Esterilización - Parte 3 - 2021

Esterilización Parte 3
Daniel Ferrari
dferrari@fing.edu.uy
IIQ – Dpto. Bioingeniería Ingeniería Bioquímica 2021-05-17 1

Temario
1. Esterilización de aire: Introducción

2. Usos del aire
3. Características de los microorganismos del aire
4. Métodos de esterilización de aire
5. Esterilización por filtración
6. Eficiencia de un filtro
7. Tipos de filtros
8. Criterios de diseño de un sistema de filtración
9. Pruebas de control y validación de un filtro
10. Esterilización de equipos

1. Esterilización de aire: Introducción
◼ La mayoría de los bioprocesos de obtención de productos de alto valor
agregado que usan células vivas usados son aerobios.
◼ La cantidad de aire estéril a suministrar en los bioprocesos aerobios
usualmente es muy grande.
◼ En bioprocesos aerobios el rango más frecuente de flujo de aire
es 0,5 a 1 vvm (volumen de aire por volumen de medio de cultivo
por minuto).
◼ Una planta que tenga 500 m3 de volumen útil de fermentación
debería disponer de 250.000 a 500.000 litros de aire estéril por
minuto.
◼ El objetivo práctico es reducir el pasaje de microorganismos a través del

aire suministrado, a un nivel que no se tenga riesgos inaceptables.

Esterilización de aire: Introducción
◼ También se esterilizan gases que egresan de los sistemas tanto para

preservar áreas “estériles” o “limpias” como por razones de seguridad
para la salud y el ambiente.
Ejemplos:
Gases que egresan durante la fermentación, por venteos ocasionados en
alivios de presión, por cambios de volumen de líquido, etc.
◼ Se puede requerir esterilizar otros gases como oxígeno, dióxido de

carbono, nitrógeno e incluso vapor de agua.

2. Usos de aire
◼ Fuente de oxígeno
◼ Agitación
◼ Transferencia aséptica o estéril de líquidos
◼ Enfriamiento

3. Características de los microorganismo del aire
Factores a considerar
◼ Tamaño de los microorganismos

◼ Concentración de microorganismos en el aire.

Características de los microorganismo del aire: tamaño
Tamaño de los microorganismos

◼ Los microorganismos generalmente están generalmente adsorbidos
sobre partículas de polvo.
◼ En una partícula de polvo puede haber varios microorganismos.
◼ Importa conocer la distribución de tamaño de partículas.

Características de los microorganismo del aire: tamaño
Tamaño de microorganismos pequeños

encontrados en la superficie de filtros
Microorganismo Largo x ancho (µm x µm)
Ancho, m Largo, m
Células vegetativas 0,5 – 2 1 – 10
Esporas 0,5 – 1 1–2
Herb Lutz, Randy Wilkins, and Christina Carbrello (2013). Sterile Filtration: Principles, Best Practices and New Developments.
Características de los microorganismo del aire: concentración
Concentración de microorganismos en el aire

◼ El nivel de microorganismos en el aire es muy variable.
◼ Depende de si se trata de un ambiente interno o externo.
◼ Depende de la localidad, clima, hora del día, estación, día de la semana,
humedad relativa, polución, etc.
◼ Actividades o uso de la zona: industrial, residencial, turística,
comercial, etc.
Rango de valores típicos de microorganismos en el aire:

 103 a 104 partículas por metro cúbico.

Valores de concentración de microorganismos en el aire

Lugar Células o partículas/m3 Fuente
Ciudad (Tokio) 1,2x104 Aiba
Ciudad (Londres) (6 – 9)x103 Gaden
Ciudad (San Pablo) (4 – 6)x103 Torloni
Zona costera de Qingdao, China (0,5 – 1,2)x105 Jing Gong et al (2020). Environmental Pollution 257, 1134852
Cafetería 1,5x103
Laboratorio 1,7x103
Sala de hospital 500
Escuela de Ingeniería Bioquímica. Valparaíso
Establo 105
Área metropolitana (3 – 10)x103
Área industrial (1 – 5)x103
Área rural 200 Pelczar y otros, 4 ed.

