BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL
Contenido
PROBLEMÁTICA 3
JUSTIFICACION 3
OBJETIVOS 3
Objetivo general 3
Objetivos específicos 3

Biorremediación de suelo
FUNDAMENTO TEÓRICO
Biorremediación
4
4

contaminado con grasas

ESTRATEGIAS PARA LA BIORREMEDIACIÓN DE SUELOS CONTAMINADOS
Biorremediación in situ
5
6
Bioventilación o inyección de aire 6
Biosparging 6
Biorremediación ex situ 7
Laboreo del suelo (landfarming) 7
Compostaje 7
Biopilas 7
Reactores con suelo en suspensión (slurry) 8
Lombricultura 8
LOMBRIZ ROJA CALIFORNIANA 8
Contaminantes biodegradables 9
PROCEDIMIENTOS 10
pH 10
Materiales y Equipos 10
Diagrama de flujo 11
Criterios de Evaluación 11
HUMEDAD
INTEGRANTES
12
Material y equipo 12
Diagrama de flujo Erika Dalia Guardado
13
Cálculos Enrique López Rosas
13
CENIZA Baltazar Meza Valenzuela
13
Aparatos y Equipo Ana Cecilia Rendon13
 Diagrama de flujo 14
Cálculos 14
GRASAS Y ACEITES 14
Materiales y Equipo 15
Diagrama de flujo 15
Cálculos 15
NITRÓGENO TOTAL 1
Material y equipo 1
Diagrama de Flujo 1
Cálculos 1
RESULTADOS PRELIMINARES 2
pH 2
Húmedad 2
Cenizas 3
Grasas y Aceites 4
Temperatura 4
BIBLIOGRAFIA 6

Tabla 1 Criterios de evaluación de un suelo con respecto a su pH (NOM-021-REC-NAT-2000). 11

Ilustración 1 Alimentos que puede metabolizar la lombriz 9

 PROBLEMÁTICA
En la actualidad el desarrollo de la actividad industrial o negocios de alimentos el
uso de las grasas y aceites, dichos elementos no son dispuestos de manera
adecuada en la mayoría de los casos, dando como consecuencia un daño
significativo en los suelos expuestos, los cuales pueden perder su fertilidad en el
proceso por la destrucción del humus en los mismos, así como también estas
grasas pueden filtrarse a través de él llegando a aguas subterráneas provocando
daños aún mayores.

JUSTIFICACION
La lombriz es una de las especies que pueden traer grandes beneficios a la tierra,
ya que su habilidad de metabolizar una gran cantidad de alimentos ayuda a
aumentar su producción de humus el cual tiene un gran beneficio al suelo que es
enriquecido por este producto.

Dentro de los alimentos que la lombriz puede metabolizar son las grasas y los
aceites, a los cuales proporcionándole los cuidados adecuados pueden llegar a
ser aprovechados de gran manera, razón por la cual la lombricomposta da la
oportunidad de realizar biorremediaciones de suelos contaminados por aceites o
grasas de origen animal, de esta manera disminuyendo a gran medida estos
contaminantes y regresando las propiedades originales del suelo.

OBJETIVOS
Objetivo general

Reducir las concentraciones de grasa animal en el suelo por medio de la

lombricomposta.
Objetivos específicos

❖ Monitorear parámetros necesarios para la vida de la lombriz.

❖ Aprovechar el metabolismo de la lombriz para la absorción de grasa.
❖ Determinar las concentraciones iniciales y finales del suelo contaminado.

FUNDAMENTO TEÓRICO
Biorremediación

La biorremediación es una tecnología que utiliza el potencial metabólico de los

microorganismos (fundamentalmente bacterias, pero también hongos y levaduras)
para transformar contaminantes orgánicos en compuestos más simples poco o
nada contaminantes, y, por tanto, se puede utilizar para limpiar terrenos o aguas
contaminadas. (Beltran, 2018)

Su ámbito de aplicabilidad es muy amplio, pudiendo considerarse como objeto

cada uno de los estados de la materia (Atlas, 1999):

❖ Sólido.

Con aplicaciones sobre medios contaminados como suelos o sedimentos, o bien

directamente en lodos, residuos, entre otros.

❖ Líquido.

Aguas superficiales y subterráneas, aguas residuales.

❖ Gases.

