BIOFÍSICA

UNIVERSIDAD DE INTEGRACIÓN DE LAS AMERICAS

BIOFISICA

GUIA DE TRABAJOS PRÁCTICOS

Prof. Aldo G.

2021
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INTERCAMBIOS HIDRICOS
OBJETIVOS:

● Identificar los fenómenos desarrollados en el proceso de transporte de moléculas a

través de la membrana celular en muestras de célula vegetal y animal.
● Desarrollar habilidades y destrezas en la manipulación de materiales de laboratorio
y preparación de soluciones.

FUNDAMENTO DE LA PRACTICA RELACIONES HÍDRICAS DE LA CÉLULA VEGETAL

Las relaciones hídricas de las plantas y los cultivos se hallan estrechamente ligadas a las
relaciones hídricas de las células que componen las mismas, ya que buena parte del agua
se halla dentro de las células y estas constituyen el sitio donde se cumplen casi todos los
procesos fisiológicos.

A los fines inmediatos, podemos visualizar a la célula como un protoplasto, limitado por
una membrana extensible (el plasmalema), alojado en un receptáculo relativamente
rígido constituido por la pared celular.
Estructura de la membrana celular

Toda discusión acerca del intercambio de agua y solutos entre la célula y el medio
requiere de la consideración de una estructura de propiedades únicas: la membrana
plasmática o plasmalema. El plasmalema es permeable al agua pero debido a sus
características fisicoquímicas el plasmalema limita y controla el movimiento de iónes y
otras sustancias (incluso el agua) hacia y desde el citoplasma. Allí se produce también la
percepción de algunos cambios del medio externo, que generan reacciones en el
metabolismo celular, por ejemplo, en la membrana hay receptores de ciertas hormonas
que modifican las respuestas de las células. Es apropiado recordar también que las
membranas de los organelos cumplen funciones análogas al definir compartimentos
subcelulares.

El plasmalema se conforma de una bicapa de lípidos enfrentados por sus porciones no

polares, formando una matriz en la cual las proteínas se encuentran insertadas total
(proteínas intrínsecas) o parcialmente (proteínas extrínsecas). Las proteínas se disponen
también con las zonas polares expuestas al agua y las zonas hidrofóbicas en relación con
la matriz lipídica. En esta estructura las moléculas de lípidos y de proteínas pueden
moverse en el plano de la membrana con cierta facilidad manteniendo, sin embargo, la
estructura básica de la polaridad. Esta disposición de las moléculas constituye la
estructura más estable para esta matriz, ya que maximiza las interaccioneshidrofílicas e
hidrofóbicas.
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Fig. 1: Modelo de la estructura de una membrana. La matriz lipídica consiste en una doble capa de
lípidos con las cabezas polares hacia el agua y con las colas hidrofóbicas hacia la otra capa de
lípidos. Las proteínas globulares de la membrana pueden estar total o parcialmente incluídas en la
matríz lipídica, y están orientadas con las partes hidrofílicas hacia el agua y las partes hidrofóbicas
incluídas en la matriz lipídica

El pasaje a través de la membrana puede realizarse por difusión siguiendo gradientes de energía
libre; o puede efectuarse con un gasto de energía metabólica ligada directamente al pasaje de la
sustancia en cuestión. Este último proceso puede realizarse incluso en contra de un gradiente de
energía libre.

No existen evidencias experimentales que sugieran que el pasaje activo de agua a través de las
membranas tenga importancia cuantitativa. En la discusión que sigue, se considerará el
movimiento de agua como un proceso pasivo por excelencia. Por otra parte, existen todavía
algunas incertidumbres acerca de la naturaleza del mecanismo del movimiento de agua a través de
las membranas, especialmente en referencia a la importancia relativa del flujo masal y la difusión.
Si bien el pasaje de agua a través de las membranas se realiza siguiendo gradientes de energía
libre, la permeabilidad de las mismas cumple un rol importante en dicho movimiento.
Anteriormente se creía que el agua difundía a través de la doble capa lipídica y que la
permeabilidad de la membrana dependía de los lípidos que la conformaban. Recientemente, esta
teoría tuvo que ser modificada con el descubrimiento, tanto en la membrana plasmática como en
el tonoplasto de células vegetales, de cierto tipo de proteína intrínseca a la cual se denominó
“acuaporina”. Dicha proteína esta constituida por seis dominios que atraviesan la membrana y
presenta dos lazos con una sequencia específica de aminoácidos que son los que conformarían el
poro. Este canal facilita el pasaje del agua en comparación con el movimiento a través de la bicapa
lipídica. Los canales proteicos de agua o “acuaporinas” llegan a conformar hasta un 10% del total
proteico de la membrana y son atravesados por las moléculas de agua en forma alineada en una
fila simple, a altas velocidades.