Medición del nivel de microorganismos en el aire
◼ Conocer el nivel de contaminación del aire

¿Para qué es captado de modo de definir el nivel requerido de
necesario medir remoción de microorganismos
el nivel de ◼ Control de ambiente (áreas asépticas, áreas
microorganismos estériles)
en el aire?
◼ Control del sistema de esterilización de aire.

◼ Existen varios métodos para medir la concentración de microorganismos

en aire, que varían según la forma de captación, la velocidad y
características del flujo usado y la eficiencia de recolección.
◼ Se pasa un volumen dado de aire (flujo x tiempo de pasaje) sobre un
líquido (solución buffer), un filtro o una superficie con agar.
◼ Se determina cantidad captada de microorganismos por cultivo en placa
y posterior recuento.
◼ Puede interesar realizar la identificación de los microorganismos
retenidos y evaluar si son patógenos. Si se recogen sobre una membrana
se puede medir tamaño de microorganismos.

Muestreadores Muestreadores
tipo “impinger” de placa
El aire pasa a través El aire impacta sobre una

de un líquido superficie con agar
4. Métodos de esterilización de aire
◼ Filtración
Método más usado.
◼ Calor
Se pasa aire por resistencia eléctrica.
Bajo tiempo de exposición, requiere altas temperaturas, 200 a 300°C.
◼ Incineración
Se pasa aire por llama directa.
Usado para matar microorganismos patógenos.
◼ Radiaciones (ultravioleta, gama)
Poco efectivo para aire a introducir en fermentadores.
Uso frecuente para aire ambiental y de componentes menores o auxiliares
(salas, tuberías, etc.).
◼ Spray de biocidas
Uso para bajar carga microbiana.
5. Esterilización por filtración
Diagrama simplificado de un sistema de filtración
Principales componentes
M1
V1 V2
Aire
Compresor Enfriador Calentador
V1: válvula reductora
Compresor V2: válvula reguladora
libre de aceite V3: válvula de seguridad
o uso de filtro M: manómetros
Agua
coalescedor. R: rotámetro.
M2
R V3
Aire
estéril
Filtro Pre-filtro
6. Eficiencia de un filtro
◼ En base al número de partículas llegan y que egresan de un filtro se
definen diferentes parámetros para evaluar su eficiencia de remoción.
◼ Estos parámetros se definen a veces para diferentes tamaños de

partículas.
■ Eficiencia
■ Relación beta
■ Valor de reducción logarítmica, VRL (más conocida por su
sigla en inglés LRV, log reduction value)
■ Número de penetración

Eficiencia de un filtro
◼ Eficiencia de retención
N0 − NS
η = (30)
N0 NS N0
◼ Relación beta
N0 β −1 1
β = (31) η = = 1− (32)
NS β β
◼ Valor de reducción logarítmica

N0: número de partículas
(microorganismos) que llegan N
VRL = log ( 0 ) (33)
al filtro. NS
NS: número de partículas
◼ Número de penetración
(microorganismos) que salen
del filtro. NS
P = (34) P = 1-η (35)
N0
Eficiencia de un filtro
◼ La eficiencia de retención de un filtro depende del tipo de filtro, tipo,

tamaños y cantidad de las partículas a filtrar y de las condiciones
operativas (flujo, presión, temperatura, humedad, presencia de otros
contaminantes).
◼ Los filtros con retención absoluta retienen todas las partículas mayores
a su tamaño de poro,  es prácticamente 1 (100%).
◼ Los filtros profundos se caracterizan por un índice (“rating”) de
retención nominal obtenido por ensayos de laboratorio y es una
indicación de que tamaños de partículas serán parcialmente retenidas.
Valores típicos de : 0,999 - 0,9999.

