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MINI REVISIÓN
Antonella Lupetti
Editado por:
Yi Wei Tang,
Cefeidas, Estados Unidos
Revisado por:
Dalia Denapaite,
Universidad de Trento, Italia
shangshang qin,
Universidad de Zhengzhou, China
*Correspondencia:
Antonella Lupetti
antonella.lupetti@med.unipi.it
Sección de especialidades:
Este artículo fue enviado a
Microbiología Clínica,
una sección de la revista
Fronteras en celular e infección
Microbiología
Recibido: 15 junio 2020
Aceptado: 22 de septiembre de 2020
Publicado: 11 noviembre 2020
Cita: Florio
W, Baldeschi L, Rizzato C, Tavanti A,
Ghelardi E y Lupetti A (2020) Detección
de resistencia a los
antibióticos mediante espectrometría de
masas MALDI-TOF: un área en expansión.
Frente. Célula. Infectar. Microbiol.
10:572909.
doi: 10.3389/fcimb.2020.572909
Fronteras en microbiología celular y de infecciones | www.frontiersin.org
publicado: 11 noviembre 2020 doi:
10.3389/fcimb.2020.572909
Detección de resistencia a antibióticos por
Espectrometría de masas MALDI-TOF: una
Área de expansión
2 1
Walter Florio1
, Lelio Baldeschi, Cosmeri Rizzato1
, Arianna Tavanti,
3
emilia ghelardi y
1*
1
Dipartimento di Ricerca Traslazionale e delle Nuove Tecnologie in Medicina e Chirurgia, Università di Pisa, Pisa, Italia,
2
Departamento de Oftalmología, Université Catholique de Louvain, Cliniques Universitaires Saint-Luc, Bruselas, Bélgica,
3
Dipartimento di Biologia, Università di Pisa, Pisa, Italia
Se han propuesto varios métodos basados en MALDI-TOF MS para la detección rápida de la
resistencia a los antimicrobianos. Los métodos más estudiados incluyen la evaluación de la actividad
de las ÿ-lactamasas mediante la visualización de la hidrólisis del anillo de ÿ-lactámicos, la detección
de biomarcadores responsables o correlacionados con la resistencia/no sensibilidad a los
medicamentos, y la comparación de perfiles proteómicos de bacterias incubadas con o sin
medicamentos antimicrobianos. La resistencia antimicrobiana a una serie de antibióticos pertenecientes
a diferentes clases ha sido probada con éxito por MALDI-TOF MS en una variedad de especies
bacterianas clínicamente relevantes, incluidos miembros de la familia Enterobacteriaceae , bacterias
gramnegativas no fermentadoras, cocos grampositivos, bacterias anaerobias. y micobacterias,
abriendo este campo a nuevos desarrollos clínicamente importantes. La detección temprana de la
farmacorresistencia mediante MALDI-TOF MS puede ser particularmente útil para que los médicos
optimicen la terapia con antibióticos para un mejor resultado de los pacientes con infección sistémica,
en todos los casos en los que un tratamiento con antibióticos rápido y efectivo es esencial para
preservar la función del órgano y/o o supervivencia del paciente.
Palabras clave: prueba de susceptibilidad antimicrobiana, hemocultivo, AST rápido, ensayo de crecimiento de microgotas, MBT-ASTRA,
MALDI-TOF, resistencia antimicrobiana
INTRODUCCIÓN
La aplicación de la tecnología MALDI-TOF MS a la microbiología de diagnóstico clínico ha proporcionado
una herramienta nueva, precisa y robusta que permite una identificación microbiana rápida y confiable
(Ferreira et al., 2011; Barnini et al., 2015; Tanaka et al., 2017; Florio et al., 2018a).
La generalización de las cepas bacterianas resistentes a múltiples fármacos, especialmente en
entornos hospitalarios, ha generado una necesidad apremiante para el desarrollo de métodos rápidos y
fiables para las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos (AST), y el potencial de MALDI-TOF
MS para lograr este objetivo ha sido explorado.
La resistencia a múltiples fármacos es un problema especialmente grave en las infecciones
sistémicas (Palacios-Baena et al., 2017) y en las infecciones que afectan a zonas críticas [p. ej., ojos y
órbita, donde la administración oportuna de un tratamiento eficaz es fundamental para preservar las
funciones específicas de los órganos o la supervivencia del paciente (Tsirouki et al., 2018; Choi et al., 2019)].
Por lo tanto, varios estudios investigaron la posibilidad de aplicar la tecnología MALDI-TOF MS para
la detección rápida de resistencia a los antibióticos en patógenos bacterianos aislados de infecciones
del torrente sanguíneo, así como para la detección de resistencia a los antimicrobianos en hongos
patógenos (Florio et al., 2018b). ).
1 noviembre 2020 | Volumen 10 | Artículo 572909
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Florio et al. AST por MALDI-TOF MS

