BIOENSAYO:

VIBRIO FISCHERI
POR: KARLA VALERIA ZAVALA
DRA. MIRTHA FERRARY
IA385 TOXICOLOGÍA Y SALUD
INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
El bioensayo Microtox con la bacteria bioluminiscente Vibrio fischeri, es una técnica
fotométrica que usa la respuesta a la exposición de compuestos tóxicos por parte de
una bacteria marina bastante sensible a una gran variedad de sustancias tóxicas,
incluso cuando están presentes en bajas concentraciones.

COMPRENDER E IDENTIFICAR
LAS APLICACIONES DE LAS
1 PRUEBAS ECO TOXICOLÓGICAS
CON VIBRIO FISCHERI

IDENTIFICAR EL PROCEDIMIENTO
2 BÁSICO PARA EL MUESTREO DEL
BIOENSAYO CON VIBRIO FISCHERI
FUNDAMENTOS DE LA
PRUEBA
El bioensayo bacteriano Microtox, diseñado por
Azur Environmental se basa en monitorizar los
cambios en las emisiones de luz natural de una
bacteria luminiscente Vibrio fischeri
(Photobacterium phosphoreum). Vibrio fischeri es
una bacteria gram negativa, anaerobia
facultativa, de la familia Vibrionaceae cuya
característica más representativa es la
bioluminiscencia (producción de luz por parte de
ciertos organismos vivos). Es importante destacar
la estabilidad en la emisión de luz así como la
gran sensibilidad que presenta a una amplia
variedad de sustancias tóxicas.
REACCIÓN DE LUMINISCENCIA

La reacción de bioluminiscencia
bacteriana está ligada al sistema de
transporte de electrones en la
respiración celular y es indicativa del
estado metabólico de la célula, de
modo que una disminución de la
bioluminiscencia indica la disminución
de la respiración celular.
TIPOS DE PRUEBAS

ECOTOXICOLÓGICAS
EFLUENTES DE PLANTAS DE

TRATAMIENTO DE AGUAS.

ENSAYOS EN SEDIMENTOS

EVALUACIONES DE REDUCCIÓN DE

LA TOXICIDAD Y EVALUACIONES DE

IDENTIFICACIÓN DE TOXICIDAD

MONITOREO DE BIOCIDAS EN AGUAS

INDUSTRIALES

MONITOREO DE AGUAS SUPERFICIALES

PARA LA IDENTIFICACIÓN DE FUENTES DE

CONTAMINACIÓN
VIBRIO FISCHERI
Aliivibrio fischeri es una bacteria gramnegativa,

que tiene forma de barra (bacilo), la cual habita

en todos los ambientes marinos. A. fischeri tiene

propiedades bioluminiscentes, y se encuentra

predominantemente en relaciones de simbiosis con

varios animales marinos, principalmente en

moluscos como Eupryma scolopes. Es un organismo

heterotrófico, que puede usar oxígeno en la

producción de energía con una cadena de

transporte de electrones, siendo una cepa oxidasa

positiva
PROCEDIMIENTO GENERAL DEL

BIOENSAYO

MATERIALES EQUIPO
Hielera Sistema Microtox Modelo 500 constituido por:
Hielo o geles refrigerantes Fotosensor (Luminómetro)
Pipetas automáticas de 250, 500 y 1,000 ml (de
Pozos de incubación con temperatura controlada

volumen fijo o ajustable) de 15 °C

Pipeta automática de 10 ml o de repetición
Pozo para reactivo reconstituido con temperatura

ajustable a mediciones de10 ml controlada de 5 °C (pozo activación)

Puntas para micropipetas Congelador a una temperatura de –20° C.

Sistema de cómputo con software acoplado a

Jeringas de 0.6 ml para pipeta de repetición

sistema Microtox, Probit u otro que sea de utilidad
Celdillas de vidrio de borosilicato.
Hoja de cálculo
PREPARACIÓN DE LA PRUEBA

1 2 3
PARA ANÁLISIS DE AGUA MARINA
AGREGAR 250 ML DE
AGREGAR 1,000
Y SALOBRE SE REQUIEREN
SOLUCIÓN DE AJUSTE PREPARAR DOS SISTEMAS DE
ML DE SOLUCIÓN
OSMÓTICO Y 2500 ML DE PRUEBA, UNO IGUAL AL DE
DILUENTE EN
LA MUESTRA PROBLEMA MUESTRAS DE AGUA
EPICONTINENTAL, CONTENIENDO
LAS CELDILLAS
EN LA CELDILLA 5.
250 ML DE SOLUCIÓN DE AJUSTE
MEZCLAR POR PIPETEO,
1, 2, 3 Y 4 OSMÓTICO Y 2500 ML DE LA
ABSORBIENDO Y MUESTRA PROBLEMA DEL AGUA
EYECTANDO LA SOLUCIÓN SALINA POR ANALIZAR Y OTRO
PREPARADO SIN LA SOLUCIÓN DE
TRES VECES CON AYUDA
AJUSTE OSMÓTICO.
DE LA PIPETA DE 1 000 ML.
CONDICIONES RECOMENDADAS PARA LA PRUEBA DE

TOXICIDAD AGUDA CON VIBRIO FISCHERI

INTERFERENCIAS

COLOR EN LA
COMPUESTOS

RTURBIEDAD EN LAS

MUESTRA ORIGINAL Y
VOLÁTILES
MUESTRAS DILUIDAS
DILUIDA
ANÁLISIS DE DATOS
Los resultados se expresan a través de la CE50 y las
unidades pueden estar en porcentaje, mL/L, mg/L, o
cualquier otra unidad acorde con el tipo y manejo de
muestra que se analice. Los cálculos para la
determinación de la CE50, así como la elaboración
de la curva asociada, pueden ser realizados a través
de diversas herramientas como los software MTX 7 o
la versión más reciente, ambos producidos por el
fabricante de Microtox para el registro automático
de datos..
CONCLUSIONES
El bioensayo de Microtox permite detectar efectos
conjuntos producidos por la presencia de múltiples
contaminantes y contaminación natural, esto es
común cuando se realizan evaluaciones de riesgo
ecológico en escenarios reales. También permite
determinar la conveniencia de usar sedimentos para
evaluar el impacto de microcontaminantes en
ecosistemas acuáticos.

Las respuestas de toxicidad en los estudios permite

indicar respuestas positivas de toxicidad en
estaciones o sitios con importantes descargas de
actividad industrial y zonas con actividades
agrícolas permanente por lo que es necesario
asociar mediciones cuantitativas con ensayos
rápidos de toxicidad para hacer el seguimiento de
daños causados por contaminación de las aguas. Y
dependiendo de sus resultados, pueden indicar la
importancia de monitorear los sedimentos y tomarlos
como guías de calidad ambiental.
¡GRACIAS!