7. Tipos de filtros
◼ Filtros profundos (de lecho fibroso)
◼ Filtros absolutos (de superficie, tipo tamiz)
Existe filtros de comportamiento intermedio

Filtros profundos
◼ Están constituidos por materiales fibrosos que producen una estructura
de canales al azar, de trayectoria tortuosa.
◼ Las fibras tienen un diámetro de 3 a 20 m.
◼ Los materiales usados son: fibra de vidrio borosilicato, celulosa,
polipropileno (PP).
◼ Pueden estar constituidos por capas de diferentes materiales y con
diferente configuración.
◼ La retención se da básicamente dentro (en la profundidad) del filtro.
Tienen alta capacidad de carga de partículas, (“dirt holding capacity”),
pueden retener gran cantidad de partículas antes que se obstruyan o la
caída de presión sea muy alta.
◼ No tienen un tamaño de poro medible, regular. Se especifican por su
desempeño para la filtración en ensayos de laboratorio.
Filtros profundos
Matriz al azar de un filtro profundo

Filtros profundos
◼ Pueden retener partículas cuyo tamaño es menor que el diámetro de los

canales, debido a que existen otros mecanismos además de la retención
mecánica, como la adsorción y el entrampamiento.
◼ Un filtro de poro nominal de 3 m puede tener una eficiencia de
retención del 99.9 - 99.99% para partículas de ese diámetro, pero también
puede retener partículas de menor tamaño, aunque con menor eficiencia.
◼ Su desempeño es relativamente dependiente de las condiciones de
operación.
◼ La presencia de agua dentro del lecho puede favorecer el crecimiento
microbiano.
◼ Puede haber migración (“sangrado”) de medio filtrante.
◼ Los filtros profundos son usados como “prefiltros” de filtros absolutos:
protegen a los filtros esterilizantes.

Filtros profundos
Eficiencia de retención de un filtro

de poro nominal de 3 m
Fotomicrografía y esquema de lecho fibroso

Filtros profundos
Sartorius Stedim Biotech

Filtros absolutos
◼ Se denominan modernamente de membrana, debido a al tipo de material
filtrante usado mayoritariamente.
◼ Están formados por una matriz porosa, de tamaño muy regular.
◼ Distribución de poro estimada: ± 0,02 µm alrededor del tamaño de poro
nominal.
◼ Materiales usados: membranas poliméricas de ésteres de celulosa, PTFE
(Teflon®), polietileno (PE), cloruro de polivinilo (PVC), acero inoxidable
(metales sinterizados).
◼ El mecanismos de retención es por tamaño, como un tamiz, la retención
se da básicamente en la superficie.

Filtros absolutos
◼ Tienen un eficiencia de retención absoluta y baja capacidad de carga de

partícula (“dirt holding capacity”). Requieren un pre-filtro para su
protección.
◼ Son los filtros generalmente usados para la esterilización de gases.
◼ Tamaños de poro usados 0,1 - 0,45 m, valor típico 0,2 m.
◼ Se esterilizan con vapor u óxido de etileno (ETO).
◼ Su eficiencia no depende del flujo de aire o de la presión.
◼ El agua obstruye los poros por lo que se usa aire seco y se prefieren
materiales filtrantes hidrófobos (que no se “mojan”), como el PTFE.

Filtros absolutos
Fotomicrografía y esquema de un filtro absoluto
Staphyllococcus aureus retenido sobre la

superficie de una membrana de 0,45 µm
Herb Lutz, Randy Wilkins, and Christina Carbrello, 2013.

Filtros absolutos

Configuraciones de filtros
◼ Los filtros se presentan bajo la forma de discos o cartuchos.
◼ Los filtros de disco presentan poca área de filtración. Son útiles para la esterilización de
pequeños volúmenes de aire.
◼ Los filtros de cartucho, son cilíndricos, usan el área lateral para filtración, la dirección de
filtración es radial, de afuera hacia adentro. Presentan alta área de filtración por unidad
de volumen. Pueden montarse varios cartuchos en una misma carcasa. Es posible la
limpieza o remplazo de cartuchos sin desmontar toda la línea.
◼ El material filtrante se pliega para aumentar el área de filtrado.
◼ Las membranas filtrantes pueden tener una capa de material fibroso (por ejemplo fibra
de vidrio con resina acrílica como ligante) como “prefiltro”.
◼ Algunos filtros profundos pueden estar constituidos por varias capas (“estructura
multicapa”), de estructura cada vez más compacta (más fina) en la dirección de la
filtración, lo que aumenta la eficiencia y la vida útil del filtro.
Extractados de catálogos Millipore, Sartorius, Parker y Pall.

