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Instituto de Reproducción Animal e Investigación Alimentaria, Academia Polaca de Ciencias, División de Ciencias Alimentarias, Olsztyn
El objetivo del estudio fue comparar las propiedades inmunorreactivas paralelas y las características sensoriales de la lenteja (lente culinaria) y frijol mungo (
Vigma radiataL.) brotes. Las semillas se germinaron con y sin luz a 20°C hasta 3 días. Los cambios en la inmunorreactividad de los brotes se determinaron
mediante el método ELISA competitivo utilizando antisueros policlonales de conejo para proteínas de lentejas y frijol mungo. La calidad sensorial de las muestras
se evaluó mediante análisis descriptivo cuantitativo (QDA). En QDA, un panel capacitado (n=9) evaluó el olor, el sabor y la textura de los brotes. Los resultados
indicaron que los efectos de la germinación sobre las propiedades inmunorreactivas de los brotes con cotiledones dependían del tipo de leguminosas. La
presencia o ausencia de luz durante el proceso de germinación no afectó los resultados obtenidos. La eliminación de los cotiledones redujo casi por completo la
inmunorreactividad de las muestras (97 % para lentejas y 99 % para frijol mungo). Se encontró que los efectos de la germinación en el perfil sensorial de los
brotes dependen del tipo de leguminosas pero, en lo que respecta a los brotes de frijol mungo, también de las condiciones de procesamiento. El QDA demostró
diferencias significativas entre los germinados para los siguientes atributos: amargor (p<0,001), sabor a “vaina de guisante” (p<0,01), harinosidad (p<0,001) y
jugosidad (p<0,01).
La germinación de semillas de leguminosas para consumo humano Semillas y germinación.Se compraron semillas secas de lentejas
es un proceso bien conocido que ha sido ampliamente utilizado a lo largo y frijol mungo en un mercado local de Polonia. Se remojaron en
de los siglos en la cultura oriental. Hoy en día, las semillas germinadas agua destilada durante 3,5 horas y las semillas embebidas se
han ganado popularidad en los países occidentales y se ofrecen a los ubicaron en germinadores de ensalada de 3 niveles con bandejas de
consumidores como alimento saludable biotecnológico tradicional. Se depósito (Raszyn-Rybie "Bio-natura", Polonia). El proceso de
informa que varios factores nutritivos, como aminoácidos, vitaminas y germinación se llevó a cabo en un germinador de semillas
minerales, aumentan durante la germinación [Kuoet al.,2004; friaset al., (Economic Delux EC00-065, Snijders, Países Bajos) a 20°C durante 3
2002; Bauet al.,2000]. Al mismo tiempo, hay indicaciones de que la días (72 h) con luz continua y en oscuridad. Las semillas se
germinación es eficaz para reducir los inhibidores de tripsina, los enjuagaron todos los días con agua destilada durante la
galactósidos, los taninos, las lectinas y para aumentar la digestibilidad de germinación. Los brotes de 3 días con cotiledones, cuando estaban
las proteínas [Ibrahimet al., 2002; Bauet al.,1997; Savelkoulet al.,1992; listos para el consumo, se sometieron a la evaluación sensorial y se
urbanoet al., 2005]. También se observaron cambios en los compuestos determinaron las propiedades inmunorreactivas (abreviadas como:
polifenólicos de diferentes leguminosas durante la germinación LLC - lenteja con luz; MLC - frijol mungo con luz; LDC - lenteja en la
[Bartoloméet al.,1997; Troszyńskaet al.,2006b]. Con respecto a los oscuridad; MDC - frijol mungo en la oscuridad). Aparte de los brotes
cambios importantes de los componentes nutrientes y no nutrientes, la con cotiledones (como arriba), también se determinó la
germinación podría ser una técnica de procesamiento valiosa para inmunorreactividad para un extracto de proteína de los brotes sin
modificar las propiedades inmunorreactivas [Besleret al.,2001; satheet cotiledones (abreviado como: LL - lenteja con luz; ML - frijol mungo
al.,2005] y percepción sensorial [Bauet al.,2000] sin embargo, la con luz; LD lenteja en la oscuridad; MD
información sobre estas áreas es escasa. – frijol mungo en la oscuridad). Las semillas y los brotes para
examinar las propiedades inmunorreactivas se congelaron en
El propósito de este estudio fue evaluar el efecto de la nitrógeno líquido y se liofilizaron.