La presente revisión proporciona (i) una descripción general sintética y
actualizada de los diferentes métodos propuestos basados en MALDI-TOF MS,
centrándose principalmente en sus aplicaciones más prometedoras y (ii)
información rápida y precisa sobre la resistencia a los antimicrobianos de
bacterias clínicamente relevantes.
EVALUACIÓN DE ÿ-LACTAMASA
ACTIVIDAD POR EM MALDI-TOF
Una de las primeras aplicaciones exitosas de MALDI-TOF MS para la detección
de resistencia a antibióticos (Figura 1) resultó de la observación de que la
hidrólisis del anillo de ÿ-lactámicos después de la exposición de antibióticos ÿ-
lactámicos a productores de ÿ-lactamasa (aeróbicos y bacterias anaerobias)
podrían revelarse en los espectros de masas por una disminución del pico
correspondiente al antibiótico y la aparición de picos que representan sus
productos de hidrólisis (Burckhardt y Zimmermann, 2011; Hrabak et al., 2011;
Johansson et al., 2014a,b; Jung et al., 2014b).
(Lau et al., 2014). Una beta lactamasa de clase C de espectro extendido de A.
baumannii, perteneciente a la familia de cefalosporinasas derivadas de
Acinetobacter (ADC), se identificó recientemente (m/zÿ40,279) y se evaluó como
un posible biomarcador de resistencia a los carbapenémicos. Entre las 51
cepas de A. baumannii resistentes a carbapenem, 49 mostraron una señal a 40
279 ± 87 m/z, mientras que cuatro de las 15 cepas sensibles a carbapenem
mostraron una señal a la misma m/z. La sensibilidad y la especificidad fueron
del 96 y el 73 % en comparación con la prueba de susceptibilidad al imipenem
por microdilución, que proporciona la determinación de la CIM (Chang et al.,
2018).
Utilizando el software de análisis ClinProtTools (v3.0; Bruker Daltonics)
para investigar las posibles diferencias entre los patrones de proteínas de las
cepas de K. pneumoniae productoras y no productoras de KPC, se detectó un
pico de 11 109 Da en los espectros de 30 de 34 productores de KPC, y estuvo
ausente en todos los aislamientos no productores de KPC (Gaibani et al., 2016).
Hallazgos anteriores mostraron que el pico de 11,109-Da es un producto de
escisión de una proteína hipotética llamada p019 (Lau et al., 2014).

Sin embargo, dado que el polipéptido p019 estaba ausente en un subconjunto

Se desarrolló un protocolo para la detección de la producción de
de plásmidos que albergan blaKPC, los resultados negativos deben
carbapenemasas por MALDI-TOF MS en cepas de Bacteroides fragilis que
complementarse con pruebas de confirmación.
albergan el gen cfiA que codifica la carbapenemasa (Johansson et al., 2014b).
La naturaleza heterogénea de la resistencia a la meticilina en Staphylococcus
La hidrólisis de ertapenem se detectó dentro de las 2,5 h solo en cepas
aureus ha impedido la posibilidad de clasificar S. aureus resistente a la
positivas para cfiA. El método se aplicó con éxito para detectar la actividad de
meticilina (MRSA) y S. aureus sensible a la meticilina (MSSA) en dos grupos
carbapenemasas directamente de frascos de hemocultivo inoculados con
claramente distinguibles según el análisis de agrupamiento de los perfiles
sangre humana y enriquecidos con cepas de B. fragilis que mostraban varias
espectrales de individuos aislados (Wang et al., 2013). Se logró un éxito parcial
CIM de ertapenem (Johansson et al., 2014a), lo que arrojó los resultados en 3
al establecer un método que se basa en la producción de una toxina de proteína
h. De interés, los valores de logRQ de los espectros calculados por el software
soluble en fenol (PSM-mec) por un subconjunto de cepas de MRSA (Chatterjee
se correlacionaron con los MIC para las cepas positivas.
et al., 2011), que es detectable por MALDI-TOF MS como un pico de 2415 ± 2,00
m/z y puede estar presente hasta en la mitad de los aislamientos de MRSA
Para reducir el tiempo de detección de la resistencia a carbapenem en
(Rhoads et al., 2016; Schuster et al., 2018). El péptido PSM-mec no provoca
bacterias Gram-negativas que causan infecciones del torrente sanguíneo, se
resistencia a la meticilina y se desconoce su función biológica, pero su
estableció un ensayo basado en MALDI-TOF MS midiendo la hidrólisis de
expresión está asociada a la resistencia a la meticilina. Se ha demostrado que
imipenem en hemocultivos (BC) enriquecidos con Pseudomonas aeruginosa,
la presencia del pico 2415 ± 2,00 m/z predice el transporte de mecA en S. aureus
Acinetobacter baumannii o Enterobacteriaceae produciendo diferentes
con una especificidad cercana al 100 %.
carbapenemasas (Oviano et al., 2016). El análisis se realizó mediante un
software del módulo MBT Compass STAR-BL (Bruker Daltonics), proporcionando
automáticamente un resultado (sensibilidad o resistencia) en función del grado
El software “MBT subtyping module” (Bruker Daltonics) ha sido desarrollado
de hidrólisis del antibiótico. Este ensayo, que requirió una incubación de
para detectar PSM-mec en el espectro de masas de aislados de S. aureus,
bacterias de 30 min con el antibiótico, mostró una sensibilidad del 98 % y una
proporcionando una evidencia indirecta de resistencia a la meticilina (Figura
especificidad del 100 %, alcanzando ambos el 100 % con una incubación de 60
2). Aunque la presencia de PSM-mec se asocia con resistencia a la meticilina
min. Estos resultados se han confirmado en dos grandes colecciones de
también en estafilococos coagulasa negativos (CoNS), la mayoría de ellos no
aislados bacterianos en los que la presencia de genes de carbapanemasas se
la produce (Schuster et al., 2018), por lo que tiene una utilidad limitada para
realizó de acuerdo con el método CLSI y mediante PCR (Akyar et al., 2019;
detectar resistencia a la meticilina. Contras.
Oviano et al., 2020).

La identificación de posibles marcadores asociados con la resistencia a

Sin embargo, la resistencia a los ÿ-lactámicos se detecta solo cuando está
mediada por ÿ-lactamasas, mientras que los otros mecanismos de resistencia
no se revelan, por lo que los resultados negativos deben confirmarse mediante
otros ensayos.
IDENTIFICACIÓN DE BIOMARCADORES
los medicamentos mediante MALDI-TOF MS también se ha investigado en
anaerobios (Nagy et al., 2011) [p. ej., B. fragilis cfiA positivo se puede distinguir
de las cepas cfiA negativas por un conjunto de cambios de pico en el intervalo
4.000-5.500 Da, utilizando el software MALDI Biotyper (Bruker Daltonics)]. Se
crearon dos espectros de referencia, uno específico para cepas negativas para
cfiA y otro para cepas positivas para cfiA.