Multi-capa Plegados

Entrada
Pasaje del aire

Cartuchos
Salida

Carcasas y
otros
componentes

8. Criterios de diseño de un sistema de filtración
Lista de aspectos parámetros a tener en cuenta
◼ Caudal de aire.
◼ Concentración de microorganismos.
◼ Tamaño de partículas o microorganismos contaminantes (distribución).
◼ Calidad del aire comprimido distribuido (contenido de otros contaminantes tales como
herrumbre, hidrocarburos, aceite lubricante, vapor de agua, etc.).
◼ Eficiencia de retención requerida (nivel de remoción requerido).
◼ Período de operación continua: tiempo que dura una fermentación batch o una
fermentación continua.
◼ Volumen de aire que puede ser esterilizado antes que el filtro se tape o la caída de
presión sea inadmisible.
◼ Capacidad de carga de partículas (“dirt-holding capacity”).
◼ Condiciones de operación (temperatura, presión, etc).
◼ Compatibilidad con el material o materiales de construcción.
Escalado de filtros: criterios
◼ Filtros absolutos
Relación entre el área efectiva de filtración y el volumen o caudal de aire
a filtrar.
◼ Filtros profundos
Relación entre el volumen de lecho filtrante (área efectiva de filtración x
espesor) y el volumen o caudal de aire a filtrar.

Escalado de filtros: criterios
◼ Debido a que no siempre es posible obtener información cuantitativa

confiable sobre la carga de partículas, el filtro puede elegirse a partir de
ensayos de filtrabilidad a escala de banco (piloto).
◼ Para filtros absolutos se tiene:

Vi
Ai = Ae  f (36)
Ve
FG i
Ai = Ae  f (37)
FG e
A: área efectiva de filtración

V: volumen de aire a filtrar
FG: caudal del aire (gas).
f: factor de seguridad (generalmente 1,2).
Subíndices: i escala industrial, e escala experimental (piloto).
9. Pruebas de control y validación de un filtro
◼ Pruebas de eficiencia de retención
◼ Con partículas inertes
◼ Con partículas microbianas.
◼ Pruebas de integridad
◼ Pruebas de validación para la aplicación

◼ Son requisitos legales, de buenas prácticas o exigencias comerciales
◼ Implican ensayos de retención microbiana, de integridad y de
compatibilidad química de materiales con el medio de cultivo (incluye
contacto directo y sustancias extraíbles).

Pruebas de integridad de un filtro
◼ Son ensayos no destructivos.
◼ Son aplicables solo a filtros absolutos (de membrana).
◼ Pueden ser realizadas in situ, como control.
◼ Pueden ser correlacionadas con la eficiencia de retención de
microorganismos.
◼ Se basan en propiedades de líquidos.
◼ Existen sistemas de medición automatizados in situ integrados al propio
sistema de filtración.
◼ Se realizan antes de usar e inmediatamente luego para asegurar que el
filtro cumple con el propósito de esterilización.

Pruebas de integridad de un filtro
◼ Métodos más usados para verificar integridad de filtros esterilizantes:

◼ Prueba de punto burbuja
◼ Ensayo de difusión basado en la ley de Fick
◼ Ensayo de intrusión de agua (WIT) o prueba de integridad de flujo de
agua, aplicable a membranas hidrofóbicas.

Ejemplo: prueba de punto burbuja
◼ Se basa en la resistencia que ofrece un líquido retenido en un poro a ser
desplazado, debido a fuerzas de capilaridad y de tensión superficial.
◼ La mínima presión requerida para desplazar un líquido dado de los
poros de un filtro, detectable por burbujas que suben a través de una
columna de agua, se denomina presión del punto burbuja (bubble point).