germinación sobre las propiedades inmunorreactivas de los brotes
de lentejas y frijol mungo e investigar cómo este proceso influyó en Extracción de proteínas.Las proteínas se extrajeron de lentejas o
la percepción sensorial de las semillas. semillas de frijol mungo, tanto crudas como después de la germinación
durante 2 h con 0,1 mol/L de tampón Tris-HCl que contenía 0,1 mol/L
Dirección del autor para correspondencia: M.Sc. Agnieszka Wołejszo, Instituto de Reproducción Animal e Investigación Alimentaria, ul. Tuwima 10, 10-747 Olsztyn,
Polonia; tel.: (48 89) 523 46 76; fax: (48 89) 524-01-24; correo electrónico: wolejszo@pan.olsztyn.pl
© Copyright del Instituto de Reproducción Animal e Investigación Alimentaria de la Academia Polaca de Ciencias
416 A. Wołejszo et al.
Olor
Electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio- frijol olor característico de las semillas de leguminosas secas hervidas
poliacrilamida (SDS-PAGE).Las separaciones electroforéticas de herboso como el aroma de la hierba recién cortada
corrieron en un tampón Tris-glicina, pH 8,3. La tinción de proteínas como té fuerte o plátano verde (muestra de referencia: ácido
astringente
se llevó a cabo con Coomassie Brilliant Blue R-250. tánico 0,2%)
nota asociada con verduras crucíferas frescas (muestra de
acre
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Las microplacas referencia: rodaja de rábano)
se recubrieron con el antígeno (lentejas o proteínas de frijol mungo) (10 vaina de guisante nota específica que recuerda a la vaina de guisante sin semillas de guisante
µg/ml) en una solución tampón de carbonato de 9 mmol/l, pH 9,6 y se herboso nota característica de las espinacas hervidas
incubaron durante 18 h a 4ºC.°C; luego se enjuagó 4 veces con PBS-T.
Textura
Este procedimiento se repitió después de cada paso de este método. Los
sitios de las microplacas que no estaban saturados con el antígeno se
harina sensación durante la masticación de las muestras de harina de leguminosas
llenaron con una solución de gelatina al 1,5% de 150 µL/pocillo y se grado liberando agua de los brotes mientras mastica la
jugosidad
muestra
incubaron durante 30 min a 25°C. Los pocillos se llenaron tanto con una
muestra (que contenía el antígeno o muestras analizadas) como con los sensación de fibrosidad percibida al masticar la
fibrosidad
muestra
anticuerpos policlonales de conejo obtenidos para un antígeno dado (50
µL de cada solución de una concentración adecuada por pocillo). Para Puntos de anclaje: Olor/Sabor: ninguno – muy intenso; Textura: baja
– alto (mientras mastica la muestra 10 veces)
mezclar los componentes del proceso, las microplacas se colocaron en un
agitador durante 5 minutos y se incubaron durante 1 hora a 37ºC.°C. A
continuación, las microplacas se incubaron con conjugado de peroxidasa fueron seleccionados y definidos minuciosamente para el perfilado (Tabla
IgG anticonejo. Luego de enjuagar la microplaca, se agregó el sustrato 1). Las intensidades de los atributos se calificaron en escalas gráficas
(TMB) y luego de 30 min se detuvo la reacción agregando 2 mol/LH2ASI continuas no estructuradas. Las escalas tenían 10 cm de largo y estaban
QUE4.La absorbancia se midió a 450 nm utilizando un lector automático ancladas verbalmente en cada extremo y los resultados se convirtieron a
Sunrise-Tecan.Los resultados obtenidos fueron procesados con el valores numéricos (de 0 a 10 unidades) por computadora.