ASOCIADO CON FARMACORRESISTENCIA Posteriormente, se demostró la posibilidad de detectar cepas de B. fragilis

resistentes a los carbapenémicos directamente de BC positivos al comparar
Uno de los enfoques propuestos basados en MALDI-TOF MS para detectar la los espectros ID de bacilos recuperados de BC enriquecidos con espectros
resistencia bacteriana a los carbapenémicos se basa en la identificación de principales positivos para cfiA y negativos para cfiA (Johansson et al., 2014a).
plásmidos que portan genes de carbapenemasas blaKPC.

Fronteras en microbiología celular y de infecciones | www.frontiersin.org 2 noviembre 2020 | Volumen 10 | Artículo 572909
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Florio et al. AST por MALDI-TOF MS

FIGURA 1 | Detección de productores de ÿ-lactamasa por MALDI-TOF MS basada en la hidrólisis del antibiótico ÿ-lactámico objetivo, como se visualiza por la desaparición del pico.

La creciente prevalencia de infecciones por P. aeruginosa Los métodos descritos anteriormente son específicos para un
extremadamente resistente a los medicamentos se debe a la mecanismo de resistencia, por lo que requieren la confirmación
propagación global de clones definidos de alto riesgo. Entre ellos, de resultados negativos, y tienen la ventaja de utilizar el
ST175 es particularmente frecuente en España y Francia. Se procedimiento de identificación de rutina sin incubación con el
evaluó un modelo de reconocimiento basado en picos de antibiótico, seguido de un análisis espectral diferente, excepto el
biomarcadores MALDI-TOF en tres colecciones de España y método de Leung, que no lo hace. no requiere cultura.
Francia. El análisis de espectros reveló dos picos de biomarcadores
(6911 y 7359 m/z) presentes en todas las cepas ST175, de los que
MALDI BIOTYPER-ANTIBIÓTICO
carecían la mayoría de las cepas susceptibles. El pico de 7359 m/
z ya estaba asociado con ST175 (Cabrolier et al., 2015) y el PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD ENSAYO RÁPIDO
reconocimiento del segundo pico aumentó la especificidad al 97,8 % (Mulet et al.,
(MBT-ASTRA) 2019).
Con otro enfoque centrado en el análisis espectrométrico de
masas de los lípidos de la membrana, se demostró que los El MBT-ASTRA es un método rápido para la detección de
glicolípidos bacterianos poseen características específicas de resistencia a los antibióticos basado en una herramienta de
especie que permiten la identificación bacteriana (Leung et al., software MALDI-TOF MS que calcula y compara el área bajo las
2017). A continuación, se describió un protocolo de extracción de curvas (AUC) de espectros de bacterias expuestas o no a un
lípidos (Liang et al., 2019) que reduce el tiempo de identificación antibiótico (Lange et al. , 2014; Sparbier et al., 2016). Las AUC de
a <1 h. Este método ha sido probado para detectar la resistencia la cepa bacteriana analizada se comparan para evaluar el crecimiento bacteria
a los antibióticos e identificar microbios, sin necesidad de cultivo, Si la cepa microbiana es susceptible, el AUC de la suspensión
utilizando una biblioteca de patógenos ESKAPE clínicamente bacteriana con el antibiótico se reducirá en comparación con la
relevantes y patógenos resistentes a la colistina que expresan el suspensión sin antibiótico, mientras que con una cepa resistente,
gen mcr-1 en trans. Se encontraron diferentes biomarcadores de el AUC con o sin antibiótico será comparable.
resistencia: las cepas de P. aeruginosa que contenían mcr-1 En principio, el MBT-ASTRA podría usarse para todas las
mostraron un cambio de masa, 1446–1569 m/z, derivado de una clases de antibióticos y especies microbianas (Ceyssens et al.,
adición de PEtN (1 m/z 123) al lípido A. El ion de 1569 m/z fue no 2017). Se evaluó la capacidad del MBT-ASTRA para detectar la
observado en cepas susceptibles; mientras que K. pneumoniae resistencia a los antimicrobianos en varios aislamientos clínicos
mostró una modificación del lípido A por AraN (1 m/z 131) unido seleccionados al azar de Mycobacterium tuberculosis y
al grupo fosfato terminal del lípido A hexaacetilado (1824 m/z), lo micobacterias no tuberculosas (NTM). Se analizó la sensibilidad
que resultó en una estructura modificada a 1955 m/z; de manera de las cepas de M. tuberculosis a la rifampicina, la isoniazida, la
similar, el espectro de masas de Morganella morganii con iones de lípido A modificado
linezolida con AraN
y el etambutol, cambió
y la NTM ade
la 1.796 a 1.927 m/z.
claritromicina y la rifabutina. Las medid