Prueba de punto burbuja
La presión del punto burbuja es una medida del tamaño máximo del poro
del filtro.
(Método ASTM F316 – 03 (2019))
K 4 σ cos ϴ (38)
d P =
d
P: presión del punto burbuja
σ: tensión superficial del líquido
d: diámetro del poro
ϴ: ángulo de contacto entre líquido y sólido
K: factor de corrección geométrico
cos θ = 1 en filtros

Punto
burbuja
alcanzado
Presión especificada

Flujo de gas
Flujo seco
Flujo “húmedo”
Presión
Presión del
punto burbuja

◼ Se utilizan como líquidos para humedecer la membrana: etanol, ter-

butanol (TBA), iso-propanol (IP) o mezclas de ellos en agua, los cuales
se evaporan con facilidad y no dejan residuos.
◼ El valor del punto burbuja depende del líquido usado y de la
temperatura.
◼ El valor del punto burbuja es provisto por cada fabricante.
◼ Se humedece la membrana con el líquido. Se pasa aire incrementando la
presión. Se mide la presión cuando se observa el burbujeo del aire en
una columna de agua, indicando que el líquido ha sido desplazado.
◼ Un valor de punto burbuja menor al especificado (no pasa la prueba) es
una indicación de que existen poros más grandes de lo esperado y/o
roturas en sellos, existen problemas en la integridad del filtro.

Medida de punto burbuja en cartuchos y filtros pequeños

Variación del punto burbuja con la temperatura para un filtro hidrofóbico de 0,2 µm

Pruebas de eficiencia de retención de partículas
Ensayos sin microorganismos
(“particle challenge tests”)
◼ Usan aerosoles.
◼ Materiales usados: aceite (ensayo DOP, drop oil particulate), solución de
cloruro de sodio, etc.
◼ Son ensayos no destructivos.
◼ Pueden implementarse en planta.
◼ Pueden ser correlacionados con la eficiencia de retención de
microorganismos.

Ensayos con microorganismos

(“microbial challenge tests”)
◼ Microorganismos más frecuentes: Brevundimonas (Pseudomonas)
diminuta (ATCC 19146), Serratia marcescens (ATCC 14756), Bacillus
subtilis (esporas), bacteriófago  X-174
◼ Se consideran ensayos destructivos.
◼ Generalmente son realizados por el fabricante.
◼ Ensayos exigidos por las buenas prácticas de fabricación (GPM).
◼ Existe método ASTM F838 – 20, usando Brevundimonas diminuta para
medio líquido.
◼ El filtro a ensayar se somete a una población mínima de 107 bacterias
viables por cm2 de área efectiva de filtración.
◼ Criterio de aceptación: VRL > 7
Diagrama de la prueba de ensayo con microorganismos

Eficiencia de retención de microorganismos para la bacteria Brevundimonas diminuta en

medio líquido usando filtros de membrana de uso común en microbiología

10. Esterilización de equipos
 Inóculo
 Medio de cultivo
 Aire
Puntos a atender  Equipo
 Operación
 Condiciones operativas
 Diseño

Infraestructura e insumos típicos que requieren ser esterilizados
Material, equipo o producto que debe ser esterilizado Tipo Estado físico
Biorreactores Equipo permanente Sólido
Esterilizadores Equipo permanente Sólido
Tanques de almacenamiento Equipo permanente Sólido
Equipos auxiliares (cañerías, centrífugas, filtros, intercambiadores, etc.) Equipo permanente Sólido
Salas estériles Equipo permanente -
Equipamiento para trabajo de microbiología Equipo permanente o descartable Sólido
Jeringas, viales, filtros menores Suministro descartable Sólido
Ropa de salas estériles Suministro descartable Sólido
Medios de fermentación Nutriente Líquido/sólido
Soluciones de nutrientes Nutriente Líquido
Nutrientes (grasas, vitaminas, etc) Nutriente Líquido/sólido
Productos que se adicionan (ácido, base, antiespumente, etc.) Productos Líquido/sólido
Agua de proceso, otros usos Suministro Liquido
Aire para fermentación Suministro Gas
Aire de sala estéril, de flujo laminar, para enfriamiento, arrastre, etc. Suministro Gas
Otros gases (nitrógeno) Suministro Gas
Esterilización de equipos por vapor
◼ Para la esterilización de equipos se usa generalmente vapor saturado,
generalmente a 1 kg/cm2 (manométrico), 121°C, durante un mínimo de 20
minutos, luego de haber purgado el aire.
◼ Si la temperatura de esterilización se controla mediante la presión, se
debe verificar el purgado del aire. La presencia de aire baja
drásticamente la temperatura de esterilización.
◼ Se debe asegurar que las condiciones de esterilización (temperatura y
tiempo) se alcanzan en todos los puntos del sistema (fermentador,
cañería, accesorios, etc.).
◼ Se debe asegurar la eliminación del aire en las zonas ciegas o muertas,
donde el vapor no fluye fácilmente. Ejemplo cabezales o partes
convexas superiores.
◼ Para componentes que no soportan altas temperaturas se puede usar un
agente químico como el óxido de etileno. Ejemplo: cartuchos de filtros.
Esterilización de equipos
Efecto de la presencia de aire no purgado sobre la temperatura de ebullición del agua

