueden considerarse como segundo sustrato

La siguiente tabla presenta una lista de coenzimas importantes e indica la vitamina que participa en la constitucin de cada una.
Nombre Pirofosfato de tiamina Fosfato de piridoxal Biotina Flavn adenn mononucletido (FMN) Flavn adenn dinucletido (FAD) Nicotinamida adenn dinucletido (NAD) Nicotinamida adenn dinucletidofosfato (NADP) Coenzima A cido tetrahidroflico Coenzima B12 Vitamina correspondiente Tiamina Piridoxina Biotina Riboflavina Riboflavina Nicotinamida Nicotinamida cido pantotnico cido flico Vitamina B12

No es la coenzima, sino la porcin protenica o apoenzima quien posee la capacidad de reconocer con precisin al sustrato y dar especificidad a la holoenzima. 15

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Vitaminas Las vitaminas son compuestos orgnicos potentes presentes en concentraciones pequesimas en los alimentos; tienen funciones especficas y vitales en las clulas y tejidos. El organismo no las sintetiza, y su ausencia o absorcin inadecuada produce enfermedades carenciales o avitaminosis especficas. Son diferentes entre s respecto a funcin fisiolgica, estructura qumica y distribucin en los alimentos. Las vitaminas actan como sustancias reguladoras, actuando como coenzimas en los procesos metablicos de nuestro organismo. Las vitaminas se clasifican en dos grupos: VITAMINAS HIDROSOLUBLES Incluyen la vitamina C y el complejo vitamnico B.

Ampliamente distribuidas en los alimentos. Solubles en agua (se pierden con la coccin). La mayor parte son termolbiles. Actan como coenzimas en reacciones metablicas del organismo.

VITAMINAS LIPOSOLUBLES: Incluyen las vitaminas A, D, E y K.

Solubles en solventes grasos. Son termoestables. Pueden producir toxicidad. Tienen una funcin fisiolgica especfica.

Vitaminas B Conocidas tambin con el nombre de complejo vitamnico B, son sustancias frgiles, solubles en agua, varias de las cuales son sobre todo importantes para metabolizar los hidratos de carbono.

Vitamina B1 (TIAMINA) 16

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Las funciones bioqumicas de la tiamina exigen su conversin en pirofosfato de tiamina (TPP), que sirve de coenzima en varias reacciones metablicas. El pirofosfato de tiamina se denomina tambin cocarboxilasa porque una de sus funciones principales es la descarboxilacin oxidativa de los cetocidos alfa. El pirofosfato de tiamina participa adems en las transcetolaciones, en las cuales se realiza la transferencia de unidades de 2-carbono entre varios intermediarios de la derivacin de monofosfato de hexosa, una va alterna del metabolismo de la glucosa. La tiamina se encuentra en los tejidos normalmente en forma de pirofosfato de tiamina, aunque tambin existe un poco de tiamina libre y sus formas monofosfato (TM) y trifosfato (TPP).

Vitamina B2 (RIBOFLAVINA) 17

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La riboflavina acta como parte de un grupo de enzimas llamadas flavoprotenas. Las formas con actividad metablica son riboflavina-5-fosfato, llamada tambin mononucletido de riboflavina (FMN) y dinucletido de adenina y flavina (FAD).

Vitamina B3 (NIACINA) 18

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La nicotinamida o vitamina B3, vitamina del complejo B cuya estructura responde a la amida del cido nicotnico o niacina, funciona como coenzima. En su forma amida, constituye las coenzimas NAD (dinucletido de nicotinamida y adenina) y NADP (fosfato de dinucletido de nicotinamida y adenina), que sirven de portadoras de hidrgeno. NAD+ se requiere en las principales vas metablicas que culminan en la descomposicin oxidativas de hexosas, aminocidos y cidos grasos. NADP reducido se necesita en la sntesis de cidos grasos, colesterol y de las hormonas esteroides. Solo el cido nicotnico y la nicotinamida pueden entrar y salir de las clulas de los tejidos orgnicos; cada clula es capaz de sintetizar las coenzimas para su propio uso.