Fronteras en microbiología celular y de infecciones | www.frontiersin.org 3 noviembre 2020 | Volumen 10 | Artículo 572909
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Florio et al.
FIGURA 2 | Representación esquemática del método MALDI-TOF MS utilizado para discriminar cepas de Staphylococcus aureus en función de la presencia del
pico PSM-mec.
cambios en la biomasa bacteriana después de la adición de fármacos antimicrobianos.
Con este método, los perfiles de resistencia a los antimicrobianos de las cepas
de M. tuberculosis y NTM se detectaron correctamente. Sin embargo, el tiempo
de respuesta no se acortó para M. tuberculosis, mientras que para NTM fue una
semana antes.
Se evaluó el enfoque MBT-ASTRA (Jung et al., 2014b) para detectar la no
sensibilidad frente a gentamicina y ciprofloxacino en BC enriquecidos con
diferentes Enterobacteriaceae, así como frente a cefotaxima, piperacilina-
tazobactam y ciprofloxacino en BC monomicrobianos de pacientes con sepsis.
de bacterias Gram-negativas. Para detectar la no susceptibilidad con el método
MBT-ASTRA, los antibióticos se probaron en concentraciones que eran una
dilución más altas que los puntos de corte de susceptibilidad de EUCAST. En
general, los resultados de la identificación microbiana y las pruebas de
susceptibilidad se obtuvieron en aproximadamente 4 h. En experimentos con BC
enriquecidos, se obtuvo una clara separación entre los aislados susceptibles y
no susceptibles para la gentamicina en función de los valores medios de
crecimiento relativo observados. Para ciprofloxacina y piperacilina tazobactam,
un pequeño número de aislamientos fueron clasificados erróneamente como
susceptibles por el MBT-ASTRA, principalmente cuando los valores de MIC
estaban cerca de la concentración de antibiótico utilizada en el ensayo.
Fronteras en microbiología celular y de infecciones | www.frontiersin.org
AST por MALDI-TOF MS
En general, estos resultados indican que el MBT-ASTRA podría ser un
enfoque prometedor para la AST rápida de bacterias Gram-negativas recuperadas
directamente de BC monomicrobianos, pero también resaltan la necesidad de
optimizar el método, especialmente para la clasificación correcta de aislamientos
con valores MIC cercanos a las concentraciones de punto de corte, y para
algunos antibióticos.
Se evaluó el MBT-ASTRA (Sauget et al., 2018) para la detección rápida de
aislados de E. coli resistentes a amoxicilina y cefotaxima de BC positivos. Se
subcultivó una alícuota de los BC seleccionados durante 1 h en medio líquido
sin antibióticos antes de la recuperación de bacterias y la incubación con o sin
antibióticos, seguido del análisis de espectros con el software MBT-ASTRA.
En general, los resultados de esta prueba de susceptibilidad estuvieron
disponibles dentro de las 4 horas posteriores a la positividad de BC. La
concordancia categórica entre el MBT ASTRA y el método de referencia fue del
97 y 83 % para amoxicilina y cefotaxima, respectivamente. MBT-ASTRA clasificó
correctamente el 95 y el 84 % de los aislados de E. coli sensibles a amoxicilina y
cefotaxima, respectivamente, por lo que MBT-ASTRA puede variar según el
antibiótico probado.
El MBT-ASTRA se evaluó para AST de B. fragilis (Justesen et al., 2018),
mostrando una clara diferencia del crecimiento relativo entre una cepa
susceptible (ATCC 25285) y una resistente (O18) expuesta a clindamicina,
meropenem o
4 noviembre 2020 | Volumen 10 | Artículo 572909
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Florio et al. AST por MALDI-TOF MS