para diferentes presiones manométricas
Nivel de aire Presión manométrica (kg/cm2)

(% en volumen) 0 0,7 1,0 1,4 2,1
0 100 115 121 126 134
5 98 114 119 124 133
10 97 112 118 123 131
20 94 108 114 119 127
30 91 104 110 115 123
50 82 95 100 105 112
90 46 56 60 64 70
■ Valores para presión atmosférica de 1,03 kg/cm2
■ Temperaturas en °C

Esterilización de equipos
◼ En un equipo sucio, con restos de medio, grasa, sólidos, pegotes,

costras es más difícil de esterilizar, ya que dicha suciedad protege a las
esporas del calor. Un equipo debería estar limpio antes de ser
esterilizado. Como buena práctica de orden y limpieza, un equipo
debería er lavado, o por lo menos enjuagado inmediatamente luego de
su uso.
◼ Se puede verificar las condiciones de esterilización por calor usando
sensores de temperatura, tiras o cintas termosensibles o bioindicadores
(tiras o tubitos con esporas microbianas).
◼ Se debe tener en cuenta la calidad del vapor, puede dejar residuos
contaminantes, en particular iones metálicos.

Para pensar, discutir y hacer cuentas
Un fabricante de filtros ofrece un filtro de lecho fibroso que presenta un comportamiento cercano a un filtro
absoluto (tiene un comportamiento intermedio). Tiene un número de penetración P = 10-6. Se desea utilizar
para esterilizar el aire en un proceso de producción de un antibiótico usando un hongo. Se tiene la siguiente
información del bioproceso: volumen útil del biorreactor = 20 m3; tiempo de fermentación = 2 días; nivel de
aireación = 0,5 VVM; concentración de microorganismos en el aire = 103 microorganismos/m3.. Se pide: a)
Evaluar y discutir si el filtro ofrece un nivel de remoción razonable, b) Idem pero se usan dos filtros en serie.
Un fabricante reporta para un filtro de membrana un VRL > 11. Se desea usarlo en un bioproceso que dura 24
horas y que requiere un caudal de aire de 100 m3/h. La concentración de microorganismos en el aire es 103
microorganismos/m3. Se pide calcular el mayor nivel de NS esperable. Discutir el valor obtenido.
En una planta se instala un filtro absoluto. Se realiza la prueba de punto burbuja. No pasa la prueba. Se pide
una lista de posibles razones (tipo “troubleshooting guide”).

Para seguir...
Analicemos y discutamos (A&D). ¿Falso o verdadero?
a. La desinfección es un proceso que usa un agente químico o físico que puede ser usado para esterilizar un
biorreactor.
b. Al aumentar la temperatura de exposición, la velocidad de muerte térmica de esporas aumenta más que la
velocidad de destrucción de nutrientes.
c. En un típico ciclo de esterilización por lotes en el cual la temperatura del medio aumenta de 60°C a 120°C,
la constante cinética de muerte térmica de esporas bacterianas aumenta generalmente cerca de 1000
veces su valor.
d. Se puede saber si un medio de cultivo quedó correctamente esterilizado, realizando ensayos
microbiológicos y/o bioquímicos.
e. En un esterilizador continuo es posible alcanzar el nivel requerido de eliminación de microorganismos
aunque no se opere en régimen turbulento.
f. La prueba del punto burbuja es una prueba no destructiva que permite evaluar la integridad de los filtros
usados en una línea de esterilización de aire.