Vitamina B6 19

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La vitamina B6 es un conjunto de tres compuestos qumicos semejantes: piridoxina (PN), piridoxal (PL) y piridoxamina (PM). Los compuestos difieren en el tomo de carbono en la posicin cuatro del ncleo piridina: un alcohol primario (piridoxina), el aldehdo correspondiente (piridoxina) y un grupo aminoetil (piridoxamina). Los mamferos pueden utilizar con facilidad cada uno de esos compuestos despus de convertirlos en el hgado en el piridoxal 5-fosfato, la forma activa de la vitamina. Interviene en el metabolismo de los aminocidos Las enzimas que contienen PALP participan adems en la descarboxilacin.

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Vitamina B12 (COBALAMINA)

Cianocobalamina - Vitamina B12 La cobalamina o vitamina B12 tambin se conoce como cianocobalamina, una de las vitaminas necesaria en cantidades nfimas para la formacin de nucleoprotenas, protenas y glbulos rojos.

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cido Pantotnico

El cido panttenico forma parte de la coenzima A (CoA). La CoA desempea papel primordial en la produccin de energa a partir de carbohidratos, grasas y protenas. T Tambin interviene en la sntesis de cidos grasos, esteroles y hormonas esteroides.

Biotina

La fijacin a CO2 ocurre en una reaccin de dos pasos; la primera comprende unin del CO2 a la mitad de biotina de la holoenzima y, el segundo, transferencia del CO2 unido a biotina hacia un aceptor apropiado.

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Vitamina D

La vitamina D es fundamental para la absorcin del calcio y del fsforo. Acta junto con la hormona paratiroidea y la calcitonina en la absorcin del calcio y del fsforo. Los dos compuestos fundamentales dotados de actividad de vitamina D son colecalciferol, vitamina D3 y ergocalciferol, vitamina D2. Todas ellas pueden formarse a partir de precursores naturales (provitaminas) por irradiacin con luz ultravioleta: D3 se obtiene de 7-dehidrocolesterol presente en la piel y en otros tejidos animales y D2 se obtiene del ergosterol presente en formas vegetales inferiores.

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Vitamina E En la actualidad, se conocen ocho tocoferoles con actividad de vitamina E que ocurren de modo natural. Se considera que el alfa (a) tocoferol (5,7,8-trimetil tocol) es el tocoferol de mayor importancia, puesto que constituye alrededor de 90% de los tocoferoles en tejidos de animales.

Una de las caractersticas qumicas de importancia de los tocoferoles es que son agentes de oxidorreduccin que bajo algunas circunstancias actan como antioxidantes, y esto al parecer es la base de casi todos los efectos de la vitamina E.

Vitamina A: La vitamina A fue la primera de las vitaminas liposolubles que se conoci. Es un alcohol polinico isoprenoide que se conoce tambin con otros nombres como retinol, axeroftol, biosterol, vitamina antixeroftlmica y vitamina antiinfecciosa.

Retinol Del retinol derivan los esteres de retinol (forma en la que se deposita) y, por oxidacin resulta el retinal y el cido retinoico.

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Acido Retinoico

<> 11-Cis-Retinal En los alimentos de origen animal, la vitamina A se presenta, en su mayor proporcin, en la parte lipdica como retinol esterificado con el cido palmtico. En los vegetales y en algunos organismos marinos, encontramos los carotenoides, como el -caroteno, pigmento amarillo constituido por dos molculas de retinal unidas en el extremo aldehdo de sus cadenas carbonadas.

-Caroteno

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Otras vitaminas del grupo B

cido flico

El cido flico es una coenzima necesaria para la formacin de protenas estructurales y hemoglobina.

Isoenzimas a) Es posible que en un tipo de tejido existan diversas y mltiples formas moleculares de una enzima, a las que se denominan isoenzimas. b) Son por lo tanto protenas con actividad cataltica que favorece la misma reaccin pero que pueden distinguirse por alguna caracterstica fsica, estructural, inmunolgica, etc.

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