metronidazol. La precisión de este método debe confirmarse en concentraciones de antibióticos directamente en la placa objetivo de
aislamientos clínicos. MALDI-TOF MS (Idelevich et al., 2018a). Los autores probaron la
La fuerza y la limitación de este método se discutirán a continuación. resistencia a meropenem de K. pneumoniae y P. aeruginosa, pero se
podía usar cualquier especie microbiana y agente antimicrobiano,
ENSAYOS BASADOS EN DETECCIÓN DE PICO independientemente de los mecanismos de resistencia subyacentes.
Se estableció un volumen de incubación de 6 µl y tiempos de incubación
TURNO DESPUÉS DE ESTABLE
óptimos/mínimos de 4 y 5 h para K. pneumoniae y P. aeruginosa,
MARCADO ISOTOPICO (MBT-RESIST) respectivamente. En estas condiciones experimentales se alcanzó el
100% de sensibilidad y especificidad para ambos microorganismos,
Otro enfoque propuesto para determinar la farmacorresistencia en
y la tasa de pruebas válidas resultó del 100% para K. pneumoniae y
bacterias mediante MALDI-TOF MS se basa en el uso de medios
del 83,3% para P. aeruginosa. Curiosamente, el análisis de los
marcados con isótopos no radiactivos (Demirev et al., 2013). Las
espectros después de la incubación con el antibiótico se realizó
bacterias se cultivan, en paralelo, en dos medios de cultivo diferentes,
utilizando el software MALDI Biotyper 3.1, utilizado habitualmente para la identifica
uno que contiene 12C y el otro 13C como componente de carbono.
En otro estudio, el ensayo de crecimiento de microgotas directo
El espectro de masas de bacterias cultivadas en medios marcados
sobre el objetivo se evaluó en BC positivas de muestras de sangre
con isótopos que contienen antibióticos se compara con el espectro
enriquecidas con aislados de Enterobacteriaceae no sensibles a
de masas de la misma cepa cultivada en medios no marcados sin antibióticos.
meropenem y sensibles a meropenem (Idelevich et al., 2018b). El
Las bacterias resistentes pueden crecer en presencia del antibiótico
mejor rendimiento se obtuvo al recuperar las bacterias de los BC
que incorpora 13C en sus polipéptidos, lo que provoca un
positivos y después de una incubación de microgotas de 4 h con o
desplazamiento de los picos a m/z más altos en el espectro de masas.
sin meropenem en la concentración del punto de ruptura. En estas
Para evaluar la aplicabilidad del método que discrimina MSSA de
condiciones, se lograron una validez del 96,3 %, una sensibilidad del
las cepas de MRSA, se usaron medios de cultivo que contenían lisina 91,7 % y una especificidad del 100 %.
marcada con 13C para probar aislamientos clínicos de S. aureus
Recientemente, se desarrolló un panel de detección para la
resistentes a oxacilina y cefoxitina (Sparbier et al., 2013). Las
detección de actividad de ÿ-lactamasa de espectro extendido (ESBL)
bacterias se incubaron durante 3 h en tres condiciones diferentes:
y ÿ-lactamasa AmpC empleando el ensayo de crecimiento de
medio que contenía 12C sin antibiótico, medio que contenía 13C sin
microgotas directo sobre el objetivo (Correa-Martinez et al., 2019). El
antibiótico y medio que contenía 13C con antibiótico. Una de las 14
panel fue validado en 50 aislados clínicos incluyendo especies de las
cepas susceptibles se clasificó erróneamente como resistente a la
familias Enterobacteriaceae, Hafniaceae, Morganellaceae y
oxacilina y tres cepas se clasificaron erróneamente con respecto a la susceptibilidad/resistencia a la cefoxitina.
Yersiniaceae con diferentes mecanismos de resistencia (BLEE y/o
A continuación, se estableció el análisis de cambios de pico
AmpC) a cefalosporinas de tercera generación.
después de la incubación durante 3 h con L-lisina marcada con
Se evaluó el efecto sinérgico entre cuatro cefalosporinas e inhibidores
13C-15N o sin marcar para probar cepas de P. aeruginosa resistentes
de la ÿ-lactamasa BLEE (ácido clavulánico) y/o AmpC (cloxacilina)
a meropenem, tobramicina y ciprofloxacina (Jung et al., 2014a). Para
para detectar la producción efectiva de ÿ-lactamasa. El tiempo de
optimizar el ensayo, se añadió meropenem 30 min antes de la adición
incubación de bacterias con o sin inhibidores de ÿ lactamasa y/o
del aminoácido marcado con isótopo estable al tubo de ensayo, lo
que permitió que actuara el antibiótico. Los resultados revelaron una antibióticos se optimizó a las 4 h.
En comparación con los resultados de PCR, los valores de
clasificación concordante de cepas susceptibles y resistentes con el
concordancia porcentual positiva para la resistencia ESBL, AmpC y
método de referencia (Etest). En teoría, este método, al igual que el
ESBL+AmpC fueron 94,4, 94,4 y 100 % y los valores de concordancia
MBT ASTRA, podría aplicarse a todas las clases de antibióticos y
porcentual negativa 100, 93,7 y 100 %, respectivamente. La precisión
microorganismos. Los inconvenientes de estos dos métodos son (i)
del ensayo de crecimiento de microgotas directo sobre el objetivo
el tiempo de incubación requerido para el crecimiento microbiano,
resultó comparable a la del ensayo de microdilución en caldo, con un
(ii) la necesidad de optimizar las condiciones experimentales para
ahorro de tiempo de aproximadamente 14 horas y superior a las
diferentes combinaciones de aislado-antibiótico, (iii) una correlación
pruebas de disco combinado.
entre una alteración de los espectros de masas y los valores MIC.
Otro método basado en MALDI-TOF MS requiere la incubación de
Para Candida albicans, las concentraciones mínimas de cambio de
bacterias con diferentes concentraciones de antibiótico, la
perfil (MPCC, por sus siglas en inglés) [es decir, la concentración
recuperación de microorganismos antes del análisis MS (Li et al.,
mínima de fármaco a la que se puede detectar una alteración del
2018) utilizando el software MALDI Biotyper 3.1. Para evaluar la
espectro de masas, se ha correlacionado en gran medida con las
aplicabilidad del método, se analizaron aislados clínicos de A.
CIM (Marinach et al., 2009)]. La principal diferencia entre MBT ASTRA
baumannii sensibles y resistentes a meropenem después de una
y MBT-Resist es que este último requiere tres condiciones de crecimientoincubación
diferentes. de 4 h con diferentes concentraciones de antibiótico. Los
aislamientos se clasificaron como resistentes si la identificación se
RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS POR lograba con puntuaciones ÿ1,7 después de la incubación con
MICROGOTA DIRECTA EN EL OBJETIVO meropenem a la concentración de punto de corte, y como susceptibles

ENSAYO DE CRECIMIENTO (DOT-MGA) si la identificación fallaba (puntuaciones <1,7). Los autores

recomiendan aplicar un umbral de 2 µg/mL para la farmacorresistencia
Un método innovador permitió la detección de resistencia/ para reducir la probabilidad de errores muy importantes (falsa
susceptibilidad) debido a un crecimiento bacteriano insuficiente en presencia del a
susceptibilidad antimicrobiana de bacterias incubadas con punto de ruptura

Fronteras en microbiología celular y de infecciones | www.frontiersin.org 5 noviembre 2020 | Volumen 10 | Artículo 572909
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Florio et al. AST por MALDI-TOF MS

DISCUSIÓN terapia antimicrobiana, como es el caso de algunos marcadores propuestos

para la resistencia a carbapenémicos.
En esta revisión, se han resumido y discutido los avances recientes y los Se espera que el desarrollo de nuevos algoritmos analíticos, la
métodos recientemente propuestos para la detección rápida de la resistencia automatización de procedimientos y la optimización de ensayos amplíen y
a los antimicrobianos en patógenos bacterianos mediante MALDI-TOF MS. La perfeccionen las aplicaciones clínicas de MALDI-TOF MS en microbiología de
puntualidad y la precisión de los resultados de las pruebas son factores diagnóstico clínico.
cruciales para que los médicos decidan y administren rápidamente una
terapia antimicrobiana eficaz y dirigida, especialmente en infecciones
potencialmente mortales o cuando órganos y funciones cruciales, como la
CONTRIBUCIONES DE AUTOR
vista, están en riesgo. Se realizarán más esfuerzos de investigación para
WF y AL contribuyeron a la concepción y diseño del estudio. WF escribió el
refinar y optimizar los ensayos basados en MALDI-TOF MS para obtener
primer borrador del manuscrito. Todos los autores contribuyeron a la revisión
resultados precisos y confiables en el menor tiempo posible. Un enfoque
del manuscrito, leyeron y aprobaron la versión enviada.
importante de la investigación futura en este campo será lograr la
estandarización de los métodos y las pruebas simultáneas de susceptibilidad

