Pérez D. Neri J., Rodríguez C. Andrea N., Zaragoza V. Paola O.

Equipo 2 2FM2

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Tamaño adecuado (dependiendo

Placa cromatográfica
cantidad de muestras). Manipular
cuidadosamente para no dañar el Se utiliza lápiz ya que no
adsorbente podría disolverse

¿Se conocen los Sí

Identificar gráficamente con ayuda de un No Identificar gráficamente con ayuda de un
componentes de
lápiz los puntos de aplicación de la muestra lápiz los puntos de aplicación de la muestra
la muestra?
1cm

Señalar la placa: Muestra Señalar la placa:

1cm
Adicionar a las marcas 1cm
con pipeta Pasteur o
Puntos de aplicación
capilar
de muestra
Puntos de aplicación
de muestra Introducir

Cámara
Adicionar con un capilar una serie
Eluyentes de distinta cromatografíca.
de eluyentes seleccionados para
polaridad Colocar Debe humedecer la
separación de la muestra
placa
cromatográfica al
contacto, pero no
Introducir debe estar en
Observar la forma en la que cada
Seleccionar aquel que haya contacto con la
uno separa la pequeña cantidad
separado mejor la muestra línea de aplicación
de muestra
de muestra
Papel filtro
humedecido en
Evitará que el disolvente:
disolvente se
evapore de la placa

Imagen 1: Elección del

correcto disolvente Sacar placa y secarla Tapar y dejar eluir la fase móvil casi hasta el borde superior

¿Se visualizan las

Aplicar revelador Calcular el Rf
Calcular el Rf distancias
Sí No químico
recorridas?

En muchas ocasiones no se conocen los componentes que integran una muestra a separar, por lo que la cromatografía
en capa fina nos ayuda a seleccionar el mejor eluyente para utilizar en una cromatografía en columna, de acuerdo a
sus características de polaridad y afinidad con los componentes de la muestra. Es de suma importancia ya que una
mala elección de eluyente no permitirá una correcta separación o purificación de nuestra muestra.
Pérez D. Neri J., Rodríguez C. Andrea N., Zaragoza V. Paola O. Equipo 2 2FM2

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Colocar Verticalmente con una pinza Introducir Un trozo de algodón en el fondo
Columna de cromatografía con ayuda de un agitador
universal o una pinza para bureta.

Seleccionar una columna adecuada Colocar un poco de hexano

con respecto a la cantidad de para adherirlo a la columna No realizar
disolvente y muestra. Revisar que presión. Evitar
no existan fugas en llave. que el algodón
quede atrapado
en el orificio de
Empacar la columna
salida de la pinza
30g de Gel de Sílice
de la columna
por gramo de muestra
Vaso de pp y
Colocar formar Realizarlo
Agregar a la columna
mezcla lentamente
homogénea
5mL de Hexano

Enjuagar paredes de la Nos ayuda a empacar

El nivel adecuado de eluyente es ligeramente columna con el eluyente todo el adsorbente
por encima de la superficie de la fase
estacionaria. NO DEJAR SECO EL ADSORBENTE.

Dejar gotear exceso de disolvente

Imagen 2: Columna
cromatográfica con la muestra

Abrir la llave de la columna

Colocar Columna empacada hasta observar que la
mezcla esté en contacto
Extracto de espinaca
con la fase estacionaria

Agregar una cantidad

Abrir la llave
pequeña de eluyente a Eluir la muestra
de la columna
la columna

Repetir hasta observar la separación de los componentes

Hexano Se necesitan 3 disolventes distintos para lograr la Una vez

separación de los componentes debido a la estructura de separados los
componentes: componentes
Preparar soluciones
se recogen los
9:1, 7:3 y 6:4  Hexano-acetato de etilo (9:1) eluye carotenos
Acetato
 Hexano-acetato de etilo (7:3) eluye xantófilas
eluatos
de etilo
 Hexano-acetato de etilo (6:4) eluye clorofilas
Imagen 2: Eluato obtenido con
eluyente HexOAc. 9:1
La cromatografía es un método de separación de gran eficacia ya que sus condiciones no son tan variables como
en una destilación o una cristalización que dependen en gran parte de la temperatura en los procedimientos que
se están realizando, así como el tiempo o la presión. En la cromatografía no influyen factores físicos del ambiente,
depende únicamente de las características de las moléculas de los compuestos involucrados como lo es la polaridad
y el mayor cuidado que se debe tener es la forma de empacar la columna. El realizar una buena cromatografía
depende de la buena elección de los eluyentes en cuanto a su afinidad por los componentes a separar.
Martínez Grau Ma. Ángeles, “Técnicas Experimentales en síntesis orgánica”. Editorial Síntesis. “Cromatografía” pp. 167 - 187