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Práctica 5: Cromatografía

Experiencia 1: Separación de carotenos

Manteniendo un
Colocar
Con pinza universal o goteo uniforme
con pinza para bureta

Columna para Agregar Suspensión de 4 g de


cromatografía sílica-gel en una mezcla
de hexano-acetato de
etilo (1:1)

Diámetro ligeramente
inferior al del interior de Introducir
la columna

Dejar gotear el disolvente y Llenar en su totalidad la Círculo de papel filtro y


esperar hasta que quede columna cromatográfica asentarlo en la superficie
ligeramente arriba de la fase con el disolvente de la sílica-gel
estacionaria

Con ayuda de una


pipeta graduada

Depositar sobre el papel


Cuidando de no Nunca permitir que el nivel
filtro 10 gotas del
derramarlo por las del disolvente baje más allá
concentrado de espinacas
paredes de la columna de la superficie de la sílica-gel

Recoger la primera fracción


colorida en tubos de ensayo Mantener constante el
Mantener el goteo hasta que
numerados y cubiertos con volumen del eluyente.
los pigmentos penetren en la
papel aluminio. sílica-gel y llenar lentamente la
Repetir con columna con la mezcla de
hexano-acetato de etilo (1:1)
Cuando termine de eluir esta primera extracto de
fracción, cambiar el eluyente a acetato de jitomate para la
etilo-metanol (1:1) y recoger la siguiente
experiencia 2
fracción en tubos de ensayo numerados y
cubiertos con papel aluminio
Práctica 5: Cromatografía
Experiencia 3: Separación por cromatografía en
placa fina de una mezcla de colorantes

En una Dibujar Una línea a 0.5 cm


cromatoplaca de distancia del
de 5x2 cm borde inferior
Con un lápiz de
punta suave

Por medio de una


micropipeta previamente
elaborada con un capilar

Teniendo cuidado de que éste


no rebase los puntos de Dejar secar y desarrollar el
cromatograma en una Aplicar sobre ésta en dos
aplicación y de que eluya puntos equidistantes, una
hasta 0.5 cm antes del borde mezcla acetato de etilo-
etanol (7:3) mezcla de colorantes
superior de la placa

Secar, observar y calcular


los valores de Rf. para cada
componente

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