Emisiones industriales, así como productos derivados del tratamiento de aguas o

suelos.

También se puede realizar una clasificación en función de los contaminantes con

los que se puede trabajar (VELASCO, 2002):

❖ Hidrocarburos de todo tipo (alifáticos, aromáticos, BTEX, PAHs,entre otros).

❖ Hidrocarburos clorados (PCBs, TCE, PCE, pesticidas,herbicidas, entre
otros).
 ❖ Compuestos nitroaromáticos (TNT y otros).
❖ Metales pesados. Estos no se metabolizan por los microorganismos de
manera apreciable, pero pueden ser inmovilizados o precipitados.
❖ Otros contaminantes. Compuestos organofosforados, cianuros, fenoles,
entre otros.

En la biorremediación se usan microorganismos tales como bacterias, protozoos y

hongos para degradar contaminantes en compuestos menos o no tóxicos (Agency,
2001).

ESTRATEGIAS PARA LA BIORREMEDIACIÓN DE SUELOS CONTAMINADOS

Las tecnologías de biorremediación de suelos contaminados fueron desarrolladas

para acelerar el proceso natural de la recuperación de suelos. Este efecto es
logrado mediante la optimización de la capacidad natural de microorganismos para
degradar un contaminante, proporcionando las condiciones esenciales para el
crecimiento y la biodisponibilidad del contaminante, así como la reducción del
estrés abiótico sobre la microflora (Vidali, 2001).

Se han empleado diferentes criterios a la hora de clasificar las estrategias de

biorremediación de suelos contaminados. Si la eliminación de los contaminantes
implica el uso de la microflora presente en el mismo sitio de la contaminación
(microflora endógena), la biorremediación se considera como un sistema de
tratamiento natural en el cual la acción del hombre se limita a estimular la acción
de estos agentes mediante la adición de determinados nutrientes o aire.

La estrategia más básica de biorremediación natural consiste en permitir que la

microflora autóctona actúe sobre el contaminante sin ninguna intervención (Vidali,
2001).

Por otro lado, si se determina que la microflora autóctona del suelo no es

suficientemente activa para degradar los contaminantes presentes, se hace
necesario inocular microorganismos especializados en degradar el tipo de
contaminante específico (microflora exógena) (Díaz Martínez, 2013).
Las tecnologías de biorremediación se han desarrollado para ser aplicadas in situ
o ex situ, según la necesidad de mantener condiciones ambientales apropiadas
para conseguir altas tasas de biodegradación de los contaminantes. En función de
la estrategia empleada se describen a continuación las principales tecnologías de
biorremediación de suelos.

Biorremediación in situ

Estas técnicas son generalmente las opciones más utilizadas, debido al bajo costo
y a la poca intervención del suelo, ya que el tratamiento se realiza en el lugar, se
evita la excavación y el transporte de contaminantes. Sin embargo, el tratamiento
in situ es limitado por la profundidad del suelo. El oxígeno es uno de los factores
de mayor importancia y que limita la eficacia del proceso sólo a unos cuantos
centímetros en la superficie del suelo.

Los tratamientos más importantes son (Vidali, 2001):

Bioventilación o inyección de aire

Este consiste en la ventilación forzada del suelo mediante la inyección a presión
de oxígeno en la zona edáfica no saturada mediante pozos de inyección. Debido a
la aireación del suelo, se va a favorecer la degradación de los hidrocarburos por
dos motivos: por volatilización, facilitando la migración de la fase volátil de los
contaminantes, y por biodegradación, ya que al incrementar la oxigenación del
suelo se va a estimular la actividad microbiana.

En estudios realizados para la remediación de suelos contaminados con

tricloroetileno mediante esta técnica, se demostró una elevada degradación del
contaminante (95%) (Arroyo, 2002)

Biosparging
Es un método in situ que combina el efecto de la ventilación con la utilización de
microorganismos autóctonos para degradar compuestos orgánicos adsorbidos por
el suelo en la zona saturada.
En el biosparging, el aire y los nutrientes se inyectan en la zona saturada para
mejorar la actividad de los microorganismos presentes. Esta técnica se utiliza para
la limpieza de los compuestos orgánicos en suelos y agua subterránea. Se ha
demostrado la eficiencia del biosparging para la degradación de solventes
clorados e hidrocarburos (Arroyo, 2002).