El transporte es importante para la célula porque le permite expulsar de su interior los desechos
del metabolismo, también el movimiento de sustancias que sintetiza como hormonas. Además es
la forma en que adquiere nutrientes mediante procesos de incorporación a la célula de nutrientes
disueltos en el agua. Las vías de transporte a través de la membrana celular y los mecanismos
básicos para las moléculas de pequeños tamaños son:

Transporte pasivo

El transporte pasivo permite el paso molecular a través de la membrana plasmática a favor del
gradiente de concentración o de carga eléctrica es el transporte de mayor concentración a menor
concentración. El transporte de sustancias se realiza mediante la bicapa lipídica o los canales
iónicos, e incluso por medio de proteínas integrales. Hay cuatro mecanismos de transporte pasivo:

Ósmosis: transporte de moléculas de agua a través de la membrana plasmática mediado por

proteínas específicas –acuaporinas– y a favor de su gradiente de concentración.

Difusión simple: paso de sustancias a través de la membrana plasmática, como los gases
respiratorios, el alcohol y otras moléculas no polares.

Difusión facilitada: transporte celular donde es necesaria la presencia de un carrier o

transportador (proteína integral) para que las sustancias atraviesen la membrana. Sucede porque
las moléculas son más grandes o insolubles en lípidos y necesitan ser transportadas con ayuda de
proteínas de la membrana.

Ultrafiltración o Diálisis: En este proceso de transporte pasivo, el agua y algunos solutos pasan a
través de una membrana por efecto de una presión hidrostática. El movimiento es siempre desde
el área de mayor presión al de menos presión. La ultrafiltración tiene lugar en el cuerpo humano
en los riñones y es debida a la presión arterial generada por el corazón. Esta presión hace que el
agua y algunas moléculas pequeñas (como la urea, la creatinina, sales, etc.) pasen a través de las
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membranas de los capilares microscópicos de los glomérulos para ser eliminadas en la orina. Las
proteínas y grandes moléculas como hormonas, vitaminas, etc., no pasan a través de las
membranas de los capilares y son retenidas en la sangre.

Transporte activo

El transporte activo es un mecanismo celular por medio del cual algunas moléculas atraviesan la
membrana plasmática contra un gradiente de concentración, es decir, desde una zona de baja
concentración a otra de alta concentración con el consecuente gasto de energía (llamados
biotreserineos).7Los ejemplos típicos son la bomba de sodio-potasio, la bomba de calcio o
simplemente el transporte de glucosa.

Transporte activo

En contraste con la difusión facilitada, que no requiere energía y lleva moléculas o iones
hacia un gradiente de concentración , el transporte activo bombea moléculas e iones en
contra de un gradiente de concentración. A veces, un organismo necesita transportar algo
en contra de un gradiente de concentración. La única forma en que esto puede suceder es
por medio del transporte activo, que Usa la energía que se produce por la respiración
(ATP). En el transporte activo, las partículas se mueven a través de una membrana celular
de una menor concentración a una mayor concentración. El transporte activo es el
proceso que requiere energía para bombear moléculas e iones a través de membranas
"cuesta arriba", en contra de un gradiente de concentración.
El transporte activo de moléculas pequeñas o iones a través de una membrana celular se
lleva a cabo generalmente por las proteínas de transporte que se encuentran en la
membrana.

Las moléculas más grandes, tales como el almidón también pueden ser transportadas
activamente a través de la membrana celular por procesos llamados endocitosis y
exocitosis.

En la mayor parte de los casos este transporte activo se realiza a expensas de un gradiente
de H+ (potencial electro-químico de protones) previamente creado a ambos lados de la
membrana, por procesos de respiración y fotosíntesis; por hidrólisis de ATP mediante ATP
hidrolasas de membrana. El transporte activo varía la concentración intracelular y ello da
lugar un nuevo movimiento osmótico de re-balanceo por hidratación. Los sistemas de
transporte activo son los más abundantes entre las bacterias, y se han seleccionado
evolutivamente debido a que en sus medios naturales la mayoría de los procariontes se
encuentran de forma permanente o transitoria con una baja concentración de nutrientes.

Los sistemas de transporte activo están basados en permeases específicas e inducibles. El

modo en que se acopla la energía metabólica con el transporte del soluto aún no está
dilucidado, pero en general se maneja la hipótesis de que las permeases, una vez captado
el sustrato con gran afinidad, experimentan un cambio transformacional dependiente de
energía que les hace perder dicha afinidad, lo que supone la liberación de la sustancia al
interior celular.
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El transporte activo de moléculas a través de la membrana celular se realiza en dirección

ascendente o en contra de un gradiente de concentración (Gradiente químico) o en contra
un gradiente eléctrico de presión (gradiente electro-químico), es decir, es el paso de
sustancias desde un medio poco concentrado a un medio muy concentrado. Para
desplazar estas sustancias contra corriente es necesario el aporte de energía procedente
del ATP. Las proteínas portadoras del transporte activo poseen actividad ATPasa, que
significa que pueden escindir el ATP (Adenosin Tri Fosfato) para formar ADP (dos Fosfatos)
o AMP (un Fosfato) con liberación de energía de los enlaces fosfato de alta energía.
Comúnmente se observan tres tipos de transportadores:

Uniformadores: son proteínas que transportan una molécula en un solo sentido a través
de la membrana.

Anti portadores: incluyen proteínas que transportan una sustancia en un sentido mientras
que simultáneamente transportan otra en sentido opuesto.