de los microbios a varias clases de antimicrobianos, debido a la gran cantidad

de microorganismos resistentes a múltiples fármacos. Hasta el momento, FONDOS
solo se han autorizado en Europa dos kits comercialmente disponibles con
software para la interpretación automatizada de espectros para detectar Esta investigación fue apoyada por la beca PRIN 2017 prot.
actividad de carbapenemasas o resistencia a cefalosporinas de 3.ª generación 20177J5Y3P del Ministerio italiano de Educación, Universidad e Investigación
en laboratorios de microbiología clínica. (MIUR).

En conclusión, la posibilidad de detectar picos asociados con la EXPRESIONES DE GRATITUD

farmacorresistencia directamente en los espectros de masas MALDI-TOF de
aislados microbianos proporciona información temprana, útil, aunque Los autores desean dedicar este trabajo a WF, que falleció durante la
limitada, que puede ayudar a los médicos a simplificar la investigación empírica. finalización del manuscrito.

REFERENCIAS endoftalmitis infecciosa: un estudio retrospectivo de 10 años. Arco Graefes. clin.

Exp. Oftalmol. 257, 805–813. doi: 10.1007/s00417-019-04261-x Correa-

Akyar, I., Kaya Ayas, M. y Karatuna, O. (2019). Evaluación del rendimiento Martinez, CL, Idelevich, EA, Sparbier, K., Kostrzewa, M. y Becker, K. (2019). Detección

de MALDI-TOF MS MBT STAR-BL frente a las pruebas internas de carba rápida de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y betalactamasas AmpC en

NP para la detección rápida de actividad de carbapenemasas en cepas Enterobacterales: desarrollo de un panel de detección utilizando el ensayo de

de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae. Microbio. Resistencia a las
drogas. 25, 985–990. doi: 10.1089/mdr.2018.0355
Barnini, S., Ghelardi, E., Brucculeri, V., Morici, P. y Lupetti, A. (2015).
Identificación rápida y fiable de bacterias gramnegativas y cocos
grampositivos mediante el depósito de bacterias extraídas de hemocultivos
en la placa MALDI-TOF. BMC Microbiol. 15:124. doi: 10.1186/s12866-015-0459-8
crecimiento de microgotas directo sobre el objetivo basado en MALDI-TOF MS. Frente.
Microbiol. 10:13. doi: 10.3389/fmicb.2019. 00013
Demirev, PA, Hagan, NS, Antoine, MD, Lin, JS y Feldman, AB (2013).
Establecimiento de resistencia a fármacos en microorganismos por espectrometría de masas. Mermelada.
Soc. Espectro de masas. 24, 1194–1201. doi: 10.1007/s13361-013-0609-x

Burckhardt, I. y Zimmermann, S. (2011). Uso de espectrometría de masas de Ferreira, L., Sanchez-Juanes, F., Porras-Guerra, I., Garcia-Garcia, MI, Garcia Sanchez, JE,

tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz para
detectar la resistencia a los carbapenémicos en 1 a 2,5 horas. J. Clin.
Microbiol. 49, 3321–3324. doi: 10.1128/JCM.00287-11
Cabrolier, N., Sauget, M., Bertrand, X. y Hocquet, D. (2015). La espectrometría
de masas de ionización por desorción láser asistida por matriz identifica
clones de alto riesgo de Pseudomonas aeruginosa. J. Clin. Microbiol. 53,
1395–1398. doi: 10.1128/JCM.00210-15
Ceyssens, PJ, Soetaert, K., Timke, M., Van Den Bossche, A., Sparbier, K., De
Cremer, K., et al. (2017). Espectrometría de masas de tiempo de vuelo de
Gonzalez-Buitrago, JM, et al. (2011). Identificación directa de microorganismos a partir
de hemocultivos mediante espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/
ionización láser asistida por matriz. clin. Microbiol. Infectar. 17, 546–551. doi: 10.1111/
j.1469-0691.2010.03257.x Florio, W., Tavanti, A., Barnini, S., Ghelardi, E. y Lupetti, A.
(2018a).
Avances recientes y desafíos actuales en el diagnóstico de infecciones microbianas
por espectrometría de masas MALDI-TOF. Frente. Microbiol. 9:1097. doi: 10.3389/
fmicb.2018.01097
Florio, W., Tavanti, A., Ghelardi, E. y Lupetti, A. (2018b). Aplicaciones de MALDI-TOF MS a

ionización por desorción láser asistida por matriz para la identificación la detección de resistencias antifúngicas: estado del arte y perspectivas de futuro.