Y seguir...
Analicemos y discutamos (A&D). ¿Falso o verdadero?
g. En la esterilización de medios de cultivos por filtración, el filtro no necesita generalmente esterilizarse
previamente si se usa un tamaño de poro adecuado, por ejemplo de 0,22 µm.
h. Para saber si un medio líquido esterilizado por filtración quedó bien esterilizado, conviene incubarlo a
37°C, antes de realizar un prueba de esterilidad.
i. Generalmente, no es necesario filtrar la corriente de aire que sale de un biorreactor porque generalmente
tiene una concentración de microorganismos muy inferior a la concentración habitual del aire.
j. En un esterilizador batch, luego de la fase de mantenimiento, generalmente se deja que el medio se enfríe
en forma natural, de modo de asegurar la remoción de los microorganismos presentes
k. Los filtros que se usan para filtrar el aire en bioprocesos de la industria biotecnológica, se validan usando
métodos que usan aerosoles con partículas formadas por gotitas de aceite o de solución de cloruro de
sodio.

Algo más ...
Analicemos y discutamos (A&D)
a. En un bioproceso se usa un biorreactor tipo tanque agitado. ¿Qué es preferible, esterilizar por calor el
biorreactor junto con el medio de cultivo o esterilizarlos por separado?
b. Analizar la situación anterior si el biorreactor es un air-lift.
c. ¿Qué dificultades puede presentar la esterilización por calor de un medio a base de melaza?
d. ¿Qué dificultades puede presentar la esterilización de un medio que tiene componentes sólidos (en forma
de polvo o harina) que no se han disuelto completamente?
e. Para verificar esterilidad de un equipo uno de los métodos usados son las tiras con esporas (spore
strips). ¿Qué criterios usaría para elegir el lugar a colocar dicha tiras en un equipo que se requiere
esterilizar?.
f. ¿Qué criterios utilizarías para elegir un microorganismo para un ensayo de desempeño de un filtro
absoluto (“microbial challenge test”).

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Esterilización Parte 3

IIQ – Dpto. Bioingeniería Ingeniería Bioquímica 2021-05-17 1

1. Esterilización de aire: Introducción

IIQ – Dpto. Bioingeniería Ingeniería Bioquímica 2021-05-17 2

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◼ También se esterilizan gases que egresan de los sistemas tanto para

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Tamaño de microorganismos pequeños

Concentración de microorganismos en el aire

Rango de valores típicos de microorganismos en el aire:

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Valores de concentración de microorganismos en el aire

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Medición del nivel de microorganismos en el aire

◼ Conocer el nivel de contaminación del aire

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El aire pasa a través El aire impacta sobre una

◼ Estos parámetros se definen a veces para diferentes tamaños de

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◼ La eficiencia de retención de un filtro depende del tipo de filtro, tipo,

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Existe filtros de comportamiento intermedio

IIQ – Dpto. Bioingeniería Ingeniería Bioquímica 2021-05-17 19

Matriz al azar de un filtro profundo

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◼ Pueden retener partículas cuyo tamaño es menor que el diámetro de los

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Eficiencia de retención de un filtro

Fotomicrografía y esquema de lecho fibroso

Sartorius Stedim Biotech

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◼ Tienen un eficiencia de retención absoluta y baja capacidad de carga de

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Fotomicrografía y esquema de un filtro absoluto

Staphyllococcus aureus retenido sobre la

IIQ – Dpto. Bioingeniería Ingeniería Bioquímica 2021-05-17 27

Sartorius Stedim Biotech

Extractados de catálogos Millipore, Sartorius, Parker y Pall.

IIQ – Dpto. Bioingeniería Ingeniería Bioquímica 2021-05-17 31

Pasaje del aire

IIQ – Dpto. Bioingeniería Ingeniería Bioquímica 2021-05-17 32

Sartorius Stedim Biotech

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◼ Debido a que no siempre es posible obtener información cuantitativa

◼ Para filtros absolutos se tiene:

A: área efectiva de filtración

◼ Pruebas de validación para la aplicación

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◼ Métodos más usados para verificar integridad de filtros esterilizantes:

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