Importadores: son proteínas que transportan una sustancia junto con otra,
frecuentemente un protón (H+).

PARTE EXPERIMENTAL

En esta práctica evaluaremos el fenómeno de Trasporte Pasivo particularmente el de

OSMOSIS.

La ósmosis es un tipo de transporte pasivo en el cual solo las moléculas de agua son
transportadas a través de la membrana. El movimiento se realiza a favor del gradiente,
esto es desde el medio de mayor concentración de agua (menor concentración de soluto)
hacia al de menor concentración de agua (mayor concentración de soluto y solvente), con
ello permite equilibrar las concentraciones del soluto de los medios separados por las
membranas celular. La función de la ósmosis es mantener hidratada a la célula, dicho
proceso no requiere del gasto de energía (ATP).
El fenómeno de la ósmosis se puede observar en todas las células, tanto animales como
vegetales, cuando son sometidas a distintos tipos de soluciones, o medios:

Ósmosis en una célula animal

Comportamiento de células animales ante distintas presiones osmóticas

En un medio isotónico, tanto la entrada como salida de agua es constante, es decir, existe
un equilibrio dinámico.
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En un medio hipotónico, desaparece el equilibrio dinámico por tanto la entrada de agua es

superior a la salida, en consecuencia, la célula absorbe el agua hasta reventarse,
fenómeno conocido como citó lisis o lisis celular.

En un medio hipertónico, al contrario la salida de agua es superior a la entrada de agua

por lo tanto la célula se deshidrata perdiendo su contenido hasta arrugarse y morir, este
fenómeno es conocido como cremación.

Ósmosis en una célula vegetal

Comportamiento de célula vegetal ante distintas presiones osmóticas

En un medio hipertónico, la célula elimina agua y el volumen de la vacuola disminuye,

produciendo que la membrana plasmática se despegue de la pared celular, ocurriendo la
plasmólisis.
En un medio isotónico, existe un equilibrio dinámico de entrada y salida de agua.
En un medio hipotónico, la célula toma agua y sus vacuolas se llenan aumentando la
presión de turgencia, dando lugar a la turgencia.
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MATERIALES Y REACTIVOS

● 1 Cebolla
● Placas de Petri
● Jeringas estériles
● Pinza de ceja
● Cuchillo
● Guantes ● Algodón
● Alcohol al 70%
● Microscopio
● Laminas y laminillas
● Agua destilada
● Cloruro de Sodio
● Lugo
● 4 Vasos de precipitado o probetas
● Espátulas de metal
● Pinceles indelebles
● Agitador

PROCEDIMIENTO Preparación de las muestras

Muestra de célula vegetal:
● Cortar un pedazo de la cebolla y de este retirar una capa.
● De la capa, retirar el tejido de la cara interna usando la pinza de cejas y
colocarlas en cada una de las cajas de Petri.
● Realizar esta acción por 4.
● Colocar los pedazos de tejido de cebolla en cada una de las soluciones de
Cloruro de sodio preparadas que se encuentran en las cajas de petri
identificadas adecuadamente.
● Dejar reposar por 5 - 10 min como mínimo.
● Colocar una gota de la solución salina en la lámina, luego la muestra de célula
vegetal, luego una gota de Lugol y sobre esta una laminilla.
● Realizar las observaciones al microscopio.
Muestras de célula animal:
● La extracción sanguínea será realiza por el docente encargado, realizando una
pequeña punción en el dedo anula parte superior costado derecho (zona de
mayor irrigación). Realizar presi{on para generar gotas grandes.
● Colocar un par de gotas de sangre en cada una de las placas que contienen las
soluciones de cloruro de sodio indicadas anteriormente.
● Dejar reposar por 5-10 min como mínimo.
● Colocar una gota de la solución en la lámina haciendo uso de una pipetas o
jeringas nuevas) y sobre esta una laminilla.
● Realizar las observaciones al microscopio.
PARTE 3: Realiza tus observaciones a 5x y 40x en el microscopio. Para observaciones a
100x usar aceite de inmersión.
Anota y dibuja esquemática el comportamiento de la membrana celular y la pared
celular y el núcleo celular.
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INFORME DE LA PRÁCTICA

DATOS EXPERIMENTALES
Título de la práctica: Intercambios hidricos Calificación: 20puntos

Puntos Logrados:
Nombre del alumno: Goldschmitt Hernan

Carrera: Kinesiología

Fecha de realización de la práctica:

21/06/22
Resultados obtenidos:
Dibuja o inserta las imágenes del fenómeno observado en la columna de la derecha:
Muestra de célula Fenómenos y características observadas
vegetal

Solución
Hipotónica

sus vacuolas se llenan aumentando la presión de turgencia,

dando lugar a la turgencia.
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Solución
Isotónica

En un medio isotónico, existe un equilibrio dinámico de

entrada y salida de agua.

Solución
Hipertónic
a

la célula elimina agua y el volumen de la vacuola disminuye,

produciendo que la membrana plasmática se despegue de la
pared celular, ocurriendo la plasmólisis.