Biorremediación ex situ

Esta alternativa es más rápida, fácil de controlar y ha sido empleada con éxito
para tratar un amplio rango de contaminantes en diferentes tipos de suelos. Sin
embargo, es necesaria la excavación y el tratamiento del suelo antes y algunas
veces después de la etapa de biorremediación, por lo que presenta costos de
operación superiores a los sistemas de biorremediación in situ.

Laboreo del suelo (landfarming)

Es una técnica simple en la cual el suelo contaminado es excavado y extendido
sobre una membrana impermeable. Posteriormente, el suelo es removido
periódicamente hasta que se degradan los agentes contaminantes. El objetivo de
este tipo de tratamiento es estimular la 11 capacidad degradativa de los
microorganismos autóctonos del suelo, mediante la aireación, el control de la
humedad y la aplicación de nutrientes (et, 2007).

Compostaje
Es una técnica que involucra la mezcla del suelo contaminado con residuos
orgánicos, tales como abono y residuos agrícolas. La presencia de estos
materiales orgánicos permite el desarrollo de una población microbiana y de una
temperatura elevada. (Natalia Rodríguez Eugenio, 2019)

Biopilas
Es una mezcla entre la técnica laboreo de suelo y compostaje. Consiste en la
formación de pilas de material biodegradable de dimensiones variables, formadas
por suelo contaminado y materia orgánica (compost) en condiciones favorables
para el desarrollo de los procesos de biodegradación de los contaminantes. Estas
pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la pila, o bien de
forma pasiva, mediante tubos perforados de aireación.

Reactores con suelo en suspensión (slurry)

La biorremediación con suelo en suspensión (o fase slurry) consiste en la mezcla
de suelo contaminado con agua en un biorreactor, en el cual se adiciona
nutrientes, microorganismos y aireación. El resultado de esta mezcla es una alta
velocidad de degradación y un bajo periodo de tratamiento (Natalia Rodríguez
Eugenio, 2019).

Lombricultura
La lombricultura tuvo su origen en California, EE.UU., se extendió a Europa y
finalmente hacia el resto del mundo; aplicando normas y técnicas de producción a
la especie Eisenia foetida más comúnmente conocida como "lombriz roja
californiana". En la cual se utilizan lombrices para digerir la materia orgánica
provocando su degradación. El producto final es el 12 "lombricompuesto",
caracterizado por su excelente calidad como abono orgánico, acondicionador de
suelos o sustrato de cultivos (Diaz, 2014)

LOMBRIZ ROJA CALIFORNIANA

La lombriz roja californiana mejora la estructura del suelo, contribuye a la

descomposición de la materia orgánica y mejora el ciclo de nutrientes, además
juega un papel clave en la evaluación del riesgo eco-toxicológico terrestre. La
implementación de lombrices para la biorremediación es una técnica novedosa
que ha mostrado que las capacidades de asimilación de metales por vía digestiva
es prácticamente independiente del pH del suelo.

A través de las secreciones mucilaginosas y la transformación de materia

orgánica, las lombrices incrementan la actividad microbial y la disponibilidad de los
nutrientes, de igual manera se ha reportado que las lombrices pueden estimular
las bacterias, hongos y especies relacionadas con la degradación del
pentaclorofenol.
La lombriz tiene la capacidad de asimilar elevadas concentraciones de algunos
compuestos protóxidos y metales (Cu, Fe, Cd, Pb, Zn), sin observarse síntomas
aparentes de intoxicación a corto plazo.

Contaminantes biodegradables

Los contaminantes biodegradables son aquellos que se pueden descomponer por

medio de la interferencia o presencia de organismos vivos, los cuales ayudan en
dicho proceso metabolizando los contaminantes presentes.

Dentro del sistema utilizado las grasas presentes en este mismo serian
consideradas uno de los contaminantes biodegradables ya que estos pueden ser
metabolizados por medio de la lombriz roja californiana, la cual al consumir dicho
contaminante dará como resultado la producción de humus, ver ilustración 1.