combinada de especies y pruebas de sensibilidad a fármacos en micobacterias.
J. Clin. Microbiol. 55, 624–634. doi: 10.1128/JCM.02089-16
Chang, KC, Chung, CY, Yeh, CH, Hsu, KH, Chin, YC, Huang, S.
S., et al. (2018). Detección directa de proteínas asociadas a carbapenemasas de
Acinetobacter baumannii utilizando nanodiamantes junto con espectrometría de masas
de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz. J. Microbiol.
Métodos 147, 36–42. doi: 10.1016/j.mimet.2018.02.014
Chatterjee, SS, Chen, L., Joo, HS, Cheung, GY, Kreiswirth, BN y Otto, M. (2011). Distribución
y regulación de la modulina PSM-mec soluble en fenol codificada por el elemento
genético móvil en Staphylococcus aureus resistente a la meticilina. PLoS ONE 6:e28781.
doi: 10.1371/journal.pone.0028781 Choi, EY, Han, JY, Lee, H., Lee, SC, Koh, HJ, Kim, SS,
et al. (2019). Impacto de la resistencia antibiótica de patógenos y vitrectomía temprana en
el pronóstico de
Frente. Microbiol. 9:2577. doi: 10.3389/fmicb.2018.02577 Gaibani, P., Galea, A., Fagioni,
M., Ambretti, S., Sambri, V. y Landini, MP
(2016). Evaluación de espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización por
desorción láser asistida por matriz para la identificación de Klebsiella pneumoniae productora de KPC.
J. Clin. Microbiol. 54, 2609–2613. doi: 10.1128/JCM.01242-16
Hrabak, J., Walkova, R., Studentova, V., Chudackova, E. y Bergerova, T.
(2011). Detección de actividad de carbapenemasas mediante espectrometría de masas
de tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz. J. Clin.
Microbiol. 49, 3222–3227. doi: 10.1128/JCM.00984-11
Idelevich, EA, Sparbier, K., Kostrzewa, M. y Becker, K. (2018a). Detección rápida de la
resistencia a los antibióticos mediante espectrometría de masas MALDI-TOF
mediante un nuevo ensayo de crecimiento de microgotas directo sobre el objetivo.
clin. Microbiol. Infectar. 24, 738–743. doi: 10.1016/j.cmi.2017.10.016

