Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
com
MANUAL DE INSTRUCCIONES
Reflejos
• Aislamiento simple y de alto rendimiento (96 pocillos) de ADN de todo tipo de hongos difíciles de lisar (p. ej., levaduras) y
bacterias en tan solo 40 minutos.
Contenido
Teléfono: (949) 679-1190 ▪ Línea gratuita: (888) 882-9682 ▪ Fax: (949) 266-9452 ▪ info@zymoresearch.com ▪ www.zymoresearch.com
Página 1
1-888-882-9682.
Tampón BashingBead™ (2) 40ml Temperatura ambiente.
Manual de instrucciones 1 -
Nota-La integridad de los componentes del kit está garantizada hasta por un año a partir de la fecha de compra. Los reactivos se prueban de forma
rutinaria lote a lote para garantizar que proporcionen el máximo rendimiento y confiabilidad.
Para un rendimiento óptimo, agregue beta-mercaptoetanol al 0,5 % (v/v), es decir, 750 µl por 150 ml.
1
2 Es posible que se haya formado un precipitado en el tampón de prelavado de ADN durante el envío. Para resuspender completamente el
tampón, incube la botella a 30 – 37 ºC durante 30 minutos y mezcle por inversión. NO MICROONDAS.
Especificaciones
• Fuentes de muestra–10-20 mg (peso húmedo) hongos o bacterias. Esto equivale a aproximadamente 2x108
células bacterianas y 2x107levadura. También se pueden tomar muestras de esporas, polen, nematodos, otros
microorganismos.
• pureza del ADN–El ADN de alta calidad se eluye conTampón de elución de ADNhaciéndolo perfecto para PCR
(A260/A280> 1.8).
•
Nota - ™ Marcas registradas de Zymo Research
Corporation. Este producto es solo para uso de Recuperación de ADN–Por lo general, se eluyen hasta 5 µg de ADN total en 100 µl (25 µl como mínimo)Tampón de
investigación y solo debe ser utilizado por
elución de ADNpor muestra.
profesionales capacitados. No está diseñado
para su uso en procedimientos de diagnóstico.
•
Algunos reactivos incluidos con este kit son
irritantes. Tener puesto Equipo–Centrífuga con portadores de microplacas, placa de 96 pocillos/disruptor de bloques o pulverizador
guantes de protección y protección para los ojos. Siga
las pautas y reglas de seguridad promulgadas por su
institución o centro de investigación. 2010
GenoAmoladora-es una marca registrada de Spex
SamplePrep-, Sociedad de responsabilidad limitada
Teléfono: (949) 679-1190 ▪ Línea gratuita: (888) 882-9682 ▪ Fax: (949) 266-9452 ▪ info@zymoresearch.com ▪ www.zymoresearch.com
Página 2
Teléfono: (949) 679-1190 ▪ Línea gratuita: (888) 882-9682 ▪ Fax: (949) 266-9452 ▪ info@zymoresearch.com ▪ www.zymoresearch.com
Página 3
Protocolo
Para un rendimiento óptimo, agregue beta-mercaptoetanol (suministrado por el usuario) alTampón de lisis
genómicaa una dilución final de 0,5% (v/v), es decir, 750 µl por 150 ml.
1Esto equivale a 1. Agregue 10-20 mg (peso húmedo) de células bacterianas/fúngicas1que se han resuspendido en hasta 50
aproximadamente 2x108 µl de agua o tampón isotónico (p. ej., PBS) en los tubos de unGradilla de lisis ZR BashingBead™ (0,1 y
células bacterianas y 2x107
0,5 mm). Añadir 400 µlTampón BashingBead™a cada tubo. Tapar los tubos herméticamente para
células de levadura.
evitar fugas.
2. Asegúrelo en un batidor de microesferas de placas/bloques de 96 pocillos (p. ej., GenoGrinder 2010).®) y procesar muestras. La
optimización del tiempo/velocidad de procesamiento será necesaria paracompleto lisis de la muestra.
.
Nota:Los tiempos de procesamiento pueden ser de tan solo un minuto cuando se utilizan batidores de perlas de alta velocidad (p. ej., 2000
GenoGrinder-, página 4). Consulte la documentación del fabricante para obtener información operativa específica.
3. Centrifugue la gradilla de lisis ZR BashingBead™ (0,1 y 0,5 mm) a ≥ 3000 xgramo(5000xgramomáx.) durante 5
minutos.
5. Añadir 750 µl deTampón de lisis genómicaal sobrenadante en el bloque de 96 pocillos del paso 4. Cubrir
completamente conLámina de cubiertay mezcle bien mediante un bloque de vórtex durante 2 minutos.
Centrifugar el bloque de 96 pocillos a ≥ 3000 xgramo(5000xgramomáx.) durante 5 minutos.
2Tenga cuidado de evitar pipetear 6. Retire o perfore el papel aluminio y transfiera 500 µl de los pocillos del Paso 5 a los pocillos2de un Placa
residuos que puedan obstruir los Silicon-A™,montado en unPlaca de colección. Centrifugar el conjunto a ≥ 3000 xgramo (5,000xgramo
pocillos de la placa Silicon-A™.
máx.) durante 5 minutos.
8. Añadir 200 µlTampón de prelavado de ADNa los pocillos de la placa Silicon-A™, montada en la
placa de recogida vacía, y centrifugue el conjunto a ≥ 3000 xgramodurante 5 minutos.
9. Añadir 500 µlTampón de lavado g-DNAa los pozos de la placa Silicon-A™ en la placa de recolección y
centrifugue el ensamblaje a ≥ 3,000 xgramodurante 5 minutos.
10. Transfiera la placa Silicon-A™ a unPlaca de elucióny añadir 100 µl (25 µl mínimo)Tampón de elución de
ADNdirectamente a las matrices en la placa. Centrifugar el conjunto a ≥ 3000 xgramo durante 5
minutos.
El ADN ultrapuro eluido ahora está listo para usar en sus experimentos, o elPlaca de eluciónse puede cubrir con
Lámina de cubiertapara el almacenamiento del ADN.
Teléfono: (949) 679-1190 ▪ Línea gratuita: (888) 882-9682 ▪ Fax: (949) 266-9452 ▪ info@zymoresearch.com ▪ www.zymoresearch.com
Página 4
Teléfono: (949) 679-1190 ▪ Línea gratuita: (888) 882-9682 ▪ Fax: (949) 266-9452 ▪ info@zymoresearch.com ▪ www.zymoresearch.com