Ilustración 1 Alimentos que puede metabolizar la lombriz

 PROCEDIMIENTOS
A continuación, se mostrará por medio de diagramas de flujo los procedimientos
utilizados para la elaboración de cada una de las pruebas correspondientes para
la obtención de los resultados esenciales en la evaluación de la lombricomposta.

pH

El pH es una propiedad química del suelo que tiene un efecto importante en el

desarrollo de los seres vivos (incluidos microorganismos y plantas). La lectura de
pH se refiere a la concentración de iones hidrógeno activos (H+) que se da en la
interface líquida del suelo, por la inter-acción de los componentes sólidos y
líquidos. La concentración de iones hidrógeno es fundamental en los procesos
físicos, químicos y biológicos del suelo. El grado de acidez o alcalinidad de un
suelo es determinado por medio de un electrodo de vidrio en un contenido de
humedad específico o relación de suelo-agua, y expresado en términos de la
escala de pH. El valor de pH es el logaritmo del recíproco de la concentración de
iones hidrógeno, que se expresa por números positivos del 0 al 14.Tres son las
condiciones posibles del pH en el suelo: la acidez, la neutralidad y la alcalinidad.

Materiales y Equipos
● Muestra de suelo.
● Balanza analítica.
● Vasos de precipitado de 250 ml.
● Pipeta de 10 ml.
● Piceta con agua destilada.
● Potenciómetro.
● Agua destilada.
● Solución amortiguadora de pH 7 y 4.
● Agitadores magnéticos
Diagrama de flujo

Pesar 10g de Añadir 50ml de

Inicio
muestra agua destilada.

Ajustar el
potenciómetro con
las soluciones
Reposar 5min Agitar 15 min
amortiguadoras.

Pasados los 5
minutos, medir el Registrar
Finalizado
pH con el lectura
potenciómetro.

Criterios de Evaluación

Tabla 1 Criterios de evaluación de un suelo con respecto a su pH (NOM-021-REC-NAT-2000).

HUMEDAD

El agua es esencial para todos los seres vivos porque en forma molecular participa
en varias reacciones metabólicas celulares, actúa como un solvente y portador de
nutrimentos desde el suelo hasta las plantas y dentro de ellas. Además,
intemperiza las rocas y los minerales, ioniza los macro y micronutrientes que las
plantas toman del suelo, y permite que la materia orgánica sea fácilmente
biodegradable. El contenido de agua en el suelo puede ser benéfico, pero en
algunos casos también per-judicial. El exceso de agua en los suelos favorece la
lixiviación de sales y de algunos otros compuestos; por lo tanto, el agua es un
regulador importante de las actividades físicas, químicas y biológicas en el suelo
(ALECÓDIGO, 2013).

Aunque es recomendable determinar la humedad a la capacidad decampo de los

suelos, es decir, la cantidad de humedad que un suelo retiene contra la gravedad,
cuando se deja drenar libremente; en algunas ocasiones, cuando se trata de
suelos contaminados, por ejemplo con hidrocarburos del petróleo, es difícil llevar a
cabo esta medición por la dificultad de rehidratar suelos secos con estas
características. Por lo que la medición de humedad se realiza sólo en función del
porcentaje de agua que retiene este tipo de suelos.

Material y equipo
● Muestras de suelo.
● Balanza analítica.
● Espátula.
● Crisol.
● Estufa.
Diagrama de flujo

Ya que este a
peso contante,
Pesar Meter al
Inicio sacar del horno
crisoles horno 24Hr y meter al
desecador.

Sacar del
Pesar el
horno poner Meter al Agregar 20g
crisol y anotar
en el horno 24Hr de muestra
peso.
desecador.

Pesar el
crisol con
muestras y Finalizado
anotar peso.

Cálculos
% Humedad del suelo = (Peso inicial – Peso final)/ Peso inicial * 100

CENIZA
Las cenizas representan la fraccion correspondiente a los minerales en la muestra
de suelo. Para su determinacion de toma cierta cantidad de muestra previamente
pesada y se combustiona totalmente en una mufla u horno a 550 ℃ toda
inorganicos. A esta temperatura se produce perdida de ciertos minerales como Ca
y el P, y la volatizacion de otros como Na, K Y Cl. La fraccion resultante se
denomina ceniza.