ImmunofitTMSoftware EIA/RIA de Beckman.
Condiciones de preparación y evaluación de las muestras.Los
brotes se sacaron de un germinador de semillas al menos 1 h antes
Producción de anticuerpos policlonales.Los anticuerpos de la evaluación para equilibrarlos a temperatura ambiente. Las
policlonales se obtuvieron mediante inmunización cuádruple en muestras de aproximadamente 5 g de brotes cada una, se
conejos por vía subcutánea e intramuscular a intervalos de 2 presentaron en orden aleatorio a los evaluadores de tres recipientes
semanas. Cada vez, se utilizó 1 ml de solución que contenía 10 mg de plástico codificados digitalmente (5 cm × 10 cm) cubiertos por
de proteína. La primera inmunización se realizó en presencia de tapas. Con las muestras, los panelistas recibieron una taza de agua
adyuvante completo de Freund y la siguiente, en presencia de de manantial a temperatura ambiente (Aleksandria, Polonia) para
adyuvante incompleto de Freund. Se utilizó el método ELISA limpiar sus paladares. Las evaluaciones se llevaron a cabo en la sala
indirecto para determinar el título de los anticuerpos obtenidos. del laboratorio sensorial cumpliendo con los requisitos de las
normas ISO [ISO 8589:1998] y los resultados se recopilaron
Panel sensorial.Las evaluaciones sensoriales de las muestras fueron mediante un sistema informático. Las sesiones de prueba se
realizadas por un panel compuesto por 9 miembros seleccionados y realizaron por la mañana, entre las 10 y las 12 h. El análisis se realizó
capacitados de acuerdo con las directrices ISO [ISO 8586-1:1993]. Todos en dos sesiones independientes, en dos repeticiones.
los evaluadores han superado la prueba básica de sabor, la prueba de
olor y la prueba de visión de color. Antes de su participación en los Análisis estadístico.Se usó ANOVA para probar las diferencias
experimentos, los sujetos fueron entrenados en descriptores sensoriales estadísticas en los atributos sensoriales entre las muestras de brotes. Las
para brotes frescos de semillas de leguminosas. medias de tratamiento se compararon utilizando la prueba de diferencia
mínima significativa protegida (LSD) de Fisher. Se consideró significancia
Método sensorial.Se utilizó el análisis descriptivo estadística a p<0,05. El análisis estadístico se realizó utilizando un
cuantitativo (QDA) para determinar las diferencias en las paquete de software (statSoft Inc., v. 7.1, Tulsa, OK, EE. UU.).
características sensoriales de las muestras [Stone & Sidel, 1993;
Lawless y Heymann, 1999]. Antes del análisis, el panel desarrolló RESULTADOS Y DISCUSIÓN
vocabularios de los atributos sensoriales en una sesión de mesa
redonda, utilizando un procedimiento estandarizado [ISO/DIS Las separaciones SDS-PAGE de proteínas de lentejas y semillas
13299:1998]. Trece atributos de olor, sabor y textura de frijol mungo se muestran en la Figura 1 a y b. Los resultados
Propiedades inmunorreactivas y calidad sensorial de los brotes de lentejas y frijol mungo 417
45,0
frijol mungo durante 3 días resultó en la hidrólisis de las proteínas,
36,0 lo que se reflejó en la desaparición o pérdida de densidad de las
principales bandas de proteínas, junto con la aparición de una
Peso molecular (kDa)
29,0
mancha de polipéptidos de menor peso molecular. FDS-
- Los patrones de PAGE de proteínas de semillas germinadas con
24.0 cotiledones indicaron que la lenteja (LLC, LDC) contenía 9 bandas cada
20.0 una y el frijol mungo MLC, MDC) 8 bandas para dos condiciones de
germinación. Los mismos cambios en el perfil electroforético de las
proteínas se observaron durante la germinación de semillas de guisantes
[Urbano et al.,2005]. Los brotes de lentejas y frijol mungo contenían 6
14.2
(LL), 5 (LD) y 8 (ML), 7 (MD) bandas, respectivamente. Las bandas de
proteínas de bajo y alto peso molecular, que se observaron en lentejas y
6.5 brotes de frijol mungo sin cotiledones (LL, LD, ML, MD), probablemente
eran proteínas recién sintetizadas. Los resultados obtenidos están de
acuerdo con los datos de la literatura. Se informó que las proteínas de
diferentes tipos de leguminosas se degradaron a las 72 h de la
Crudo LLC LL PMA LD
germinación [Ahmed y otros., 1995]. Por esta razón, se puede anticipar
que la hidrólisis de proteínas durante la germinación daría como
LLC – brotes de lentejas con luz con cotiledones, LL –
resultado un cambio en las propiedades inmunorreactivas de las
brotes de lentejas con luz sin cotiledones, LDC – brotes
de lentejas en oscuridad con cotiledones, LD – brotes de semillas.