Fronteras en microbiología celular y de infecciones | www.frontiersin.org 6 noviembre 2020 | Volumen 10 | Artículo 572909
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Florio et al.
Idelevich, EA, Storck, LM, Sparbier, K., Drews, O., Kostrzewa, M. y Becker, K. (2018b).
Pruebas rápidas de susceptibilidad directa a partir de hemocultivos positivos
mediante el ensayo de crecimiento de microgotas directo sobre el objetivo basado 10.1099/jmm.0.031336-0 Oviano, M., Gato, E. y Bou, G. (2020). Detección rápida
en espectrometría de masas de tiempo de vuelo por ionización por desorción láser asistida por
Microbiol. 56, e00913–18. doi: 10.1128/JCM.00913-18
Johansson, A., Nagy, E. y Soki, J. (2014a). Detección y verificación instantáneas de la
actividad de carbapenemasas en Bacteroides fragilis en hemocultivos positivos,
utilizando espectrometría de masas de tiempo de vuelo con ionización por desorción láser asistida
Medicina. Microbiol. 63, 1105-1110. doi: 10.1099/jmm.0.075465-0
Johansson, A., Nagy, E., Soki, J. y ESGAI (Grupo de estudio de ESCMID sobre
infecciones anaeróbicas). (2014b). Detección de actividades de carbapenemasas
de cepas de Bacteroides fragilis con ionización por desorción láser asistida por
matriz: espectrometría de masas de tiempo de vuelo (MALDI-TOF MS). Anaerobio
26, 49–52. doi: 10.1016/j.anaerobe.2014.01.006 Jung, JS, Eberl, T., Sparbier, K.,
Lange, C., Kostrzewa, M., Schubert, S., et al. (2014a). Detección rápida de resistencia a
antibióticos basada en espectrometría de masas e isótopos estables. EUR. J. Clin.
Microbiol. Infectar. Dis. 33, 949–955. doi: 10.1007/s10096-013-2031-5
Jung, JS, Popp, C., Sparbier, K., Lange, C., Kostrzewa, M. y Schubert, S. (2014b).
Evaluación de espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización por
desorción láser asistida por matriz para la detección rápida de resistencia a
betalactámicos en enterobacterias derivadas de hemocultivos. J. Clin. Microbiol.
52, 924–930. doi: 10.1128/JCM.02691-13
Justesen, EE. UU., Acar, Z., Sydenham, TV y Johansson, A. (2018). Prueba de
susceptibilidad a los antimicrobianos de Bacteroides fragilis utilizando el ensayo
rápido de prueba de susceptibilidad a los antibióticos del biotipo MALDI (MBT-
ASTRA). Anaerobio 54, 236–239. doi: 10.1016/j.anaerobe.2018.02.007 Lange, C.,
Schubert, S., Jung, J., Kostrzewa, M. y Sparbier, K. (2014).
Espectrometría de masas de ionización por desorción láser cuantitativa asistida
por matriz para la detección rápida de resistencias. J. Clin. Microbiol. 52, 4155–
4162. doi: 10.1128/JCM.01872-14
Lau, AF, Wang, H., Weingarten, RA, Drake, SK, Suffredini, AF, Garfield, MK, et al.
(2014). Un método rápido basado en espectrometría de masas de ionización por
desorción láser asistida por matriz para el seguimiento de un solo plásmido en un
brote de Enterobacteriaceae resistentes a los carbapenémicos. J. Clin. Microbiol.
52, 2804–2812. doi: 10.1128/JCM.00694-14
Leung, LM, Fondrie, WE, Doi, Y., Johnson, JK, Strickland, DK, Ernst, RK, et al. (2017).
Identificación de los patógenos ESKAPE mediante análisis espectrométrico de
masas de glicolípidos de membrana microbiana. ciencia Rep. 7:6403. doi: 10.1038/
s41598-017-04793-4
Li, M., Liu, M., Song, Q., Xiong, L., Chen, Z., Kang, M., et al. (2018).
Pruebas rápidas de susceptibilidad antimicrobiana mediante espectrometría de
masas de tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz
utilizando un método cualitativo en el complejo Acinetobacter baumannii. J. Microbiol.
Métodos 153, 60–65. doi: 10.1016/j.mimet.2018.09.002 Liang, T., Leung, LM, Opene,
B., Fondrie, WE, Lee, YI, Chandler, CE, et al.
(2019). Identificación microbiana rápida y detección de resistencia a antibióticos
mediante análisis espectrométrico de masas de lípidos de membrana. Anal. química
91, 1286–1294. doi: 10.1021/acs.analchem.8b02611
Marinach, C., Alanio, A., Palous, M., Kwasek, S., Fekkar, A., Brossas, J.-Y., et al. (2009).
Pruebas de susceptibilidad a fármacos basadas en MALDI-TOF MS de patógenos:
el ejemplo de Candida albicans y fluconazol. Proteómica 9, 4627–4631. doi: 10.1002/
pmic.200900152
Mulet, X., García, R., Gaya, M. y Oliver, A. (2019). La serotipificación del antígeno O y
MALDI-TOF, herramientas potencialmente útiles para optimizar tratamientos
semiempíricos antipseudomonas mediante la detección temprana de clones de alto
riesgo. EUR. J. Clin. Microbiol. Infectar. Dis. 38, 541–544. doi: 10.1007/s10096-018-03457-
z Nagy, E., Becker, S., Soki, J., Urban, E. y Kostrzewa, M. (2011). Diferenciación de la
división I (cfiA-negativa) y la división II (cfiA-positiva) Bacteroides fragilis
Fronteras en microbiología celular y de infecciones | www.frontiersin.org
AST por MALDI-TOF MS
cepas por espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/
ionización láser asistida por matriz. J.Med. Microbiol. 60, 1584–1590. doi:
dematriz. J. Clin.
enterobacterales productores de KPC susceptibles a imipenem/relebactam
mediante el ensayo MALDI-TOF MS MBT STAR-carba IVD. Frente. Microbiol.
11:328. doi: 10.3389/fmicb.2020.00328
Oviano, M., Sparbier, K., Barba, MJ, Kostrzewa, M. y Bou, G. (2016).
Protocolo
universal
por matriz. j para la detección automatizada rápida de bacilos gramnegativos
resistentes a carbapenem directamente de hemocultivos mediante espectrometría
de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI-TOF/MS).
En t. J. Antimicrobiano. Agentes 48, 655–660. doi: 10.1016/j.ijantimicag.2016.08.024
Palacios-Baena, ZR, Gutierrez-Gutierrez, B., De Cueto, M., Viale, P., Venditti, M.,
Hernandez-Torres, A., et al. (2017). Desarrollo y validación de la puntuación
predictiva de mortalidad INCREMENT-ESBL en pacientes con infecciones del
torrente sanguíneo debidas a Enterobacteriaceae productoras de betalactamasas
de espectro extendido. J. Antimicrobiano. Quimioterapia. 72, 906–913. doi: 10.1093/
jac/dkw513 Rhoads, DD, Wang, H., Karichu, J. y Richter, SS (2016). La presencia
de un único pico espectral de masas MALDI-TOF predice la resistencia a la meticilina
en los estafilococos. Diagnóstico Microbiol. Infectar. Dis. 86, 257–261. doi: 10.1016/
j.diagmicrobio.2016.08.001
Sauget, M., Bertrand, X. y Hocquet, D. (2018). Pruebas rápidas de susceptibilidad a los
antibióticos en hemocultivos utilizando MALDI-TOF MS. PLoS UNO 13:e0205603. doi:
10.1371/journal.pone.0205603 Schuster, D., Josten, M., Janssen, K., Bodenstein, I.,
Albert, C., Schallenberg, A., et al. (2018). Detección de estafilococos coagulasa negativos
resistentes a la meticilina que albergan el complejo mec de clase A mediante
espectrometría de masas MALDI TOF. En t. J.Med. Microbiol. 308, 522–526. doi:
10.1016/j.ijmm.2018.05.001 Sparbier, K., Lange, C., Jung, J., Wieser, A., Schubert, S.
y Kostrzewa, M. (2013). Detección rápida de resistencias basada en biotipos MALDI
mediante marcaje con isótopos estables. J. Clin. Microbiol. 51, 3741–3748. doi: 10.1128/
JCM. 01536-13
Sparbier, K., Schubert, S. y Kostrzewa, M. (2016). MBT-ASTRA: ¿una herramienta
adecuada para la prueba rápida de susceptibilidad a los antibióticos? Métodos 104,
48–54. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.01.008 Tanaka, T., Oliveira, LMF, Ferreira, BFA, Kato,
JM, Rossi, F., Correa, KLG, et al. (2017). Frascos de hemocultivo Bactec aliados a la
espectrometría de masas MALDI-TOF: diagnóstico etiológico rápido de la endoftalmitis
bacteriana.
Diagnóstico Microbiol. Infectar. Dis. 88, 222–224. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2017.
04.008
Tsirouki, T., Dastiridou, AI, Ibanez Flores, N., Cerpa, JC, Moschos, MM, Brazitikos, P.,
et al. (2018). Celulitis orbitaria. sobrev. Oftalmol. 63, 534–553. doi: 10.1016/
j.survophthal.2017.12.001 Wang, YR, Chen, Q., Cui, SH y Li, FQ (2013).
Caracterización de Staphylococcus aureus aislado de muestras clínicas mediante
espectrometría de masas de tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida
por matriz. biomedicina Reinar. ciencia 26, 430–436. doi: 10.3967/0895-3988.2013.06.003
Conflicto de intereses: los autores declaran que la investigación se realizó en ausencia
de relaciones comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un posible
conflicto de intereses.
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7 noviembre 2020 | Volumen 10 | Artículo 572909