Una vez determinada la materia seca (MS) y la ceniza, se puede obtener el

contenido de Materia Organica (MO) como:

MO: MS- Cenizas

Aparatos y Equipo
● Balanza granataria con sensibilidad de 0.1 g
● Mufla
 ● Crisol de porcelana o platino de 50 cm3
● Desecador que contenga algún deshidratante adecuado con indicador de
saturación

Diagrama de flujo

Pesar 1 a 2 gr
Precalentar
Inicio de muestra
Mufla
seca

Meter crizol en Dejar 2 a 3

Pesar
desecador horas

Registrar
Finalizado
resultados

Cálculos

GRASAS Y ACEITES

Algunos aceites crudos y aceites de combustibles pesados contienen un

porcentaje significativo de materiales que no son solubles en n-Hexano y las
recuperaciones de estos materiales pueden ser bajas.

Materiales y Equipo
 ● Goldfish ● Probeta
● Porta muestra ● Hexano al 95%
● Vaso goldfish ● Espátula.
● Balanza granataria con ● Estufa
sensibilidad de 0.1 g ● Papel filtro

Diagrama de flujo

Pesar 5 gr Pesar el Agregar en

Inicio de muestra vaso papel filtro al
seca GOLDFISH porta muestra

El proceso termina Abrir el flujo

cuando el disolvente Verificar Agregar 40ml
de agua y
en el cuerpo central una vez de hexano en
del Goldfish esta conectar la
montaje del el vaso
completamente fuente de GOLDFISH
equipo
transparente. calor

Terminado la Llevar al horno el

Recuperado el
extracción se vaso del goldfish a
solvente, retirar la
recupera el solvente la para eliminar
en momentos antes muestra de la pieza
residuos del hexano
de que sifonee. media del equipo.
que pudieron quedar

Pesar y hacer
Realizar anotaciones
Finalizado
calculos del peso final.

Cálculos
NITRÓGENO TOTAL

El nitrógeno es un elemento indispensable para la vida, forma parte de las

principales biomoléculas de todos los seres vivos. Es también uno de los
elementos más abundantes de la Tierra, pues en su forma gaseosa (N2)
constituye 78% de la atmósfera. Sin embargo, la cantidad de nitrógeno presente
en muchos suelos es escasa, debido a su propia dinámica y a su ciclo
biogeoquímico.
El nitrógeno puede llegar al suelo gracias a los aportes de materia orgánica y a la
fijación bacteriana a partir del aire. Dentro del suelo es aprovechado por las
plantas, animales y microorganismos que lo incorporan a sus tejidos. Cuando
dichos organismos se mueren, el nitrógeno reingresa al suelo completando el
ciclo. Este ciclo es complejo e involucra una serie de reacciones y organismos con
diferentes metabolismos.
Siempre comienza con compuestos orgánicos sencillos (NH4+, NO2-, NO3-, N2,
NH3) y termina con compuestos orgánicos complejos; que a través de la
descomposición regresan a la etapa de compuestos sencillos. En los
microorganismos la carencia de nitrógeno puede afectar el crecimiento, por lo que
la población microbiana no tendrá un desarrollo óptimo. En contraste, demasiado
nitrógeno permite el crecimiento microbiano rápido y acelera la descomposición;
pero puede crear problemas de olor en condiciones anaerobias. Además, el
exceso de nitrógeno puede ser liberado como amoniaco; en tanto que el nitrógeno
aprovechable escapará en forma de gas. Para la mayoría de los materiales una
relación C/N cercana a 10:1 mantendrá estos elementos en equilibrio aproximado.
En los suelos normalmente el contenido de nitrógeno varía de 0.05 a 2% en sus
diferentes formas.

Material y equipo
● Muestra de suelo seco y ● Matraces Erlenmeyer de 1 L.
molido con un mortero. ● Perlas de ebullición.
● Balanza analítica. ● Pipeta.
● Matraces Kjeldahl. ● Destilador.
● Vasos de precipitados. ● Bureta.
● Probetas. ● Soporte universal con pinza.
● Digestor.Matraz aforado de 1
L.
Diagrama de Flujo

agregar a
Pesar 1g de
Incio matraz
muestra
Kjeldahl

Agregar 10g Agregar 10g

Añadir 25ml de
de sulfato de de sulfato de
acido sulfurico
sodio cobre

Esperar que la
Agregar perlas Colocar en
solucion tome
de vidrio digestor
color verde

Agregar 4
granulos de Añadir 400 ml
zink y 500ml de agua Enfriar
de hidroxido destilada
de sodio.