lentejas en oscuridad sin cotiledones
b Se han aislado algunos alérgenos fuertes de semillas de lentejas
[López-Torrejóny otros., 2003; pascualy otros., 1999]. El principal
alérgeno de semillas de lentejas, Lec c 1, conserva su alta actividad
alergénica incluso durante el proceso de ebullición [Sánchez-Monge y
66,0
otros., 2000]. El proceso de germinación resultó en una disminución de
las propiedades inmunorreactivas entre un 40% y un 35% según las
a CUADRO 2. Efecto de la germinación sobre los atributos sensoriales de los brotes de lentejas y
900 Coles
Crudo
600 a
O-frijol
500 10
T-fibrosidad O-hierba
400
8
300
T-jugosidad 6 F-verde
200
4
100
ML Maryland
2
0 T-harina frijol f
0
FIGURA 2. Inmunorreactividad residual de proteínas después de la germinación: (a)
lenteja, (b) frijol mungo.
F-hierba F-fresco
Este trabajo se realizó con los fondos estatutarios del propiedades sensoriales y sus efectos en las preferencias de alimentos y
bebidas. Soy. J. Clin. Nutr., 2005, 81 (suplemento), 330S–335S.
Departamento de Análisis Sensorial de Alimentos y el Departamento
20. López-Torrejón G., Salcedo G., Martínez-Esteban M., Díaz-
de Enzimas Alimentarias y Alérgenos del Instituto de Reproducción
- Peralez A., Pascual CY, Sánchez-Monge R., Len c1, un alérgeno principal y
Animal e Investigación Alimentaria de la Academia Polaca de
vicilina de semillas de lentejas: Aislamiento de proteínas y clonación de
Ciencias. Este artículo es parte del Ph.D. estudio de A. Wołejszo. ADNc. J. Allergy Clin. Immunol., 2003, 112, 1208–1215.
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Instituto Rozrodu Zwierząt i Badań Żywności Polskiej Akademii Nauk, Oddział Nauki o Żywności, Olsztyn
W pracy porównano właściwości immunoreaktywne i jakość sensoryczną kiełków soczewicy i fasoli Mung. Kiełkowanie nasion
prowadzono w szafie klimatyzacyjnej przez 3 dni w temperaturze 20°C zi bez światła. Analizę sensoryczną świeżych kiełków wykonano
metodą profilowania sensorycznego (QDA), un właściwości immunoreaktywne metodą ELISA (współzawodniczącą). Wyniki wykazały, że
warunki kiełkowania (w świetle, bez światła) nie miały wpływu na właściwości immunoreaktywne kiełków. Stwierdzono, że kiełki bez liścieni
nie wykazywały właściwości immunoreaktywnych. Analiza QDA wykazała, że jakość sensoryczna kiełków była zróżnicowana i zależała od
gatunku użytych nasion. Wykazano, że warunki kiełkowania nie różnicowały profili sensorycznych kiełków soczewicy, natomiast miały one
wpływ na profile sensoryczne kiełków fasoli Mung.