Titular con
Destilar hasta
acido Finalizado
300ml
clorihidrico .1N

Cálculos
Calcular la concentración de nitrógeno, sustituyendo en la siguiente formula:
 RESULTADOS PRELIMINARES

pH

Pesar 10 gr de muestra Agregar 50ml de agua

Agitar durante 15 min y Medir el pH con el

dejar en reposo 5 min. potenciometro

Ph = 5.24

Húmedad

Pesar crisol Pesar muestra

Meter al horno Peso final

71.153−64.996
%H = × 100=8.65 %
71.153
Cenizas

Pesar crisol Pesar muestra

Meter la mufla Peso final

30.7080−28.7787
%Ceniza= ×100=96.4 %
2.0005
Grasas y Aceites

Pesar vaso Preparacion de muestra Peso de muestra

ajustar el vaso ya con el terminando el proceso

Montando equipo
hexano agregado meter al horno

Peso final

%Grasas= 9.74%

Temperatura

T=30℃
En la siguiente tabla se muestran los resultados obtenidos en las últimas pruebas
realizadas en el suelo que se encuentra en biorremediacion por medio del uso de
la lombricomposta.

pH Temperatura Humedad Ceniza Grasas

5.24 30℃ 8.65% 96.4 9.74%

pH Temperatura Humedad Ceniza Grasas

5.24 30℃ 8.65% 96.4 9.74% Inicial

5.60 28℃ 37.79% --- 0.80% Superficie

5.78 31℃ --- --- 0.60% Humus

6.12 30℃ --- --- 0.38% Lixiviado

6.44 30℃ --- --- --- ---

7 29℃ --- --- --- ---

7 30℃ --- --- --- ---

7.20 33℃ --- --- --- ---

Pruebas Resultados Parámetros

pH 7.2 5.5-8.5
Humedad 8.65% 37.79% 20% a 40%
Grasas y 9.74% 0.80% 0.60% 0.38% ------
 aceites

BIBLIOGRAFIA

Agency, U. S. (2001). Obtenido de https://stateimpactcenter.org/?

gclid=Cj0KCQjw8amWBhCYARIsADqZJoVGIaAtyusKLc7VUot2QtYN2BBdSsJecVLArd--
ya8EkHT1xRIUixwaAsmrEALw_wcB

ALECÓDIGO, C. L. (2013). Contaminacion De Suelos. Obtenido de

https://www.buenastareas.com/ensayos/Contaminacion-De-Suelos/7765365.html

Arroyo, E. y. (2002). El papel de los microorganismos en la biodegradación de compuestos tóxicos.

ECOSISTEMAS , 12.

Atlas, R. y. (1999). Biorremediación en suelos contaminados. Obtenido de

file:///C:/Users/SARITA/Downloads/Dialnet-
BiorremediacionEnSuelosContaminadosConHidrocarburo-5344956.pdf

Beltran, M. (2018). Biorremediación de los recursos Naturales. Recuperado el 01 de 07 de 2022, de

https://inta.gob.ar/sites/default/files/libro_biorremediacion_de_los_recursos_naturales_
1.pdf

Díaz Martínez, M. E. (2013). Casuarina equisetifolia (Casuarinaceae) growth in soil with diesel and
application of biostimulation and bioaugmentation. Revista de Biología Tropical, 73.
Diaz, E. (2014). Guia de lombricompostaje y alternativas emprendedoras. Obtenido de
https://es.slideshare.net/ValeriaChapeton/lombricultivo-1-1

et, S. (2007). CONTAMINACIÓN DE MANGLARES POR HIDROCARBUROS Y ESTRATEGIAS DE

BIORREMEDIACIÓN, FITORREMEDIACIÓN Y RESTAURACIÓN. Revista Internacional de
Contaminación.

Natalia Rodríguez Eugenio, M. M. (2019). LA CONTAMINACIÓN DEL SUELO: UNA REALIDAD

OCULTA. Obtenido de https://www.fao.org/3/i9183es/i9183es.pdf

VELASCO, J. A. (2002). El composteo:Una alternativa tecnologica de biorremediacion en suelo de

México. Obtenido de https://www.redalyc.org/pdf/539/53906604.pdf

Vidali. (2001). Bioremediation: An overview. Journal of Applied Chemistry.